【正文】 指 紋 圖 譜 中藥指紋圖譜發(fā)展趨勢 質(zhì)量表征和評價 Quality evaluation 新藥研發(fā) Ramp。D of Drugs 質(zhì)量控制 Quality control 指紋圖譜獲取 Acquisition 方法學(xué)驗證Validation 指紋圖譜應(yīng)用Application Functional fingerprinting of TCM 102 中藥指紋圖譜數(shù)據(jù)庫 中藥材指紋圖譜 中間體指紋圖譜 中藥制劑指紋圖譜 不 同 產(chǎn) 地 不 同 采 收 期 不 同 炮 制 方 法 不 同 藥 用 部 位 不 同 處 理 方 法 不 同 炮 制 方 法 不 同 產(chǎn) 地 原 料 不 同 工 藝 條 件 中藥指紋圖譜庫 標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜庫 高維指紋圖譜庫 編碼技術(shù)等 103 樣品編號生產(chǎn)企業(yè) 批號1上海和黃藥業(yè)有限公司（原上海中藥制藥一廠） 專供實驗用樣品2山西太行藥業(yè)股份有限公司 02 03 04 63山西太行藥業(yè)股份有限公司 02 08 02 84山西太行藥業(yè)股份有限公司 02 08 04 15石家莊神威藥業(yè)股份有限公司 2022216石家莊神威藥業(yè)股份有限公司 2022317常州康普藥業(yè)有限公司 , 2083028江蘇安格藥業(yè)有限公司 112029三九企業(yè)集團(tuán) 三九萬榮藥業(yè)有限責(zé)任公司 2033010常熟雷允上制藥有限公司 20910111常熟雷允上制藥有限公司 20917112北京雙鶴高科天然藥物有限責(zé)任公司 020601 010513北京雙鶴高科天然藥物有限責(zé)任公司 020601 0210中藥指紋圖譜分析示例 104 建立對照指紋圖譜 用于建立對照指紋圖譜的樣品圖譜 105 生成的對照圖譜 生成的對照圖譜（平均值法） 106 樣品檢查 樣品檢查 11 12 13對照指紋圖譜 相似度評價結(jié)果 107 色譜 指紋圖譜應(yīng)用示例 108 ? 知母為百合科植物知母 (Anemarrhena 224。sphodeloides Bge.)的干燥根莖，為常用中藥 ? 主要成分為皂苷類，黃酮類，木脂素等 ? 芒果苷 和 新芒果苷 是其清熱作用 的有效成分 １ .知母的指紋圖譜研究 109 色譜條件 ? 色譜柱 ： Hypersil填料， C18ODS柱（ 5μm， 250mm，大連依利特）； 流動相 ：采用梯度洗脫， A相為乙腈， B相為 25mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液（ pH ）； 流速 ： ，運行時間 60min， 檢測波長 257nm， 柱溫 為25℃ 。 ? 梯度程序 ： Time(min) %A(ACN) %B(buffer) 0 0 100 2 0 100 5 8 92 20 8 92 32 15 85 50 70 30 110 溶液制備 供試品溶液 藥材粉末 80%甲醇 25ml 超聲 20min 過濾 殘渣 80%甲醇 25ml 濾液 過濾 超聲 20min 濾液 合并濾液 揮干，甲醇定容至 25ml 111 分離時間 圖 知母樣品 120min色譜圖 112 0100020223000400050006000700080009000100000 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52放置時間（小時）峰面積1號峰 2號峰 3號峰 4號峰 5號峰 6號峰指紋圖譜穩(wěn)定性考察 ? 色譜峰的峰面積 113 01020304050600 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52放置時間（小時）峰保留時間（分鐘）1號峰 2號峰 3號峰 4號峰 5號峰 6號峰? 色譜峰的保留時間 114 對照品及樣品色譜圖 (A) (B) 圖 1 對照品 (A)及樣品 (B)HPLC色譜圖 ,1新芒果苷 ， 2芒果苷 115 不同產(chǎn)地知母藥材的 HPLC指紋圖譜 116 不同產(chǎn)地知母藥材的對照指紋圖譜 樣品對照指紋圖譜 117 ? 檢測波長的選擇原則與思路： ? 對于各種有效成分研究得比較透徹，藥效成分已知的中藥，應(yīng)選擇藥效成分的最大吸收波長為檢測波長； ? 對于有效成分還不明確和未知的中藥，應(yīng)選擇色譜峰出峰數(shù)目最多的檢測波長。 220 nm：相似度好，未體現(xiàn)指標(biāo)成分 280nm：相似度差 257nm：相似度和指標(biāo)成分均符合技術(shù)要求 118 特征波長指紋圖譜 ? 將色譜圖上的每個主成份（共有峰）的響應(yīng)信號取其在紫外最大吸收波長處的吸收信號，然后對得到的綜合了不同波長的檢測信息的指紋圖譜進(jìn)行相似度計算和評判。 119 ２ .淫羊藿藥材指紋圖譜研究 粉碎過篩 稱定 70%乙醇 20ml 密塞超聲 30min 補(bǔ)足失重 離心過濾 棕 色 容量瓶 冰箱冷藏 120 ? 色 譜 柱 ： 迪 馬 DiamonsilC18 柱 （ 5 μm ， 250mm） ? 流動相：乙腈 ， 純化水 （ 以甲酸調(diào) pH至 ） ， 梯度洗脫 ? 流速： ml/min， 采集 45min內(nèi)色譜圖； ? DAD檢測檢測波長： 270nm； ? 進(jìn)樣量： 20μl。 時間（ min） 0 3 20 35 43 乙腈比例 (％ ) 25 25 30 45 73 121 淫羊藿藥材 HPLC指紋圖譜（ 60min）： 122 獲得的對照圖譜 123 峰序列 保留時間 1號樣品 2號樣品 3號樣品 4號樣品 5號樣品 對照圖譜 保留 時間 RSD(%) 峰面積RSD(%) 5 10 11 2082 12 1202 1440 2380 1181 14 2365 1469 1909 1432 15 18 25 27 28 0 29 124 淫羊藿藥材 HPLC指紋圖譜相似度： 1號 樣品 2號 樣品 3號 樣品 4號 樣品 5號 樣品 對照指紋圖譜 1號樣品 2號樣品 3號樣品 4號樣品 5號樣品 對照指紋圖譜 125 代謝組學(xué)模式 ? 研究生物體系 （ 細(xì)胞 、 組織或生物體 ） 受外部刺激所產(chǎn)生的所有代謝產(chǎn)物的變化的科學(xué) 。 ? 內(nèi)外源性物質(zhì)所產(chǎn)生的質(zhì)和量隨時間的動態(tài)變化 ， 及相互關(guān)系研究 。 126 ? 化學(xué)物質(zhì)組學(xué) (Chemomics)是指研究化學(xué)物質(zhì)的組成及其相互關(guān)系的一種方法 。 ? 中藥化學(xué)組學(xué) ， 中藥復(fù)方有效成分組學(xué) 。 ? 組成復(fù)雜 ， 數(shù)據(jù)海量 ， 信息處理要求高 ，表征評價難度大 。 127 128 色譜專業(yè)期刊 Journal of Chromatography A, B1938年創(chuàng)刊（荷蘭） Journal of Chromatographic Science1963年創(chuàng)刊（美國） Chromatographia1968年創(chuàng)刊（德國） Journal of High Resolution Chromatography and Chromatographic Communications1978年創(chuàng)刊 Biomedical Chromatography1987年創(chuàng)刊（英國） Chemical AbstractChromatography: column and liquid。 Gas。 Gel。 Paper。 Thinlayer