酵母表達(dá)系統(tǒng)ppt課件(完整版)
【正文】 信號(hào)肽不能互用 *信號(hào)肽結(jié)構(gòu)： 釀酒酵母 信號(hào)肽特點(diǎn) 正電荷區(qū) 疏水區(qū) 極性區(qū) Met 目的蛋白 信號(hào)肽剪切位點(diǎn) *分泌效率高 *在酵母系統(tǒng)具有通用性 *88個(gè)殘基組成 MFα信號(hào)肽 Met 目的蛋白 LysArgGluAlaGluAla KEX2 DAP DAP DAP： STE13編碼的二肽酶 糖基化位點(diǎn)： AsnXThr/Ser（ X代表任何氨基酸） N型糖基化： 天門冬酰氨酸 殘基上的 酰胺氮 進(jìn)行糖 基化，對(duì)蛋白質(zhì)的折疊、穩(wěn)定性及活性較重要。 體外串聯(lián)多個(gè)表達(dá)盒，直接獲多拷貝整合子 采用 YRp型載體穩(wěn)定化技術(shù)獲高拷貝整合子 構(gòu)建高拷貝整合型表達(dá)載體 3）整合位點(diǎn) 外源基因表達(dá)盒整合于 AOX/MOX或標(biāo)記基因處，均可高效表達(dá) 畢赤酵母中個(gè)別情況整合于 His4位點(diǎn)的比 AOX1位點(diǎn)的低 4）甲醇利用表型 在分泌表達(dá)情況下，甲醇慢生長(zhǎng)型更利于表達(dá) 5） mRNA5’端 mRNA5’端非翻譯區(qū)（ UTR）的組成與長(zhǎng)度 應(yīng)盡量與 AOX1/MOX的一致 應(yīng)盡量避免在 UTR區(qū)出現(xiàn) AUG和次級(jí)結(jié)構(gòu) 6）基因序列的 AT含量 AT含量越高、越容易出現(xiàn)類似于終止子的結(jié)構(gòu) 7）分泌信號(hào) 分泌表達(dá)效率與所用分泌信號(hào)高度相關(guān) 可采用釀酒酵母來(lái)源的 MFα、 PHO或 SUC等的信號(hào)肽，或野生型信號(hào)肽，但適用性要比較分析。 畢赤酵母 （ Pichia pastoris) 漢森酵母 （ Hansenula ploymorpha) 假絲酵母 （ Candia boidinii) 甲醇 酵母與甲醇氧化酶啟動(dòng)子 甲醇氧化酶 A、甲醇代謝關(guān)鍵酶，占可溶蛋白的 30%以上 B、名稱和拷貝數(shù)不同 畢赤酵母 /假絲酵母 漢森酵母 醇氧化酶 甲醇氧化酶 alcohol oxidase,AOX methanol
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1