酵母表達系統ppt課件-資料下載頁
2025-05-03 18:37本頁面
【正文】 復序列： rDNA 提供多個整合位點 B、缺陷型標記基因： Leu2d 提高選擇壓力 C、抗性標記； neo 提高選擇壓力 甲醇 酵母系統胞內表達載體 表達載體類型 需要帶入 ATG 單位點 甲醇 酵母系統胞內表達載體 表達載體類型 需要帶入 ATG 多位點 甲醇 酵母系統分泌表達載體 信號肽： PHO1 甲醇 酵母系統分泌表達載體 信號肽： MFα 甲醇 酵母系統分泌表達載體 信號肽： MFα 標記： Kan 甲醇 酵母系統高效表達影響因素與對策 載體穩(wěn)定性 基因劑量 整合位點 甲醇利用表型 mRNA5’端 AT含量分泌信號 表達產物穩(wěn)定性 1）載體穩(wěn)定性 同拷貝數時，整合型的比自主復制型的表達水平高 YRp型載體的穩(wěn)定化： 選擇 — 非選擇培養(yǎng)交替數十代可得穩(wěn)定的整合子，但費時，整合位點不確定。 采用 YIp型載體 : 更易實現整合、整合位點清楚 2）基因劑量 外源基因表達存在基因劑量效應 篩選多拷貝整合子 載體引入 G418/Zeocin抗性標記，整合子拷貝數與抗性成正相關，采用高 G418/Zeocin抗性轉化子。 體外串聯多個表達盒，直接獲多拷貝整合子 采用 YRp型載體穩(wěn)定化技術獲高拷貝整合子 構建高拷貝整合型表達載體 3）整合位點 外源基因表達盒整合于 AOX/MOX或標記基因處，均可高效表達 畢赤酵母中個別情況整合于 His4位點的比 AOX1位點的低 4）甲醇利用表型 在分泌表達情況下，甲醇慢生長型更利于表達 5） mRNA5’端 mRNA5’端非翻譯區(qū)（ UTR）的組成與長度 應盡量與 AOX1/MOX的一致 應盡量避免在 UTR區(qū)出現 AUG和次級結構 6）基因序列的 AT含量 AT含量越高、越容易出現類似于終止子的結構 7）分泌信號 分泌表達效率與所用分泌信號高度相關 可采用釀酒酵母來源的 MFα、 PHO或 SUC等的信號肽，或野生型信號肽，但適用性要比較分析。 8）表達產物穩(wěn)定性 分泌表達時，胞外蛋白酶是要影響因素 降低培養(yǎng)基 pH值：蛋白酶在酸性條件下活性較低 培養(yǎng)基中添加蛋白水解產物：競爭性抑制 采用蛋白酶缺陷宿主株：如 SMD1168
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1