疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-01 18:21本頁(yè)面
【正文】 光免疫、酶免疫 μg~ng（ 106 ~109 g） ? 放射免疫 、發(fā)光免疫 ng~pg（ 109 ~1012 g） ? PCR pg~fg（ 1012 ~1015 g） 第四節(jié) 放射免疫技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用 放射免疫分析（ RIA） 一、基本原理 放射免疫分析的基本原理是 標(biāo)記抗原 Ag*和 非標(biāo)記抗原 Ag對(duì)特異性抗體 Ab的 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng) 。 反應(yīng)式為： Ag* + Ab Ag*Ab + Ag AgAb 標(biāo)記抗原 抗體 非標(biāo)記抗原 圖 146 放射免疫 RIA 以標(biāo)記抗原與反 應(yīng)系統(tǒng)中未標(biāo)記 抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特 異性抗體來(lái)測(cè)定 待檢樣品中抗原 量。 免疫放射 IRMA 以過(guò)量標(biāo)記抗體 與抗原非競(jìng)爭(zhēng)結(jié) 合，采用固相免 疫吸附載體分離 游離和結(jié)合標(biāo)記 抗體。 ?放射受體分析 RRA ?放射配體結(jié)合 分析 RBA 其它 一、基本原理 第四節(jié) 放射免疫技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用 二、標(biāo)記物 P333 常用的核素有兩大類 ? γ射線： 131I、 125I、 57Cr和 60Co ? β射線： 14C、 3H和 32P。 使用最廣泛的是： 125I ① 性質(zhì)活潑、易制備標(biāo)記物 ②對(duì)被標(biāo)記物的免疫活性影響小 ③測(cè)量方法簡(jiǎn)便、已推廣 ④半衰期較長(zhǎng)、核素豐度高 B、 F分離技術(shù) —— 第二抗體沉淀法 第四節(jié) 放射免疫技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用 測(cè)量?jī)x器 ? （ 1） γ 計(jì)數(shù)儀 ? （ 2） β 液閃儀 化學(xué)發(fā)光 （ chemiluminescence） 是指伴隨化學(xué)反應(yīng)過(guò)程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象。 化學(xué)發(fā)光 發(fā)光免疫分析技術(shù)（ Luminescent immunoassay，LIA） 光照發(fā)光 （ photoluminescence） 是指發(fā)光劑（熒光素）經(jīng)短波長(zhǎng)的入射光照射后，電子吸收能量躍遷到激發(fā)態(tài)，在其回復(fù)至基態(tài)時(shí)，發(fā)射出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的可見光（熒光）。 生物發(fā)光 （ bioluminescence） 是指發(fā)生在生物體內(nèi)的發(fā)光現(xiàn)象，如螢火蟲的發(fā)光，反應(yīng)底物為螢火蟲熒光素，在熒光素酶的催化下， 利用 ATP能 ，生成激發(fā)態(tài)氧化型熒光素，它在回復(fù)基態(tài)時(shí)多余的能量以光子的形式釋放出來(lái)。 化學(xué)發(fā)光 （ chemiluminescence） 是指伴隨化學(xué)反應(yīng)過(guò)程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象。某些物質(zhì) (發(fā)光劑 )在化學(xué)反應(yīng)時(shí)， 吸收了反應(yīng)過(guò)程中所產(chǎn)生的化學(xué)能 ，使反應(yīng)的產(chǎn)物分子或反應(yīng)的中間態(tài)分子中的電子躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子從激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光子的形式釋放出能量，這一現(xiàn)象稱為化學(xué)發(fā)光。 化學(xué)發(fā)光 一些化學(xué)反應(yīng)能釋放足夠 的能量把參加反應(yīng)的物質(zhì)激 發(fā)到能發(fā)射光的電子激發(fā)態(tài)， 若被激發(fā)的是一個(gè)反應(yīng)產(chǎn)物 分子，則這種反應(yīng)過(guò)程叫直 接化學(xué)發(fā)光。反應(yīng)過(guò)程可簡(jiǎn)單地描述如下： A十 B C* C* C＋ hγ 其中 γ 為光子， C*表示 C處于單線激發(fā)態(tài)。 發(fā)光免疫分析技術(shù)（ Luminescent immunoassay， LIA） 1. 原理： （ 1） LIA： 在氧化還原反應(yīng)中電子被激發(fā)，可釋放光子，使發(fā)光劑魯米諾（氨基苯二酰肼類）發(fā)光。用發(fā)光劑標(biāo)記抗原或抗體 （ 2）發(fā)光酶免疫測(cè)定（ LEIA）： 用能催化發(fā)光反應(yīng)的酶（如葡萄糖氧化酶）標(biāo)記抗原或抗體，酶可使發(fā)光劑發(fā)光。該法經(jīng)酶促放大，更靈敏 . 根據(jù)發(fā)光的強(qiáng)弱對(duì)抗原或抗體定量 . 2. 優(yōu)點(diǎn)： 無(wú)放射性，故現(xiàn)正逐步取代 RIA 用吖啶酯直接標(biāo)記抗體 (抗原 )，與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原 (抗體 )發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體 待測(cè)抗原 吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)只需加入氧化劑（ H2O2）和NaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光 。 由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，這部分光的積分與待測(cè)抗原的量成正比，可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原的含量。 直接化學(xué)發(fā)光免疫分析 發(fā)光 磁微粒 被測(cè)抗原 + 抗體 + 帶丫啶酯標(biāo)記物抗體 沖洗后 夾心法 （ 1） 加入 H2O2 （ pH10） （ 2） 加入堿 （ pH10） 直接化學(xué)發(fā)光的機(jī)理 磁 微粒 模式圖 Y 特點(diǎn) – 已結(jié) 合 的抗原和抗體 與未 結(jié)合部分 的 易 分離 磁微粒 技術(shù)
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