【正文】 ase57 （ ? ） 34 （ ? ）TF Ⅱ E解螺旋酶30 ， 74TF Ⅱ F促進(jìn) RNA po l Ⅱ 結(jié)合及作為其他因子結(jié)合的橋梁33TF Ⅱ B穩(wěn)定 TF Ⅱ D DNA 復(fù)合物12 ， 19 ， 35TF Ⅱ A輔助 TBP DNA 結(jié)合TAF **結(jié)合 TATA 盒TBP * 3 8TF Ⅱ D功 能亞基組成，分子量 ( kD )轉(zhuǎn)錄因子蛋白激酶活性，使 磷酸化Ⅱ（ ） （ ）Ⅱ解螺旋酶，Ⅱ促進(jìn) Ⅱ 結(jié)合及作為其他因子結(jié)合的橋梁Ⅱ穩(wěn)定 Ⅱ 復(fù)合物， ，Ⅱ輔助 結(jié)合結(jié)合 盒Ⅱ功 能（三 ） mRNA 轉(zhuǎn)錄激活及其調(diào)節(jié) POLⅡ TFⅡ F Ⅱ A Ⅱ B 由 RNAPol Ⅱ 催化轉(zhuǎn)錄的 PIC POLⅡ TFⅡ F Ⅱ H Ⅱ E TBP TAF TFⅡ DⅡ AⅡ BDNA復(fù)合物 TATA Ⅱ A Ⅱ B TBP TAF TATA Ⅱ H Ⅱ E CTD P PIC組裝完成， TFⅡ H使 CTD磷酸化 TATA DNA polⅡ TFⅡ H TAF TFⅡ F TAF TAF TFⅡ A TFⅡ B TBP 真核 RNA聚合酶 Ⅱ 在轉(zhuǎn)錄因子幫助下，形成的轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物 TBP相關(guān)因子 EBP 增強(qiáng)子結(jié)合蛋白 拼板理論 (piecing theory) 一個(gè)真核生物基因的轉(zhuǎn)錄需要 3至 5個(gè)轉(zhuǎn)錄因子。轉(zhuǎn)錄因子之間互相結(jié)合，生成有活性，有專一性的復(fù)合物，再與 RNA聚合酶搭配而有針對性地結(jié)合、轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的基因。 四、翻譯水平的調(diào)控 （一） mRNA的穩(wěn)定性對翻譯的影響 真核生物基因的翻譯調(diào)控的一個(gè)重要作用是控制 mRNA的穩(wěn)定性。 5′ 帽子結(jié)構(gòu)的調(diào)控作用 3′ PolyA尾的調(diào)控作用 mRNA的去穩(wěn)定元件 RNA干涉（ RNA interference ,RNAi ） RNAi 是近年來發(fā)現(xiàn)的在生物體內(nèi)普遍存在的一種古老的生物學(xué)現(xiàn)象 ,是 由與靶基因序列同源的雙鏈RNA（ dsRNA）介導(dǎo)的、由特定酶參與的特異性基因沉默現(xiàn)象 。 RNAi 廣泛存在于從真菌到高等植物、從無脊椎動(dòng)物到哺乳動(dòng)物各種生物中。 它是真核生物中存在的一種抗病毒入侵、抑制轉(zhuǎn)座子活動(dòng)、調(diào)控基因表達(dá)的監(jiān)控機(jī)制，具有重大生物學(xué)意義。 RNA干涉（ RNA interference ,RNAi ） 第一步（ 起始階段 ）是較長 dsRNA在 ATP參與下被 RNaseⅢ 樣的特異核酸酶切割加工成 2123nt的由正義和反義鏈組成的小干擾 RNA（ small interfering RNA， siRNA）。 siRNA的兩條單鏈末端為 5’－磷酸和 3’－羥基，且 3’端均有２ ~3個(gè)突出的核苷酸。果蠅中的 RNaseⅢ樣核酸酶稱為 Dicer。 Dicer有解旋酶活性并含有 dsDNA結(jié)合域和PAZ結(jié)構(gòu)域。 Dicer的類似物相繼在擬南芥、秀麗線蟲及哺乳動(dòng)物等機(jī)體中被發(fā)現(xiàn)。 第二步（ 效應(yīng)階段 ）是 siRNA 在 ATP參與下被 RNA解旋酶解旋成單鏈，并由其中反義鏈指 導(dǎo)形成 RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體 (RNAinduced silencing plex， RISC)。 RISC由 siRNA、解旋酶、 ATP、核酸內(nèi)切酶、核酸外切酶等多種成分組成?；罨?RISC在單鏈siRNA引導(dǎo)下識別互補(bǔ)的 mRNA，并在 RISC中的核酸內(nèi)切酶作用下從 siRNA引導(dǎo)鏈中心所對應(yīng)的靶基因位置切割靶 mRNA，最后可能再被核酸外切酶進(jìn)一步降解，從而干擾基因表達(dá)。 紫色為正義 RNA 段，藍(lán)色為反義 RNA 段，綠色為目標(biāo)信使 RNA， dsRNA觸發(fā)了高 效的基因沉默機(jī)制并 極大降低了靶 mRNA水 平，達(dá)到干擾目的 Dicer: RNaseⅢ 樣核酸酶 RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體 (RNAinduced silencing plex， RISC) 除上述 RNAi機(jī)制外，轉(zhuǎn)基因真核生物中的 dsRNA尚可引起相應(yīng)基因的甲基化和染色質(zhì)重構(gòu)、凝集、異染色質(zhì)化，基因甲基化和異染色質(zhì)化還可能促使異常 RNA（ aberrant RNA）產(chǎn)生，最終導(dǎo)致基因沉默。 RNAi的放大效應(yīng)機(jī)制 siRNA不僅可引導(dǎo) RISC切割靶 RNA，而且可作為引物在 RNA依賴的 RNA聚合酶(RdRP)作用下以靶 mRNA為模板合成新的dsRNA。 新合成的長鏈 dsRNA同樣可被 RNaseⅢ樣核酸酶切割、降解而生成大量的次級siRNA。次級 siRNA又可進(jìn)入合成 切割的循環(huán)過程，進(jìn)一步放大 RNAi作用。 作為一門生物技術(shù) RNAi是將與靶基因的 mRNA 同源互補(bǔ)的雙鏈 RNA(dsRNA ) 導(dǎo)入細(xì)胞 ,能特異性地降解該 mRNA ,從而產(chǎn)生相應(yīng)的功能表型缺失 , 屬于 轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默 (post transcriptional gene silence , PTGS)。 RNAi 的特點(diǎn) ?轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默 ?較高特異性 ：能夠非常特異地降解與之序列相應(yīng)的單個(gè)內(nèi)源基因的 mRNA。 ?高效性 ：相對少量的 dsRNA就可以使相應(yīng)的基因表達(dá)受抑制。 ?可遺傳性及遠(yuǎn)距離效應(yīng) ： RNAi基因表達(dá)的效應(yīng)可以突破細(xì)胞的界限，可傳遞給子一代。 RNA干涉（ RNAi）在實(shí)驗(yàn)室中是一種強(qiáng)大的實(shí)驗(yàn)工具，通過這種方式，利用具有同源性的雙鏈RNA（ dsRNA）誘導(dǎo)序列特異的目標(biāo)基因的沉默，迅速阻斷基因活性。小的干涉 RNA（ siRNA）是在 RNA干涉過程中人工體外合成的小片段 RNA，由約 20個(gè)堿基對組成，包括 5個(gè)磷酸鹽， 2個(gè)核苷和 3個(gè)懸臂。SiRNA在 RNA沉默通道中起中心作用，是對特定信使RNA（ mRNA）進(jìn)行降解的指導(dǎo)要素。 在 2022年度 Science評選的 10大科學(xué)成就中 RNAi名列榜首。 隨著對小分子 RNA研究的不斷深入，研究人員開始認(rèn)識到：小分子 RNA的世界一點(diǎn)都不小。 有人推測：小分子 RNA可能代表一個(gè)新層次上的基因表達(dá)調(diào)控方式。 2022年 10月 2日，現(xiàn)年 47歲的 Andrew Z. Fire和 45 歲的 Craig C. Mello由于在 RNAi(RNA interference， RNAi)及基因沉默現(xiàn)象研究領(lǐng)域的杰出貢獻(xiàn)而成為諾貝 爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)獲得者，且獲獎(jiǎng)日期距其研究發(fā)表僅 8年時(shí)間， 獲獎(jiǎng)速度之快亦令人嘆為觀止。 （二） mRNA非翻譯區(qū)的二級結(jié)構(gòu)對翻譯的影響 mRNA 5′非翻譯區(qū)形成莖環(huán) 二級結(jié)構(gòu) 蛋白因子結(jié)合 mRNA結(jié)構(gòu)元件 運(yùn)鐵蛋白的 mRNA 5′非翻譯區(qū)有鐵反應(yīng)元件（ iron response element，IRE）。當(dāng)細(xì)胞沒有鐵時(shí)，阻遏蛋白與鐵蛋白 mRNA啟動(dòng)子區(qū)域鐵反應(yīng)元結(jié)合，阻止翻譯進(jìn)行；當(dāng)有鐵存在時(shí)，阻遏物不再與 IRE結(jié)合，翻譯順利進(jìn)行。 （三） 翻譯起始因子的可逆磷酸化對翻譯的影響 eIF4F磷酸化，蛋白質(zhì)合成增加 eIF4F去磷酸化，蛋白質(zhì)合成減少 eIF2去磷酸化，蛋白質(zhì)合成減少 三、 RNA polⅠ 和 pol Ⅲ 的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié) （一） RNA polⅠ 轉(zhuǎn)錄體系的控制 人 rRNA前體基因的啟動(dòng)子的 兩個(gè)元件 ：核心元件與上游控制元件 RNA polⅠ 的 兩種轉(zhuǎn)錄因子 ：上游結(jié)合因子１與選擇性因子１ （二） RNA pol Ⅲ 轉(zhuǎn)錄體系的控制 tRNA和 5SrRNA基因啟動(dòng)子位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)下游即轉(zhuǎn)錄區(qū)內(nèi)，稱為 內(nèi)部控制區(qū)（ internal control regions,ICR） tRNA基因 的 ICR主要由Ａ盒和Ｂ盒兩個(gè)元件組成， RNA pol Ⅲ 轉(zhuǎn)錄起始需要轉(zhuǎn)錄因子 TF ⅢC 和 TFⅢB 。 5SrRNA基因 的轉(zhuǎn)錄需要三種轉(zhuǎn)錄因子： TF ⅢC 、 TFⅢB 和 TFⅢ Ａ。 原核生物 真核生物 操縱子調(diào)控 。 多樣化調(diào)控 ， 更為復(fù)雜 。 基因組小，大腸桿菌：總長 106bp, 編碼 4288個(gè)基因 , 每個(gè)基因約 1100bp。 基因組大 ， 人類基因組全長 3 109 bp，編碼 3萬個(gè)基因 ， 其余為重復(fù)序列 。 基因分布在同一染色體上 ， 操縱子控制 。 DNA與組蛋白結(jié)合成染色質(zhì) ， 染色質(zhì)的變化調(diào)控基因表達(dá)；基因分布在不同的染色體上 ， 存在不同染色體間基因的調(diào)控問題 。 適應(yīng)外界環(huán)境 ， 操縱子調(diào)控表達(dá) 。 基因差別表達(dá)是細(xì)胞分化和功能的核心 。 轉(zhuǎn)錄和翻譯同時(shí)進(jìn)行，大部分為轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控。 轉(zhuǎn)錄和翻譯在時(shí)間和空間上均不同 ，從 DNA到蛋白質(zhì)的各層次上都有調(diào)控 ，但多數(shù)為轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控 真核生物與原核生物的調(diào)控差異