疫化學(xué)技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-01 18:10本頁(yè)面
【正文】 ，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果。 TMB經(jīng) HRP作用后，約 40分鐘顯色達(dá)頂峰，隨即逐漸減弱，至 2小時(shí)后即可完全消退至無(wú)色。 比色 拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀中。 以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過(guò)程的孔），以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進(jìn)行計(jì)算。 結(jié)果以光密度（ oplical density， OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（ absorbence， A），兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于 A字母的右下角，如 OPD的吸收波長(zhǎng)為 492nm，表示方法為 A492nm或 OD492nm。 酶標(biāo)比色儀 酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱(chēng)酶標(biāo)儀，通常指測(cè)讀 ELISA光度計(jì)。針對(duì)固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計(jì)。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測(cè)范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到 ，準(zhǔn)確性為177。 1%，重復(fù)性達(dá) %。 操作時(shí)室溫宜在 1530℃ ，使用前先預(yù)熱儀器 1530分鐘，測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。測(cè)讀 A值時(shí)，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如 OPD用 492nm波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀。 各種酶標(biāo)儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。 6 結(jié)果判斷 定性測(cè)定 定性測(cè)定的結(jié)果判斷作出 “ 有 ” 或 “ 無(wú) ” 的回答，分別用 “ 陽(yáng)性 ” 、 “ 陰性 ” 表示。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。 在間接法和夾心法 ELSIA中， 陽(yáng)性孔 呈色深于陰性孔。在競(jìng)爭(zhēng)法 ELISA中則相反， 陰性孔 呈色深于陽(yáng)性孔。兩類(lèi)反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同，分述于下。 ： （ cutoff value） 一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù) ()，以此作為判斷結(jié)果陽(yáng)性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。 /陰性對(duì)照比值：在實(shí)驗(yàn)條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本（ S）和陰性對(duì)照（ N）的 A值后，計(jì)算 S/N值。 間接法和夾心法 （ 2）競(jìng)爭(zhēng)法 因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出 S、 P和 N的吸光值。 a. 陽(yáng)性判定值法 陰性判定值 = NCX+ PCX 陽(yáng)性 A≤ 陽(yáng)性判定值 陰性 A＞陽(yáng)性判定值 b. 抑制率法 抑制率（ %） = （陰性對(duì)照 A值 標(biāo)本 A值） 100%/陰性對(duì)照 陽(yáng)性 抑制率 ≥ 50%為 陰性 ＜ 50% 定量測(cè)定 ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法 ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈 S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測(cè)區(qū)域。 4. ELISA的操作要點(diǎn) 嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑O(shè)計(jì)，優(yōu)質(zhì)的試劑，正確的操作和良好的儀器是保證 ELISA必要條件。 嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。 ELISA應(yīng)用實(shí)例 飼料中鹽酸克倫特羅的測(cè)定 飼料中毒素的測(cè)定（主要包括黃曲霉毒素， 簡(jiǎn)曲霉毒素 ） 飼料中有害微生物的快速篩檢 （如沙門(mén)氏菌 ） 甲胺磷殘留分析 甲基對(duì)硫磷殘留分析 呋喃丹殘留分析 ELISA在飼料安全檢測(cè)中的應(yīng)用 ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測(cè) 河豚毒素 植物毒素如罌粟堿、嗎啡、藻類(lèi)毒素 苯并芘 主要有除草劑與殺蟲(chóng)劑兩大類(lèi) 例如殺暝松（ FN ）、 甲氟磷酸異已酶（ SOMAN ）、 草不綠（ Alachor ）、 西維因（ Carbaryl ）、 多菌靈及克菌丹（ Captan ）等。 農(nóng)藥的檢測(cè) ： ELISA檢測(cè) “ 非典型肺炎 ” 冠狀病毒 ELISA在結(jié)締組織病早期診斷中的應(yīng)用檢測(cè)抗異質(zhì)性胞核核糖蛋白 A2（ hnRNPA2） /類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（ PtA） 33抗體 ELISA在疾病診斷中的作用 ELISA法檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌抗體 ELISA試劑盒商業(yè)資訊 ELISA試劑盒 酶聯(lián)免疫
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