【正文】 3）限制性 核酸 內(nèi)切酶 （ 4）啟動(dòng)子 （或轉(zhuǎn)錄起始區(qū)） （ 5） A、 C、 D 【解析】（ 1） DNA酶作用的部位是 DNA的磷酸二酯鍵，蛋白酶作用的部位是肽鍵。 （ 2） ① 、 ② 兩過(guò)程利用了酶的 特性。 【試題評(píng)價(jià)】本題考查了基因工程的操作工具、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程和條件、超數(shù)排卵的方法 、核移植技術(shù)、胚胎工程中早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等知識(shí)，基礎(chǔ)性強(qiáng)，難度不大。 （ 2）分散皮膚組織塊成單個(gè)細(xì)胞使用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）。 （ 4）從重組細(xì)胞到早期胚胎過(guò)程中所用的胚胎工程技術(shù)是 ______________________。 （ 2）在過(guò)程 ② 中，用 __________處理將皮膚組織塊分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。本卷第 1 頁(yè)（ 共 43 頁(yè)） 2020高考生物歷年真題考點(diǎn)知識(shí)專(zhuān)題分類(lèi)精析精解匯編 基因工程的原理及技術(shù) 本卷整理：【吉】七七（李偉 吉林省舒蘭市第二中學(xué)） 2020 山東 3（ 8 分）【生物 —現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】 毛角蛋白 II 型中間絲（ KIFII）基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)。在培養(yǎng)過(guò)程中，將成纖維細(xì)胞置于 5%CO2的氣體環(huán)境中， CO2的作用是 ________________。在胚胎移植前，通過(guò) ____________技術(shù)可獲得較多胚胎。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中， CO2的作用是維持培養(yǎng)液 pH 的相對(duì)穩(wěn)定。 2020 天津 7.（ 13 分）生物分子間特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。 （ 3）若將得到的 DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過(guò)程 ③ 的測(cè)序結(jié)果與 酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比， 以 確定選用何種酶。 （ 2） ①② 過(guò)程利用了各種酶催化一種或一類(lèi)化學(xué)反應(yīng)的特性，即專(zhuān)一性。 【試題點(diǎn)評(píng)】本題考查了基因工程的想過(guò)知識(shí)，主要考查學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解和應(yīng)用能力，難度較小。 ( 2 ) AFB1 能結(jié)合在 DNA 的 G 上，使該位點(diǎn)受損傷變?yōu)?G 39。 （ 3）下圖為采用基因工程技術(shù)生產(chǎn) AFB1解毒酶的流程圖 據(jù)圖回答問(wèn)題： ① 在甲、乙條件下培養(yǎng)含 AFB1解毒酶基因的菌株，經(jīng)測(cè)定，甲菌液細(xì)胞密度小、細(xì)胞含解毒酶：乙菌液細(xì)胞密度大、細(xì)胞不含解毒酶．過(guò)程 l 應(yīng)選擇 菌液的細(xì)胞提取總RNA ，理由是 ② 過(guò)程Ⅱ中，與引物結(jié)合的模版是 ③ 檢測(cè)酵母菌工程菌是否合成了 AFB1解毒酶，應(yīng)采用 方法。 ③ 經(jīng)測(cè)定，某污染飼料中 AFB1含量為 100μ g/kg ，則每千克飼料應(yīng)添加 克 AFB1解毒酶．解毒效果最好．同時(shí)節(jié)的了成本。 【解析】黃曲霉毒素 B1 （ AFB1）存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過(guò)食物鏈進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)并蓄積，引起瘤變。 育出 amp。會(huì)與 A配對(duì)。 ② 本實(shí)驗(yàn)中．反映 AFB1 解毒酶的解毒效果的對(duì)照組是 B 組。難度適中。 2020 新課標(biāo) 根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題： （ 1）限制性?xún)?nèi)切酶切割ＤＮＡ分子后產(chǎn)生的片段，其末端類(lèi)型有 和 。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用 技術(shù)。coli T4 （ 4） mRNA（或 RNA） cDNA （或 DNA） PCR （ 5） 噬菌體 動(dòng)植物病毒 （ 6） 未 處理 的 大腸桿菌吸收 質(zhì)粒（外源 DNA）的能力極弱 【解析】 （ 1）當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線(xiàn)兩側(cè)將 DNA 的兩條鏈分別切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端，而當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線(xiàn)處切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的則是平末端。 [來(lái)源 :中 .教 .網(wǎng) z. z. ] （ 4） 反轉(zhuǎn)錄是以 RNA為模版來(lái)合成 DNA的過(guò)程。難度較小。若分別用限制酶 G 和 H 酶切兩份重組質(zhì)粒 pZHZ2 樣 品，據(jù)表 4 所列酶切結(jié)果判斷目的基因的大小為 kb；并將目的基因內(nèi)部的限制酶 G 和 H 切割位點(diǎn)標(biāo)注在圖 19 中。 2020 上海 57．若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2 導(dǎo)入至山羊的 ______細(xì)胞中。 2020 廣東 28．（ 16 分）子葉黃色（ Y，野生型）和綠色（ y，突變型）是孟德?tīng)栄芯康耐愣瓜鄬?duì)性狀之一。 （ 2） Y基因和 y基因的翻譯產(chǎn)物分別是 SGRY蛋白 和 SGRy蛋白，其部分氨基酸序列見(jiàn)圖 11。 （ 3）水稻 Y 基因發(fā)生突變，也出現(xiàn)了類(lèi)似的 “常綠 ”突變植株 y2，其葉片衰老后仍為綠色。 （二）預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)基因植株的表現(xiàn)型： 植株甲： ________維持 “常綠 ”；植株乙： ________。 （ 2）根據(jù)圖 11 可以看出，突變型的 SGRy 蛋白和野生型的 SGRY有 3 處變異， ① 處氨基酸由 T 變成 S， ② 處氨基酸由 N 變成 K，可以確定是基因相應(yīng)的堿基對(duì)發(fā)生了替換， ③處多了一個(gè)氨基酸，所以可以確定是發(fā)生了堿基對(duì)的增添；從圖 11 中可以看出 SGRY蛋白的第 12和 38個(gè)氨基酸所在的區(qū)域的功能是引導(dǎo)該蛋白進(jìn)入葉綠體，根據(jù)題意， SGRy和 SGRY都能進(jìn)入葉綠體，說(shuō)明 ① 、 ② 處的變異沒(méi)有改變其功能；所以突變型的 SGRy蛋白功能的改變就是由 ③ 處變異引起的。 【試題點(diǎn)評(píng)】本題考查生物體的變異、遺傳定律的綜合應(yīng)用、遺傳學(xué)的探究實(shí)驗(yàn)等內(nèi)容和學(xué)生提取信息的能力 ，難度中等。 (2)若用限制酶 SmaI 完全切割圖 1 中 DNA 片段，產(chǎn)生的末端是 末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度本卷第 9 頁(yè)（ 共 43 頁(yè)） 為 。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 （ 3） 在雜合子體內(nèi)含有基因 D 和基因 d，基因 D的序列中含有兩個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)過(guò) SmaI完全切割會(huì)產(chǎn)生 537bp、 790bp 和 661bp 三種不同長(zhǎng)度的片段，基因 d 的序列中含有一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)過(guò)切割后會(huì)產(chǎn)生 1327bp和 661bp 兩種長(zhǎng)度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的 DNA片段經(jīng)過(guò)切割后會(huì)產(chǎn)生 4 種不同長(zhǎng)度的片段。尤其本題中所涉及的限制酶的內(nèi)容，難度大，要求能準(zhǔn)確分析其產(chǎn)物的長(zhǎng)度。 2020 福建 32． 【生物 — 現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題 】必答題（ 10 分） 肺細(xì)胞中的 let7 基因表達(dá)減弱，癌基因 RAS 表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。載體應(yīng)用 RNA 聚 合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng) let7 基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱(chēng)為 。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中 （ RASmRNA/RAS 蛋白）含量減少引起的。根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的 let7 基因表達(dá)減弱，癌基因 RAS 表達(dá)就增強(qiáng)，引發(fā)肺癌 ”導(dǎo)入 let7 基因后，肺癌細(xì)胞受到抑制，說(shuō)明 RAS 基因表達(dá)減弱，導(dǎo)致細(xì)胞中的 RAS 蛋白質(zhì)含量減少進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制。圖 1中兩個(gè)家系都有血友病發(fā)病史， III2和 III3婚后生下一個(gè)性染色體組成是 XXY的非血友病兒子（ IV2），家系中的其他成員性染色體組成均正常。請(qǐng)用圖解和必要的文字說(shuō)明 IV2 非血友病 XXY 的形成原因。采用凝膠 色譜法從血液中分離純化 F8 時(shí)，在凝膠裝填色譜柱后，需要用緩沖液處理較長(zhǎng)時(shí)間，其目的是 ；若 F8比某些雜蛋白先收集到，說(shuō)明 F8 的相對(duì)分子質(zhì)量較這些雜蛋白 。 （ 6）為獲得更多的轉(zhuǎn)基因母豬，可以采用體細(xì)胞克隆技術(shù)，將純合轉(zhuǎn)基因母豬的體細(xì)胞核注入 ，構(gòu)成重組胚胎進(jìn)行繁殖。 （ 2）由圖可知第一條帶是顯性，第二條帶是隱性，所以 Ⅲ 3基因 型為 XHXh，圖解如下： 本卷第 13 頁(yè)（ 共 43 頁(yè)） 在 III3 形成卵細(xì)胞過(guò)程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因 H 的姐妹染色單體移向細(xì)胞的同一極，形成 XHXH卵細(xì)胞， XHXH卵細(xì)胞與正常精子結(jié)合形成 XHXHY 受精卵。 F8 基因 cDNA可通過(guò)克隆篩選獲得，該 cDNA比染色體上的 F8 基因短，原因是該 cDNA沒(méi)有內(nèi)含子?？傮w來(lái)說(shuō)，該題是本試卷中的難題，原因是，遺傳本身對(duì)于學(xué)生來(lái)說(shuō)就難， 加之選修部分題目較偏僻，從該題可以看出，安徽高考對(duì)于選修的考查，與必修部分建立了聯(lián)系，進(jìn)行了學(xué)科內(nèi)的綜合，希望學(xué)生在備考的過(guò)程中多加注意。 2020海南 31.【生物 —— 選修 3：現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】（ 15分） . 已知甲種農(nóng)作物因受到乙種昆蟲(chóng)危害而減產(chǎn)，乙種昆蟲(chóng)食用某種原核生物分泌的丙種蛋白質(zhì)后死亡。 （ 2）在利用上述丙中蛋白質(zhì)基 因和質(zhì)粒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中，常需使用 酶和 。 【解析】（ 1）在已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列的情況下，可根據(jù)氨基酸和堿基的對(duì)應(yīng)關(guān)系，推出合成該蛋白質(zhì)的基因序列，然后用 DNA合成儀通過(guò)化學(xué)方法來(lái)合成目的基因。 本卷第 15 頁(yè)（ 共 43 頁(yè)） （ 4）直接用含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌直接感染甲種農(nóng)作物植株葉片傷口，僅僅在該葉片內(nèi)部分細(xì)胞中能合成丙蛋白，該植株的種子和其他的營(yíng)養(yǎng)器官均不含有重組質(zhì)粒，也就不含有丙中蛋白質(zhì)的基因。 （ 1）與擬南芥 t基因的 mRNA相比，若油菜 Tn基因的 mRNA中 UGA變?yōu)椋粒牵?，其末端序列成為“－ＡＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＡＣＵＣＵＡＡ”，則 Tn 比ｔ 多編碼 個(gè)氨基酸（起始密碼子位置相同，ＵＧＡ、ＵＡＡ為終止密碼子）。 （ 4）所得的轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型擬南芥 （填是或者不是）同一個(gè)物種。所以 Ta基因比 t基因編碼的蛋白質(zhì)中就多 AGA和 CUC對(duì)應(yīng)的 2個(gè)氨基酸。 2020江蘇 14．（ 2分）關(guān)于現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是 （ ） A．蛋白質(zhì)工程可合成自然界中不存在的蛋白質(zhì) B．體細(xì)胞雜交技術(shù)可用于克隆動(dòng)物和制備單克隆抗體 C．植物組織培養(yǎng)技 術(shù)可用于植物莖尖脫毒 D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育 【答案】 C 2020江蘇 33．（ 8分）請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問(wèn)題： (1)利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi) DNA復(fù)制類(lèi)似（如下圖所示）。 (2)設(shè)計(jì)引物是 PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。 (4)用限制酶 EcoRV、 Mbol單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得到的 DNA片段長(zhǎng)度如下圖 (1 kb即 1000個(gè)堿基對(duì) )，請(qǐng)?jiān)诖痤}卡的指定位置畫(huà)出質(zhì)粒上 EcoRV、 Mbol的切割位點(diǎn)。 請(qǐng)回答： （ 1）過(guò)程①是指在體外進(jìn)行的 處理，從而使精子與卵子結(jié) 合形成受精卵；過(guò)程②稱(chēng)為 。 （ 3）不同長(zhǎng)度的酶切產(chǎn)物在電泳時(shí)移動(dòng)的速率不同， 形成不同的電泳條帶。在適宜條件下培養(yǎng)，收獲種子（稱(chēng)為T(mén)1 代）。 （ 4）經(jīng)過(guò)多代種植獲得能穩(wěn)定遺傳的抗鹽突變體。其過(guò)程是：提取 植株的 DNA，用限制酶處理后，再用 將獲得的 DNA片段連接成環(huán)（如右圖）以此為模板，從圖中 A、 B、 C、 D 四種單鏈 DNA 片斷中選取 作為引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到的 片段 將用于獲取該基因的全序列信息。 （ 1） 將 S基因轉(zhuǎn)入蚊子體內(nèi)，使蚊子的唾液腺細(xì)胞大量表達(dá) S蛋白，該蛋白可以抑制登革熱病毒的復(fù)制。若純合的雄蚊（ AABB）與野生型雌蚊 （ aabb）交配， F1群 體中 A基因頻率是 ________， F2群體中 A基因頻率是 __________。 DNA 探針技術(shù)不能檢測(cè)基因是否完全表達(dá)，目的基因的完全表達(dá)應(yīng)該檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)， D錯(cuò)。 58．將兩端用 E1 切開(kāi)的 Tcr基因與用 E1 切開(kāi)的質(zhì)粒 X－ 1 混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類(lèi)型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 61．若將外源的 Tcr基因兩端用 E2 切開(kāi)，再與用 E2 切開(kāi) 的 X－ 1 混合連接，并導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞，結(jié)果顯示，含 X－ 4的細(xì)胞數(shù)與含 X－ 1的細(xì)胞數(shù)之比為 1:3，增大 DNA連接酶用量能否提高上述比值？＿＿。 （ 1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用 ___________酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。 （ 4）利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制。 (3)PCR 反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)擴(kuò)增緩沖液（含 Mg2+）、水， 4 種脫氧核糖苷酸、模板DNA 、 TaqDNA聚合酶、兩種引物。 （ 2）圖中的高血壓相關(guān)基因作為 __________，質(zhì)粒作為 _________,二者需用 ________切割后連接成重組載體，該過(guò)程與質(zhì)粒上含有 ________有關(guān)。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ） ada ada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子 【答案】 （ 6分） C 2020山東 35.（ 8分）【生物 現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】胚胎工程是一項(xiàng)綜合性的動(dòng)物繁育技術(shù)，可在畜牧業(yè)和制藥業(yè)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。 （ 3）圖中過(guò)程 A 稱(chēng)為 _____，它在胚胎工程中的意義在于 _____。試 管牛的培育需經(jīng)過(guò)體外受精、 、＿＿＿＿＿以及在母體中發(fā)育和產(chǎn)出等過(guò)程。（ 4）利用基因工程可以獲得