cr質(zhì)量控制ppt課件-資料下載頁
2025-05-05 12:06本頁面
【正文】 分裝的試劑注意冷藏，防止酶試劑失活及有機大分子降解 優(yōu)先選擇含 UNG的試劑盒 試劑經(jīng)充分溶解后混勻，離心后再開蓋，保持試劑均勻性 擴增管、樣品處理管及吸頭等實驗用品，均需高壓滅菌 標本處理應(yīng)在標本制備區(qū)指定的生物安全柜內(nèi)進行，實驗前應(yīng)打開風機 510min，待柜內(nèi)空氣凈化并氣流穩(wěn)定后再進行實驗操作 為防止標本間交叉污染，在打開離心管前宜短暫離心 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 注意事項 如遇吸棄上清步驟的提取方法，離心時應(yīng)注意離心管的方向，吸棄上清時不要碰到沉淀部分，以免造成提取效率降低。 標本處理嚴格按照試劑說明書進行操作，應(yīng)做到處理時間充分，保證標本中的 DNA或 RNA完全釋放； 將提取的核酸加到反應(yīng)體系中后，應(yīng)將純化好的剩余核酸樣本凍存，以免在擴增檢測時出現(xiàn)意外需要重新檢測。在結(jié)果確定后再將這些樣本按生物污染廢棄物進行處理。 擴增條件一致的不同檢測項目同時擴增時不得使用同一套標準品。 擴增后的擴增管不能在擴增及產(chǎn)物分析區(qū)打開處理，應(yīng)用一次性手套包好遠離 PCR實驗室的洗滌間消毒處理； 工作結(jié)束后，必須立即對各工作區(qū)進行清潔 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 結(jié)果判斷 在判斷結(jié)果時，應(yīng)先對擴增的熒光信號作出定性判斷，然后再進行定量分析，避免一些非特異熒光信號對結(jié)果分析的干擾。 基線值（閾值）設(shè)定：遵從廠商規(guī)定 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 如羅氏 LightCycler儀器基線設(shè)定 在陰性對照線上 與所有擴增曲線相交 相交點在曲線的平滑區(qū) 位置盡可能 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 總體看曲線拐點清楚，指數(shù)期明顯，擴增曲線整體平行性極好，基線平無上揚現(xiàn)象，低濃度樣本擴增曲線指數(shù)期明顯。 曲線指數(shù)期斜率，反應(yīng)了擴增效率，越大說明擴增效率越高。擴增效率越高，試劑靈敏度表現(xiàn)會越好。 基線，圖上的基線也就是陰性樣本的擴增曲線，平直或略微下降是好試劑的表現(xiàn)，陰陽性清楚，不易誤判。如果有上揚趨勢，有可能造成陰性標本誤判。 曲線與曲線間平行性非常好，說明各反應(yīng)管擴增效率相近，外標準定量建立在每管擴增效率一樣的假定基礎(chǔ)上，所以擴增效率越相近，定量的重復性和準確性就越好。而擴增效率相近與否，反應(yīng)在擴增曲線圖上就是曲線的平行性。 低濃度曲線指數(shù)期明顯，一方面不易出現(xiàn)假陰陽性誤判，另一方面說明靈敏度高。 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 實驗結(jié)果有效性判斷標準 標準曲線平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)等參數(shù)的數(shù)值允許變化范圍均應(yīng)在試劑制造商推薦的范圍內(nèi)。 陰、陽室內(nèi)質(zhì)控檢測結(jié)果均處于在控狀態(tài)。 以上幾項標準均達到要求后，當日實驗有效，可以發(fā)放報告。否則，本次實驗無效，全部標本應(yīng)重新檢測。 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 實驗灰區(qū)標本的處理 定性測定中處于實驗灰區(qū)的標本應(yīng)重復檢測一次，灰區(qū)范圍的確定及結(jié)果報告應(yīng)遵從各試劑制造商推薦的要求。 復星 CT： 38≤Ct 值 40為檢測灰區(qū)，建議重復檢測 2次。如果檢測結(jié)果至少 1次為 Ct40判斷為陽性，否則判為陰性。 達安 CT: ABI7000： 27≤Ct 值 30為檢測灰區(qū)，重復檢測 1次。如重復試驗 Ct值 30判為陽性，否則判為陰性。 Roche LightCycler： 37≤Ct 40為檢測灰區(qū)，重復檢測 1次。如重復試驗 Ct值 40判為陽性，否則判為陰性 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 結(jié)果報告 定性檢測 定性檢測的結(jié)果報 “ 陰性 ” 或 “ 陽性 ” 。但由于目前國內(nèi)商品試劑盒的靈敏度多為 5001000IU/ml，在報告結(jié)果時應(yīng)告知臨床醫(yī)生方法的局限性。 定量檢測 1）結(jié)果在檢測范圍內(nèi)，則按檢測的結(jié)果直接發(fā)報告。 2）樣本未出現(xiàn)擴增曲線，則報告為 “ 低于檢測下限 ” ，不能報告為 “ 0”或 “ 陰性 ” 。如果低于檢測下限，但又有擴增曲線，則應(yīng)重新檢測，仍低于檢測下限，則報告為 “ 低于檢測下限 ” 。 3）結(jié)果高于檢測上限，則報告 “ 高于檢測上限 ” ，如果需要精確定量結(jié)果，則應(yīng)用陰性血清（漿）將樣本進行 1001000倍稀釋后再重新進行檢測，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)；或?qū)⑻崛『蟮臉悠废♂屩辆€性范圍內(nèi)再檢測。 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 結(jié)果解釋 臨床可以肺結(jié)核患者痰涂片陰性，而 TB菌 PCR陽性或時陰時陽，可能患者為初起病間斷排菌且排菌量不大所致；或經(jīng)抗結(jié)核治療后，常有矛盾報告 [培養(yǎng)（ ）、 PCR（ +）較多 ]，因為只要有 TB靶片段存在， PCR即可陽性，而測得陽性，不一定有活菌，加之病情與菌量不一定成正比。 HBV（及 HCV）感染在抗病毒治療過程中，可出現(xiàn) HBVDNA(及HCVRNA)陰轉(zhuǎn)情況，有時停藥后又轉(zhuǎn)陽。藥物是否能徹底清除病毒還要根據(jù)肝臟酶學、病毒血清學標志物及核酸結(jié)果綜合考慮，僅有核酸陰轉(zhuǎn)而其他指標不改變并不能證明臨床痊愈。 另外， PCR檢測結(jié)果陰性并不能排除樣本含有病原體，只能說明含有的病原體濃度低于本試劑的檢測下限 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 室間質(zhì)評 目的 :監(jiān)測檢測結(jié)果的準確性 PCREQA評價方式 :組均值 177。 3SD、組均值 177。 國家標準品得出的檢測值換算成的對數(shù)值 177。 常規(guī)標本對待 反饋結(jié)果 結(jié)果分析 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 無室間質(zhì)評的檢測項目應(yīng)進行實驗室間比對或用其他方法驗證其檢測結(jié)果的可靠性 上 海 市 臨 床 檢 驗 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory 謝 謝
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