酵母表達系統(tǒng)ppt課件(完整版)
【正文】 信號肽不能互用 *信號肽結構： 釀酒酵母 信號肽特點 正電荷區(qū) 疏水區(qū) 極性區(qū) Met 目的蛋白 信號肽剪切位點 *分泌效率高 *在酵母系統(tǒng)具有通用性 *88個殘基組成 MFα信號肽 Met 目的蛋白 LysArgGluAlaGluAla KEX2 DAP DAP DAP： STE13編碼的二肽酶 糖基化位點： AsnXThr/Ser（ X代表任何氨基酸） N型糖基化： 天門冬酰氨酸 殘基上的 酰胺氮 進行糖 基化，對蛋白質(zhì)的折疊、穩(wěn)定性及活性較重要。 體外串聯(lián)多個表達盒，直接獲多拷貝整合子 采用 YRp型載體穩(wěn)定化技術獲高拷貝整合子 構建高拷貝整合型表達載體 3）整合位點 外源基因表達盒整合于 AOX/MOX或標記基因處，均可高效表達 畢赤酵母中個別情況整合于 His4位點的比 AOX1位點的低 4）甲醇利用表型 在分泌表達情況下，甲醇慢生長型更利于表達 5） mRNA5’端 mRNA5’端非翻譯區(qū)（ UTR）的組成與長度 應盡量與 AOX1/MOX的一致 應盡量避免在 UTR區(qū)出現(xiàn) AUG和次級結構 6）基因序列的 AT含量 AT含量越高、越容易出現(xiàn)類似于終止子的結構 7）分泌信號 分泌表達效率與所用分泌信號高度相關 可采用釀酒酵母來源的 MFα、 PHO或 SUC等的信號肽，或野生型信號肽，但適用性要比較分析。 畢赤酵母 （ Pichia pastoris) 漢森酵母 （ Hansenula ploymorpha) 假絲酵母 （ Candia boidinii) 甲醇 酵母與甲醇氧化酶啟動子 甲醇氧化酶 A、甲醇代謝關鍵酶，占可溶蛋白的 30%以上 B、名稱和拷貝數(shù)不同 畢赤酵母 /假絲酵母 漢森酵母 醇氧化酶 甲醇氧化酶 alcohol oxidase,AOX methanol
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1