【正文】 本卷第 29 頁（ 共 43 頁） ③ 用子葉深綠與子葉淺綠植株雜交得 F1， F1隨機交配得到的 F2成熟群體中， B基因的基因頻率為 _________。 【答案】（ 8分） （ 1）逆 （反） 轉(zhuǎn)錄 （ 2）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶、限制性內(nèi)切酶） DNA連接酶（兩空可以互換） （ 3）細胞融合 雜交瘤細胞 （ 4） A蛋白 核酸 （基因）序列 抗 A蛋白的單克隆抗體 【解析】 本題以圖展示了疫苗的生產(chǎn)和單克隆抗體的制備的過程，考察了中心法則、基因工程、動物細胞工程等現(xiàn)代生物科技。載體上的抗性基因主要是有利于篩選含重組 DNA的細胞，不能促進目的基因的表達。 （ 7）為了從 cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體 ，然后在 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。所以答案 A。 2020 福建 32.[生物 現(xiàn)代生物科技專題 ]（ 10 分）紅細胞生成素（ EPO）是體內(nèi)促進紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。 （ 6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用 （填字母代號）技術(shù)。圖中 tetR表示四環(huán)素抗性基因， ampR表示氨芐青霉素抗性金銀， BamHI、 HindIII、 SmaI 直線所示為三種限制酶的酶切位點。（ 9分） 取同種生物的不同類型細胞，檢測其基因表達，結(jié)果如右圖。 本卷第 22 頁（ 共 43 頁） （ 2）在“試管?！钡呐嘤^程中，要使精子和卵母細胞在體外成功結(jié)合，需要對精子進行處理，使其 。下圖是通過胚胎工程培育試管牛的過程。 (4)細胞離體培養(yǎng)時通常表現(xiàn)出：貼壁生長和接觸抑制，多孔的中空薄壁小玻璃珠能 增大貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量 . 2020山東 35.（ 8分）【生物 — 現(xiàn)代生物科技專題】 人類疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型常用于致病機理的探討及治療藥物的篩選。 （ 2）為使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達，需要把來自 cDNA文庫的干擾素 基因片段正確插入表達載體的 _________和 ___________之間。（可多選） A． X－ 1 B． X－ 2 C． X－ 3 D． X－ 4 59．若將上圖所示 X－ X－ X－ X－ 4 四種質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，然后分別涂布在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上。 （ 3） 將 S基因分別插入到 A、 B基因的緊鄰位置（如圖 11），將該純合的轉(zhuǎn)基因雄蚊釋放到野生型群體中，群體中蚊子體內(nèi)病毒的平均數(shù)目會逐代 _________，原因是 _______________。 【答案】 (16分 ) （ 1） 頂芽；生長素 （ 2） （一定濃度的）除草劑 p] （ 3） （一定濃度的）鹽 （ 4） 野生型 （ 5）降低 （ 6）突變體； DNA連接酶； B、 C 2020 廣東 27.（ 16 分）登革熱病毒感染蚊子后，可在蚊子 唾液腺中大量繁殖。（ 1）為促進植株側(cè)枝發(fā)育以形成更多的花蕾，需要去除 ，因為后者產(chǎn)生的 會抑制側(cè)芽的生長。 （ 2）在對胎兒進行鐮刀 型 細胞貧血癥的產(chǎn)前基因診斷 時，要先從羊水中的胎兒細胞提取物質(zhì)③ 進行 PCR 擴增。 某同學(xué)設(shè)計的兩組引物（只標注了部分堿基序列） 都不合理（如下圖），請分別說明理由。（ 2）目的基因與運載體（質(zhì)粒）結(jié)合形成重組質(zhì)粒；質(zhì)粒上有抗生素 kan 抗性基因，導(dǎo)入了質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒的農(nóng)桿菌都能在含抗生素 kan的培養(yǎng)基上生長；擬南芥 T基因控制其種皮深褐色。（２）圖中①應(yīng)為 。此外也可以從基因文庫中獲取目的基因，也可通過 PCR方法獲取目的基因。因此，可將丙種蛋白質(zhì)基因轉(zhuǎn)入到甲種農(nóng)作物體內(nèi)，使甲種農(nóng)作物獲得抗乙種昆蟲危害的能力。 （ 6）為獲得更多的轉(zhuǎn)基因母豬，可以采用體細胞克隆技術(shù)，將純合轉(zhuǎn)基因母豬的體細胞核注入去核卵 細胞，構(gòu)成重組胚胎進行繁殖。 【答案】（ 1）不能 0 （ 2） XHXh，遺傳圖解如下： 在 III3 形成卵細胞過程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因 H 的姐妹染色單體移向細胞的同一極，形成 XHXH卵細胞， XHXH卵細胞與正常精子結(jié)合形成 XHXHY 受精卵。 （ 7） 現(xiàn) III3 再次懷孕，產(chǎn)前診斷顯示胎兒（ IV3）細胞的染色體為 46， XY； F8 基因的 PCR 檢測結(jié)果如圖 2 所示。 【試題點評】本題主要考查選修 3 中有關(guān)基因工程和細胞工程中的知識，涉及的知識點主要有表達載體的構(gòu)建 .目的基因的檢測 .動物細胞培養(yǎng)等。 （２）進行過程 ② 時，需用 酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。學(xué)生必須具備很好的識圖、分析推理能力才能成功作答。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因 D 不能正確表達，其最可能的原因是 。 2020 江蘇 32.（ 9分）圖 1 表示含有目的基因 D 的 DNA片段長度（ bp即堿基對）和部分堿基序列，圖 2 表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。 （三）推測結(jié)論： ________。據(jù)圖 11 推測， Y基因突變?yōu)?y 基因的原因是發(fā)生了堿基對的 _______和 _______。若 pZHZ2 進入細胞后插入在一條染色體 DNA 上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子山羊的方式是 __________。 2020 上海 55．如圖 18 所示，若用兩種識別切割序列完全 不同的限制酶 E 和 F 從基因組 DNA 上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒 pZHZ1(， 1kb=1000 對堿基 )上相應(yīng)的 E—F區(qū)域 ()，那么所形成的重組質(zhì)粒 pZHZ2___________。 （ 2） 為使運載體與目的基因相連，不同的限制酶應(yīng)切割出相同的黏性末端，它們必須要能識別相同的核苷酸序列，并且使每條鏈中相同的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。 （ 2） 質(zhì)粒 運載體用 EcoRⅠ 切割后產(chǎn)生的片段如下： 為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的 DNA 除可用 EcoRⅠ 切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點是 。 ③ 經(jīng)測定，某污染飼料中 AFB1 含量為 100μ g/kg ，則每千克飼料應(yīng)添加 5 克 AFB1解毒酶． AFB1的殘留量最少，解毒效果最好．繼續(xù)添加 AFB1 解毒酶解解毒效果不變，因此節(jié)約了成本。版網(wǎng) ] ( 1 ) 黃曲霉毒素 B1（ AFB1）是化學(xué)物質(zhì)， AFB1 屬于化學(xué)類致癌因子。 （ 5）采用蛋白質(zhì)工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高每的活性出發(fā)，設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的 序列。 ，在 DNA復(fù)制中， G 39。 （ 3） DNA要構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要用限制性 核酸 內(nèi)切酶切割，再與質(zhì)粒重組。以下實例本卷第 2 頁（ 共 43 頁） 為體外處理“蛋白質(zhì) DNA復(fù)合體”獲得 DNA片段信息的過程圖。 【答案】（ 1）質(zhì)粒 ； DNA連接酶 （ 2）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） ； 維持培養(yǎng) 基（ 液 ） 的 PH 穩(wěn)定 （ 3）促性腺激素 （或促濾泡素，孕馬血清）； 去核 （ 4） （ 早期 ） 胚胎培養(yǎng) 胚胎分割 【解析】熟練掌握基因工程和胚胎工程的基本知識就能解答本題 . （ 1）運載工具（體）包括質(zhì)粒、噬菌體衍生物及動植物病毒 ,其 中質(zhì)粒是主要運載體 。獲得轉(zhuǎn) KIFII基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程如圖。成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行 ____________處理。 （ 4）把重組細胞培養(yǎng)到早期胚胎叫早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)；在胚胎移植前，通過胚胎分割技術(shù)可獲得較多胚胎。 （ 5）以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有 （多選） ，用蛋白酶酶解后提 取 rRNA ，提取葉綠體基粒膜上的光合色素 C．通過分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標記的目的基因進行染色體定位 D．將抑制成熟基因?qū)敕?，?mRNA 與催化成熟酶基因 的 mRNA 互補結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實成熟。某些微生物能表達 AFB1解毒酶．將該酶添加在飼料中可以降解 AFB1，清除其毒性。實驗設(shè)計及測定結(jié)果見下表： 據(jù)表回答問題： ① 本實驗的兩個自變量，分別為 。 [來源 : 中 amp。 （ 3）① 在甲、乙條件下培養(yǎng)含 AFB1 解毒酶基因的菌株．經(jīng)測定．甲菌液細胞密度小、細胞含解毒酶：乙菌液細胞密度大、細胞不含解毒酶．過程 l 應(yīng)選擇甲菌液的細胞提取總RNA ，理由是因為甲菌液細胞含解毒酶，意味著完成了基因的表達，所以應(yīng)選擇甲菌液的細胞提取總 RNA ② 過程Ⅱ中，根據(jù)圖示，可以看出與引物結(jié)合的模版是 cDNA. ③ 檢測酵母菌工程菌是否合成了 AFB1 解 毒酶，檢測對象為蛋白質(zhì)，應(yīng)采用抗原 抗體雜交方法?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍玫瑰，下列操作正確的是（ ） mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補的 DNA，再擴增基因 B 基因 B DNA聚合酶將基因 B 與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細胞 B 直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細胞 【解析】提取矮牽牛藍色花的 mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到 DNA，然后擴增，可獲得大量的基因 B， A正確；從基因文庫中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫中的信息進行篩選對比即可，不需要用限制酶進行切割， B 錯誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用本卷第 5 頁（ 共 43 頁） DNA連接酶，而不是 DNA聚合酶， C 錯誤；目的基因需要和運載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入，而且應(yīng)該用農(nóng)桿菌進行感染，而不是大腸桿菌， D 錯誤。 （ 6）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是 。 （ 6） 大腸桿菌細胞外有細胞壁和細胞膜，能阻止其他物質(zhì)的進入，只能通過 Ca2+處理細胞，使細胞處于能吸收周圍環(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)細胞。重組質(zhì)粒中 G 的切割位點距 E 的切割位點 ，單獨用限制酶 G 切割后產(chǎn)生 和 的兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中除了圖中標示出來的 G 酶識別位點外，還有一個 G酶識別位點； H 的酶切位點距 ，用 H單獨酶切產(chǎn)生 兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中含有另外一個 H的酶切位點，根據(jù)題中信息提示 “將目的基因內(nèi)部的限制酶 G和 H的識別位點標 注在圖 19中 ”，可確定在 EF 之間分別含有 G和 H的一個識別位點。 （ 1） 在黑暗條件下，野生型和突變型豌豆的葉片總?cè)~綠素含量的變化見圖 10。 （一）培育轉(zhuǎn)基因植株： Ⅰ ．植株甲：用含有空載體的農(nóng)桿菌 感染 ________的細胞，培育并獲得純合植株。欲通過轉(zhuǎn)基因?qū)嶒烌炞C Y 基因 “能使子葉由綠色變?yōu)辄S色 ”的功能，首先應(yīng)培育純合的常綠突變植株 y2，然后用含有 Y 基因的農(nóng)桿菌感染純合的常綠突變植株 y2，培育出含有目的基因的純合植株觀察其葉片顏色變化。從雜合子中分離出圖 1 及其對應(yīng)的 DNA片段，用限制酶 Sma I 完全切割，產(chǎn)物中共有 種不同長度的 DNA片段。因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個末端都能進行互補，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運載體上的情況，導(dǎo)致基因 D 不能正確表達。該基因工程技術(shù)基本流程如圖１。 （ 2）過程 ② 表示動物細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個的細胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進行傳代培養(yǎng)。 （ 2）兩個家系的甲型血友病均由凝血因子 VIII（簡稱 F8，即抗血友病球蛋白）基因堿基對缺失所致。要使乳腺細胞合成 F8，構(gòu)建表達載體時，必須將 F8基因 cDNA與豬乳腺蛋白基因的 等調(diào)控組件重組在一起。 （ 4）采用凝膠色譜法從血液中分離純化 F8 時，在凝膠裝填色譜柱后，需要用緩沖液處理較長時間，其目的是洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密；若 F8 比某些雜蛋白先收集到，說明 F8 的相對分子質(zhì)量較這些雜蛋白較大。 【試題點評】本題考查對傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用、微生物的培養(yǎng)和植物培養(yǎng)技術(shù)中無菌操作的掌握。 （ 4）若用含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌直接感染甲種農(nóng)作物植株葉片傷口，則該植株的種子 （填 “ 含有 ” 或 “ 不含 ” ）丙種蛋白質(zhì)基因。 2020重慶 31. （ 16分）擬南芥是遺傳學(xué)研究的模式植物，某突變體可用于驗證相關(guān)的基因的功能。對題干信息的獲取、理解以及對陌生材 料的快速適應(yīng)將是考生的最大障礙。 ①從理論上推測，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有 引物 A的 DNA片段所占的比例為 。在他們欲生育第二胎時，發(fā)現(xiàn)妻子的雙 側(cè)輸卵管完全堵塞，不能完成體內(nèi)受精。 【答案】 (10分 ) （ 1） 精子獲能；胚胎移植 （ 2） DNA；限制酶 （ 3） 正常 2020北京 31.（ 16分） TDNA可隨機插入植物 基因組內(nèi)，導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變。 本卷第 18 頁（ 共 43 頁） （ 5）若上述 TDNA的插入造成了基因功能喪失，從該突變體