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2025-05-03 03:38本頁面
【正文】 的細(xì)胞能得到最高的存活率，這時(shí)多數(shù)細(xì)胞處在比較理想的狀態(tài)。 2 冰凍前的預(yù)處理 對材料進(jìn)行抗旱鍛煉或預(yù)培養(yǎng)能增強(qiáng)細(xì)胞的存活率。 預(yù)處理措施： 繼代及同步培養(yǎng)； 在高滲或冰凍保護(hù)劑培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)； 零上低溫馴化 3 冰凍保護(hù)劑 冰凍保護(hù)劑的使用能減少超低溫保存造成的傷害。 保護(hù)劑的作用： 降低冰點(diǎn)； 增強(qiáng)溶液黏性，防止冰晶生長； 促進(jìn)細(xì)胞在結(jié)冰早期進(jìn)行保護(hù)性脫水。 常用的冰凍保護(hù)劑 DMSO、甘油 4 冷凍速度 慢凍法：樣品以 ~10度 /min的速度緩慢降至 30~40度，平衡一段時(shí)間后轉(zhuǎn)入液氮保存； 適用于懸浮細(xì)胞和原生質(zhì)體。 快凍法：直接投入液氮中冷凍，溫度下降速度300~1000度 /min； 適合含水量比較少的材料，如花粉、種子、枝條。 逐級冷凍法：起先以較慢降低速度降溫使細(xì)胞失水達(dá)到保護(hù)性的脫水，形成高濃度的溶質(zhì)，然后分級降至30度、 70度、 100度、 196度。 干凍法：通過控制脫水速度和脫水程度，對植物材料進(jìn)行干燥處理能增強(qiáng)抗凍性。 一般用真空干燥法進(jìn)行干燥，干燥后投入液氮保存。 5 貯存 從理論上講，只要保證不斷補(bǔ)充液氮，就可以長期保存冷凍的材料。但是有文獻(xiàn)報(bào)道，隨著時(shí)間的延長，冷凍莖尖的生活力下降。 6 解凍 貯藏于液氮中固定樣品，緩慢升溫時(shí)，細(xì)胞內(nèi)會再次結(jié)冰，危險(xiǎn)區(qū)大概在 50~10度。 實(shí)驗(yàn)表明，冰凍過的材料在 35~40度水浴中解凍比在室溫解凍效果好。 冰凍的材料細(xì)胞很脆弱，解凍時(shí)應(yīng)避免劇烈搖動(dòng)。 7 解凍后的處理 解凍后殘留于細(xì)胞的冰凍保護(hù)劑會影響材料的恢復(fù)生長，所以需要除去保護(hù)劑； 但是沒有必要連續(xù)洗滌，多次洗滌對細(xì)胞的傷害往往會更大。 8 解凍后活力測定 再培養(yǎng)； FDA染色； TTC染色：檢測細(xì)胞內(nèi)脫氫酶活性 人工種子 體細(xì)胞胚與人工種子 ? 體細(xì)胞胚是由植物體細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的類似于合子胚的結(jié)構(gòu)； ? 把離體培養(yǎng)產(chǎn)生的體細(xì)胞胚或能夠發(fā)育成完整植株的分生組織包埋在含有營養(yǎng)物質(zhì)和具有保護(hù)作用的外殼中，在適宜的條件下就可以長出幼苗，這種類似于天然種子的結(jié)構(gòu)稱為人工種子。 人工種子的結(jié)構(gòu) ? 1 胚狀體 類似于天然種子的胚，主要是組培產(chǎn)生的胚狀體、愈傷組織、小鱗莖等； ? 2 人工胚乳 相當(dāng)于組培中的培養(yǎng)基，提供營養(yǎng)和激素； ? 3 人工種皮 透水透氣，固定成型，耐受機(jī)械損傷 人工種子的意義 ? 可以使在自然狀態(tài)下不結(jié)實(shí)或種子昂貴的植物得以繁衍； ? 固定雜種優(yōu)勢； ? 快捷高效的繁殖方式； ? 可人為控制植物的生長發(fā)育和抗逆性。 ? 人工種子目前只在一些模式生物如胡蘿卜、苜蓿等植物中有成功報(bào)道； 本節(jié)完 下節(jié)內(nèi)容 細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用
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