cr技術(shù)及應(yīng)用jyhppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-05 12:06本頁(yè)面
【正文】 、 五、 PCR技術(shù)的特點(diǎn) ? 高度靈敏 ? 高特異性 ? 簡(jiǎn)便快捷 凝膠電泳分析法： ? 瓊脂糖凝膠電泳 ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳 分子雜交：基因芯片和原位雜交 限制性內(nèi)切酶酶切分析：點(diǎn)突變 測(cè)序 Realtime PCR：不是對(duì) PCR終產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè) 六、 PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法 Realtime（實(shí)時(shí)熒光定量） PCR 原理： 所謂實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)，是指在 PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用 熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè) PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知量模板進(jìn) 定量分析的方法。 檢測(cè)方法： Ⅰ 法 : 在 PCR反應(yīng)體系中，加入過量 SYBR熒光染料， SYBR熒光染料特異性地?fù)饺? DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的 SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光 信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與 PCR產(chǎn)物的增加完全同步。 注： PCR產(chǎn)物熔解曲線圖 (單一峰圖表明 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性 ) （單鏈 DNA探針） : 探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收； PCR擴(kuò)增時(shí)， Taq 酶的 5‘3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離， 從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條 DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子 形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與 PCR產(chǎn)物的形成完全同步。 Realtime（實(shí)時(shí)熒光定量） PCR ——TaqMan探針法 擴(kuò)增曲線分析 設(shè)置：基線和閾值線 擴(kuò)增曲線分析 基線： 315循環(huán) 基線： 13循環(huán) 標(biāo)準(zhǔn)曲線： Ct值與 logC0成反比 七、 PCR技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用 在常見病原體檢測(cè)中的應(yīng)用： HBVDNA、 HCVRNA、 EBDNA、 HCMVDNA、 MPDNA、 UUDNA、 CTDNA、 HSV2DNA、 NGDNA 分子遺傳學(xué)研究：基因變異、表達(dá)、重組、進(jìn)化等 醫(yī)學(xué)診斷：遺傳病、基因病、癌變、代謝性遺傳病等 法醫(yī)學(xué)鑒定 組織器官移植配型： HLASSP配型
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