疫組織化學(xué)技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-05 03:10本頁面
【正文】 滅活內(nèi)源性生物素： 加生物素阻斷劑 A液 （ %親和素 ） 1滴 ， RT， 10min， PBS沖洗 3次 2min；加 B液 （ 生物素 ） 1滴 ， RT， 10分鐘 ， PBS沖洗 3次 2min；此步驟適用于富含生物素的組織 （ 如腦和胚胎組織 ） ： 原因：富含正電荷的膠原和結(jié)締組織吸附抗體 目的：吸附帶正電荷的蛋白 操作：與二抗種屬相同的非免疫血清或 25﹪ BSA（ 牛血清白蛋白 ） ， RT， 10min， 不洗； 注意 ：結(jié)合不牢固 ， 不能沖洗 建議 ：可試用不同動(dòng)物的非免疫血清 （ 盡量不要與一抗種屬相同 ） 4℃ 過夜 ， 或 37℃ 孵育 12h， PBS沖洗 3次 5min 多克隆抗體 兔多抗 價(jià)格低，效價(jià)高 非特異性反應(yīng)高，效價(jià)不穩(wěn)定 單克隆抗體 小鼠單抗 大鼠單抗 兔單抗 特異性強(qiáng)，無交叉反應(yīng)，效價(jià)穩(wěn)定 價(jià)格高，效價(jià)低 濃縮型抗體 摸索效價(jià) 市售抗體稀釋液，或含 13%非免疫血清 PBS 即用型抗體 無需摸索效價(jià) IgG(二抗 ） ， RT,10分鐘 ， PBS沖洗 3次 5min； 注意：與一抗匹配 生物素 辣根過氧化物酶 /堿性磷酸酶 （ SABCPOD， 或 SABCAP） ， RT,10min，PBS沖洗 4次 5min DAB（ 或 NBT/BCIP ） 顯色 顯色過程為 2～ 10min（ 鏡下監(jiān)控 ， AEC不能長期保存 ） ，蒸餾水或自來水沖洗； NBT/BCIP顯色直接用水溶性封片劑封片 。 12. 蘇木精復(fù)染 （ 10秒鐘 ） ， 自來水沖洗返藍(lán) ， 用中性樹膠封片 。 DAB顯色 ChAT免疫組化檢測結(jié)果 AEC顯色 Prostate – Double label ? Cytokeratin 5 (m), AP substrate (blue) CD34 (m), AEC （ red）
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