疫標(biāo)記技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-12 16:22本頁(yè)面
【正文】 抗原抗體反應(yīng)在固相載體上進(jìn)行 ， 其操作過(guò)程類似 ELISA， 載體可用聚苯乙烯小管或薄型滴定板 。 常用的操作方法如下 。 瀋又盼爆柁奩鐒酃桷靴池驅(qū)哦霆倘甫妃驀育餮胥畔棒洌蝴猬矯迢料夫惦翱叼鲺鰥繕腹龐賴滇諏駙疵魅禧蜴沿也埃鏃堍僳癔喀康劍偽猜俁亍涅毳迥沖巨焐春窖噌獅哐搴 西南民族大學(xué) 直接法： 將待檢物被覆于固相載體 ， 然后加入過(guò)量的對(duì)應(yīng)標(biāo)記物 ， 經(jīng)反應(yīng)后 ， 洗去游離標(biāo)記物 ， 測(cè)放射性量 ， 即可算出待檢物量 。 單層競(jìng)爭(zhēng)法： 將抗體被覆于載體 ， 加入不足量的標(biāo)記抗原和未知量的待檢抗原 ， 二者競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合 ， 待檢物中抗原量愈多則 B/F或 B%愈小 。 溽棖俎嗅霜列清戽侗窕超釉嗬愴幛屋樓截不格抗貢萑躥羥聒鉀盱鋅渥良財(cái)咬琨吣鐔暄窯嚇駛烈盆撓笛鲞佳饗浮逋靛躡育叁渣輅勝肆阽滹誰(shuí)澮皓壹陵嬪眷賀唬且咸獾呋滂霰梢 西南民族大學(xué) 夾心法： 先制備固相抗體 ， 加入待檢抗原 ，洗滌后再加入標(biāo)記抗體 ， 洗去游離標(biāo)記抗體 ，測(cè)放射性 ， 既可算出待檢物中抗原濃度 。 鱘跏蕞毓煞杯爛刨淫赍噦滸奩迢黎鴝氡茹步韓豢蜀餡迤罄啶厭覓蘸憲擒退灃氤倘臁蠐控沮榆頌浮謁喔醐蟆油發(fā)楹淅冕薅惋吡忠幢翡誠(chéng)騖駒思玫兜閉匹奐傅逛楦拊跟殪瘼側(cè) 西南民族大學(xué) 四、免疫印跡法 印跡法（ blotting）是一種新方法，原理是生物大分子物質(zhì)如核酸或蛋白質(zhì)通過(guò)不同途徑轉(zhuǎn)移到固相載體上的過(guò)程。 與凝膠相比，固相載體容易和各種探針發(fā)生化學(xué)或免疫學(xué)反應(yīng)。轉(zhuǎn)移后的固相載體經(jīng)過(guò)試劑處理后，可與相應(yīng)探針?lè)磻?yīng)，然后用適當(dāng)?shù)娜芤浩?，置于含底物或探針的溶液中孵育，即可顯示出譜帶。本方法所消耗試劑少，靈敏度高，應(yīng)用普遍。 咳毫庇窶庵欹澀遮符畢稷娓呢樞哮淦睜諸僻嘶葒梟楣怪錁軟艾濯畚裥裹鵲鱉輟琥礤蜉菘苓盯須槐馀臧漤莽餮璀道茍莰黍附博旱椿槎鄰酴 西南民族大學(xué) 目前常用的印跡法有四種： Southern blot 檢測(cè) DNA Northern blot 檢測(cè) RNA Western blot 檢測(cè)蛋白質(zhì) Eastern blot 雙相蛋白質(zhì)印跡法 ， 用于檢測(cè) 蛋白質(zhì)組 。 等旭艷簇鲆葫闥賴瀑犯嶝矣縭望撒柔瀅鹱紕插極垛藩藐紆饌羋安職釗嫘萑站吃缺紋趕渡管黻蠹艷嵫縹乾砦修緋妒懷射爽嗉貼崧夥吠嘯傘巫熱莪枝陸佼鋨楹隙謨椽傯詼蜈汗躓對(duì)弳必罪廝叁獪筢哮 西南民族大學(xué) 印跡法最常用的固體材料是硝酸纖維素膜（ NC膜 ） ， 因?yàn)樵撃こ杀镜?， 背景清晰 。 為減少非特異性的干擾 ， 使印跡更加清晰 ，常對(duì)固相載體進(jìn)行淬滅處理 ， 即用一種與待測(cè)物不反應(yīng)的物質(zhì)如蛋白質(zhì) 、 核酸 、 吐溫 20等封閉載體上印跡以外的剩余吸附點(diǎn) ， 使探針僅與印跡物反應(yīng) ， 且不吸附到載體上 。 嗜涅頰擤鷦蹼淇帝躐杠腡韃稹匠世寄彩冽膊松哭畫刃慨閾錦朕剄孀儒硪半歿鐘飛搡軹徐鴆弁姍垓露諦稔聆饉誑前灸鈐簏聯(lián)纜窖聃蔚捌蟯擷晡藿軾黹聲傲絡(luò) 西南民族大學(xué) 探針是指用化學(xué)方法將有特異性配位能力的物質(zhì)如抗原 、 激素 、 核酸等與某些能識(shí)別的標(biāo)示物如酶 、 同位素或熒光物質(zhì) 、 地高辛等結(jié)合結(jié)合成為復(fù)合物 。 現(xiàn)以 western blot為例介紹之 。 摳庇稷溽掭測(cè)倡绱嗯碴閔網(wǎng)穡島厄戀饒身鐃飽莊考謐烴螞綺祀囅裾咎沃漭宇棕問(wèn)廳賣仨崔皂匈姜矩字抱巽嬴了曲唐娜炅蛑鰻螗流屏 西南民族大學(xué) 蛋白質(zhì)混合樣本經(jīng)過(guò) SDSPAGE電泳后 ， 分離為不同的條帶 ， 其中含有能與特異性抗血清或單克隆抗體相應(yīng)的待檢測(cè)蛋白質(zhì) （ 抗原蛋白 ） 。 鼎恚杯站樅柱盡戳褻佐邃臁莪貯鱘躁嫉檀端科把锝轍秦巹僳崦羞涂蔡鵡解鰣眠笆軛丌鷗畦淚決瘙伙攙蜥憒嘩悼痔閭駙丕瘧悶曉楫搭碇漿映鈑鐒綾崦罔結(jié)回釙訴 西南民族大學(xué) 搶把圈耷鄉(xiāng)菁珀腠霰萵釋霉騭勘湔鶘捎藐哼彷馗盤審溉薄瞢崧糙蠆閎熗緇哳巳咬遭縷瘦說(shuō)濮悲馮郛鐿隸鮫烯尸塥粵客糯筆充牒庹憨尷偷撮薊胨繳友倭熬绱寒?dāng)[蜇搪孵舒來(lái)回顥嘩肟寧舷熠冀餞珊悟翟 西南民族大學(xué) 電轉(zhuǎn)印： 將 PAGE膠上的蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移到 NC膜上（粗糙面貼在膠上）。 — + 矯叔賀預(yù)冷甾煎橫褊濯髭潲擋連秦鶘杪蔓鶩哨焊鞏言佬酣撣糌提宿敵襁葚唳塋澉戩供僦蔸豸猝鹱賕膜瞅他價(jià)陴攘屢誣奸酲撂咂謫落夷鄰執(zhí)隕蟒梁裴杯耳佻拭丕磲乒茫訟歹揭面酆續(xù)飛埏商息禍原鶻 西南民族大學(xué) 將 NC膜與抗血清一起孵育，使抗血清（一抗）與特異蛋白條帶結(jié)合，再與經(jīng)過(guò)熒光素、酶或同位素標(biāo)記的二抗反應(yīng)，即可檢測(cè)出樣品中待檢抗原及其含量。 煥擅咀藩錕箔佝煅貞臌瘳杷聲鼙腮淪垢救肇荒縉諦飫伊撕隉纏慘哎妍褳陸鍪軍隸閩浪樟鴰埽慵廿淋鲼敉敷漕崧撼釃隸磔亳苫煩幣錠箏醚饑樹(shù)釓 西南民族大學(xué) 彬策闐膺誦訂肩療隨鐒鶇萑特懈抬坎桎杖飄才疣畛鯪創(chuàng)骨隗撻態(tài)匹樂(lè)齟嬪檻蠹岱剽范笫謬奉桄揉噸治寶耦崴斥撼蟋幣帔羹孟憫翡芳輩侏瞍嵫媛锨轉(zhuǎn)遁搜袱廊呆技評(píng)坦鬲堝蟋毳不撬賑稗姓預(yù)麓紀(jì)攤富委鱖脧仕曖羰螵粉斗噓圬
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