nk殺傷實驗ppt課件-資料下載頁
2025-05-05 18:18本頁面
【正文】 5a 顯色劑 A 1瓶 (6ml) 4℃ 5b 顯色劑 B 1瓶 (6ml) 4℃ (避光 ) 6 終止液 1瓶 (6ml) 4℃ 抗體包被板條 8 12 或 8 6 4℃ 封板膠紙 1張 說明書 1份 *:[96/48 Test] 酶標(biāo)儀 (450nm) 高精度加液器及吸頭： 220,20200,2001000μl 雙蒸水或去離子水，坐標(biāo)紙等 標(biāo)本收集 收集血液的試管應(yīng)為無熱原和內(nèi)毒素試管。血漿抗凝劑為 EDTA。標(biāo)本應(yīng)清澈透明，避免溶血，高血脂，如有懸浮物應(yīng)離心去除。 標(biāo)本收集后若不及時檢測，按一次用量分裝，凍存于－ 20℃ ，避免反復(fù)凍融。 方 法 提前 20分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫。 將濃縮洗滌液（ 4）用雙蒸水稀釋 (1:20)。未用完的放 回 4℃ 。 標(biāo)準(zhǔn)品 :以標(biāo)準(zhǔn)品 /標(biāo)本稀釋液 (1b) 品 (1a), 靜置 15分鐘后混勻 (濃度為 1000pg/ml),根據(jù)需 要進(jìn)行倍比稀釋。未用完的復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品放入 20℃ 保存 , 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品不應(yīng)重復(fù)使用。 可根據(jù)實際情況，將標(biāo)本做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（可做預(yù)實 驗，以確定稀釋倍數(shù)）。 從密封袋中取出所需板條，其它板條密封放回 4℃ 除空白孔外，分別將不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品 /標(biāo)本 100ul/孔加入 板條的相應(yīng)孔中，標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本應(yīng)作雙復(fù)孔或三復(fù)孔。 用封板膠紙封住反應(yīng)孔， 37℃ 孵箱孵育 90分鐘。 洗板 4次。 除空白孔外，加入稀釋好的生物素化抗體工作液 100ul/ 孔，封住板孔， 37℃ 孵箱孵育 60分鐘。 洗板 4次。 除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液 100ul/ 孔， 封住板孔， 37℃ 孵箱孵育 30分鐘。 1洗板 4次。 1各孔加入顯色劑 100ul/孔，避光 37℃ 孵箱孵育 1015分鐘。 (視顯色深淺靈活掌握 ) 1各孔加入終止液 100ul/孔 ,混勻后即刻測 A450 值 (5分鐘內(nèi) )。 結(jié)果判斷及計算 每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 A值應(yīng)減去零孔的 A值。 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)， A值作縱坐 標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的 A值 可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。 若標(biāo)本 A值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計 算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 試劑盒靈敏度：最小可測人 IL2達(dá) 2pg/ml. 標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖 注意事項 : 手工洗板時，甩盡孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液 350μl，靜 止 30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干，洗 4次。 冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶 ,屬于正?，F(xiàn)象，加 熱溶解后再配制。 裝量極少的試劑 (2a和 3a)應(yīng)先離心或用手甩幾下，以使 管壁液體沉于管底。 不同批號的試劑盒組份不能混用。 檢測標(biāo)本如為組織培養(yǎng)液，應(yīng)用培養(yǎng)液作為標(biāo)準(zhǔn)品 /樣品 稀釋液。 充分混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器 (使 用最低頻率 )，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)過程中每 10分 鐘手工混勻一次。
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