基因克隆原核表達(dá)ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 07:22本頁面
【正文】 TA GGT TAC TTG GAC CTT AAG GAT CCA EcoRI BamHI AAT CGG AAG AAT TCA GAC CTA GGT TTA GCC TTC TTA AGT CTG GCT CCA 載體部分序列 DNA序列 位相載體 含有 3種讀碼框的系列載體 優(yōu)點： ? 表達(dá)效率高 ? 產(chǎn)物穩(wěn)定 ? 易鑒定：融合蛋白分子量大 ， 電泳可鑒定 ? 易純化：利用融合原核多肽的特性 Ptac： IPTG誘導(dǎo) GST融合蛋白 — 直接純化 產(chǎn)物切割方便： pGEX1?T— 凝血酶 pGEX2T凝血酶 pGEX3TX因子 位相載體 融合型載體 pGEX系列 （二）非融合型表達(dá)載體 P SD Foreign DNA 非融合型表達(dá)載體 非融合基因 主要元件：強(qiáng)啟動子 SD： ATG：第一個密碼子 非融合型表達(dá)載體 pPLLamda PL啟動子 溫度誘導(dǎo) 插入位點 HpaI （ 三 ） 分泌型表達(dá)載體： 主要元件： 啟動子和 SD序列 信號肽序列 ： SD下游 ， 編碼信號肽 ， 可引導(dǎo)蛋白跨膜 優(yōu)點：分泌表達(dá)，避免降解。 分泌型表達(dá)載體 pINIIIompA1 分泌型融合表達(dá)載體 pEZZ18 五．提高表達(dá)水平的手段 選擇合適載體 ? 強(qiáng)啟動子 提高轉(zhuǎn)錄水平 ? 核糖體結(jié)合位點 （ ATGSD） ? 避免產(chǎn)物降解 ：分泌 /融合表達(dá) 細(xì)菌蛋白酶抑制劑 選擇合適宿主 Lac 啟動子 LacI菌 PL/PR CI857 溶源菌 誘導(dǎo)表達(dá) 溫度誘導(dǎo) PL/PR IPTG的化學(xué)誘導(dǎo) Plac、 Ptac 六．表達(dá)產(chǎn)物的檢測： 特異性鑒定： ? 熒光抗體法 ? 免疫沉淀法 ? 免疫印跡法 ? ELISA 生物學(xué)活性鑒定
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