疫學(xué)檢測技術(shù)ppt課件-wenkub.com
2025-04-28 18:21 本頁面
【正文】 該法經(jīng)酶促放大，更靈敏 . 根據(jù)發(fā)光的強(qiáng)弱對抗原或抗體定量 . 2. 優(yōu)點(diǎn)： 無放射性，故現(xiàn)正逐步取代 RIA 用吖啶酯直接標(biāo)記抗體 (抗原 )，與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原 (抗體 )發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體 待測抗原 吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)只需加入氧化劑（ H2O2）和NaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光 。反應(yīng)過程可簡單地描述如下： A十 B C* C* C＋ h 生物發(fā)光 （ bioluminescence） 是指發(fā)生在生物體內(nèi)的發(fā)光現(xiàn)象，如螢火蟲的發(fā)光，反應(yīng)底物為螢火蟲熒光素，在熒光素酶的催化下， 利用 ATP能 ，生成激發(fā)態(tài)氧化型熒光素，它在回復(fù)基態(tài)時(shí)多余的能量以光子的形式釋放出來。 免疫放射 IRMA 以過量標(biāo)記抗體 與抗原非競爭結(jié) 合，采用固相免 疫吸附載體分離 游離和結(jié)合標(biāo)記 抗體。 ? 用于蛋白質(zhì)、激素、其他生理活性物質(zhì)、藥物殘留、抗生素等的檢測。封閉的操作與包被相類似。 是 ELISA成敗的關(guān)鍵試劑 。 （ 4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。 （一）雙抗體夾心法 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故 可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析 。 酶聯(lián)免疫吸附劑測定 enzyme linked immunosorbent assay， ELISA 第三節(jié) 免疫酶技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用 ELISA 基本原理 ①使抗原或抗體 結(jié)合到某種固相載體表面 ，并保持其免疫活性。 第一節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù)原理 二、抗原或抗體檢測的方法： 1. 免疫熒光技術(shù) ? 直接熒光法 ? 間接熒光法 第一節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù)原理 二、抗原或抗體檢測的現(xiàn)代方法： P313 2. 酶聯(lián)免疫分析法 3. 放射免疫分析法 第二節(jié) 免疫熒光技術(shù)在食品檢測中 的應(yīng)用 一、基本原理： 將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，試劑與標(biāo)本中相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，測定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)，稱為 免疫熒光素技術(shù) 。根據(jù)沉淀圈的大小確定抗原的含量 ? 二、沉淀反應(yīng) 二、沉淀反應(yīng) 另外還有其他眾多的免疫檢測技術(shù)和手段，其機(jī)理都利用了抗原抗體的沉淀反應(yīng)。 二、沉淀反應(yīng) 抗原抗體為單一體系時(shí)，抗原濃度不同，沉淀弧的特征不同： 抗原抗體為多體系時(shí)，出現(xiàn)的沉淀弧有多條，彼此互不干擾?？捎^測到沉淀弧。 環(huán)狀沉淀反應(yīng) 在試管中加入抗體后，小心加入相應(yīng)抗原，使抗原抗體步混合， 37度保溫 1020min，在二者界面上出現(xiàn)環(huán)狀沉淀。顆?？乖缤暾募?xì)菌、紅細(xì)胞等與相應(yīng)抗體相混合，在一定條件下出現(xiàn)凝集。 P 312 第一節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù)原理 可作為抗原進(jìn)行檢查的物質(zhì)： ? 微生物及其大分子產(chǎn)物 ? 人和動物細(xì)胞 ? 人和動物體內(nèi)的各種大分子 ? 各種半抗原 抗原或抗體檢測原理 較早的抗原抗體反應(yīng)檢測方法 凝集反應(yīng) （ Agglutination) 沉淀反應(yīng) (Precipitation) 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) (Complement fixation test ) 中和試驗(yàn) (Neutralization test) 一、凝聚反應(yīng) (Agglutination) 二、沉淀反應(yīng) 溶液中的沉淀反應(yīng) 凝膠擴(kuò)散沉淀 免疫電泳 血清免疫電泳 火箭電泳 對流免疫電泳 三、補(bǔ)體參與的反應(yīng) 四、免疫標(biāo)記的抗原抗體技術(shù) 酶聯(lián)免疫吸附（ ELISA） 一、凝集反應(yīng) 凝集反應(yīng)是指 顆粒抗原 與相應(yīng)抗體結(jié)合反應(yīng)出現(xiàn)的可見性現(xiàn)象。 ? 多克隆抗體 (PAb)： 多個(gè)抗原決定簇免疫機(jī)體 所產(chǎn)生的多種抗體的混合物。 抗原分子中抗原的特異性由 抗原決定簇決定。 親緣關(guān)系越遠(yuǎn)，差異越大，抗原性越強(qiáng)。 抗原 （ Antigen） 抗原概念 凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并
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