發(fā)酵過程控制ppt課件(2)-資料下載頁
2025-05-02 12:08本頁面
【正文】 0u 2022/5/30 75 酶活力的表示法 酶活力用單位來表示。由于酶通常不是很純，不能用重量來表示酶的量。同一種酶用不同的方法測(cè)定會(huì)有不同的酶活單位，容易造成混亂，為此國(guó)際上作了統(tǒng)一規(guī)定，規(guī)定在 25℃ 下，以最適的底物濃度，最適的緩沖液離子強(qiáng)度，以及最適的 pH諸條件下，每分鐘能轉(zhuǎn)化一微克分子底物的酶定量為一個(gè)活性單位。 2022/5/30 76 （二） 產(chǎn)物量的測(cè)定 化學(xué)法 （ 1）滴定法 產(chǎn)物能使一定指示劑變色來指示反應(yīng)終點(diǎn)的可用滴定法 如青霉素在堿性條件下加入過量的 I2，反應(yīng)生成青霉噻唑酸碘，用 Na2S2O3滴定多余的碘，可計(jì)算出青霉素的單位 2 2 3 22, N A S O IO H I??????? ??????? 滴定多余過量青霉素 青霉噻唑酸碘 計(jì)算青霉素效價(jià)檸檬酸可以用 NaOH滴定來計(jì)算檸檬酸產(chǎn)量 2022/5/30 77 （ 2）比色法 產(chǎn)物經(jīng)一定化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生顏色，且顏色深淺與產(chǎn)物濃度成正比，可以用比色法測(cè)定。 22,O H H O Fe? ???????? ????加熱，－鏈霉素 麥芽酚 藍(lán)色淀粉酶活力測(cè)定：在 1%可溶性淀粉溶液中加入淀粉酶，所釋放出的麥芽糖與生色試劑（ 3，5二硝基水楊酸與酒石酸鉀鈉的堿溶液）產(chǎn)生顏色，它在 540nm處所得吸光度跟淀粉酶活力成正比。 2022/5/30 78 （ 3）測(cè)壓法 產(chǎn)物特定反應(yīng)放出或攝入氣體，使系統(tǒng)有壓力變化，可以通過測(cè)定壓力變化得知產(chǎn)物量。 物理法 許多酶、抗生素都有不對(duì)稱碳原子，具有旋光性，因此可以通過測(cè)定旋光度來測(cè)定酶或抗生素的含量。 谷氨酸 ?????? ?? 谷氨酸脫氫酶 γ－氨基丁酸＋ CO2 2022/5/30 79 化學(xué)和物理方法優(yōu)點(diǎn)：快速、方便，經(jīng)常用于過程分析 缺點(diǎn)產(chǎn)品中存在的雜質(zhì)會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果，因此抗生素成品的測(cè)定用生物法測(cè)定。 適用于抗生素效價(jià)的測(cè)定 生物法以抗生素的殺菌能力為衡量效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn) ，其原理恰好與臨床應(yīng)用的要求相一致，而且此法靈敏度高，需用的檢品量較小，這是其它方法不能比的。但此法得到結(jié)果比較慢，需經(jīng)過 16~18小時(shí)培養(yǎng)。生物法常用于發(fā)酵終了產(chǎn)品效價(jià)的測(cè)定。 生物法 2022/5/30 80 常用的生物法測(cè)定抗生素，采用 杯碟法 “杯”（牛津杯）是放被測(cè)抗生素的不銹鋼小管，小管內(nèi)徑為 6mm，高 10mm的圓筒形管子，管子的重量盡可能相等。碟是攤布培養(yǎng)基的玻璃培養(yǎng)皿。 操作方法是：將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每碟 15ml（下層），待其凝固。此外，將融化的培養(yǎng)基冷卻到 500C左右混入試驗(yàn)菌，將混有菌的培養(yǎng)基 5 ml加到已凝固的培養(yǎng)基上待凝固（上層）。 2022/5/30 81 在培養(yǎng)基表面垂直放上小杯，在杯中加入待檢樣品，加滿后在 370C培養(yǎng) 16~18小時(shí)。在培養(yǎng)中 ,一方面試驗(yàn)菌開始生長(zhǎng)另一方面抗生素呈球面擴(kuò)散，離杯越近，抗生素濃度越大，離杯越遠(yuǎn)抗生素濃度越小。隨著抗生素濃度減小，有一條最低抑菌濃度帶，在帶范圍內(nèi)，菌不能生長(zhǎng)，而呈透明的圓圈，這就叫“抑菌圈”?？股貪舛仍礁撸志υ酱?， 2022/5/30 82 r: 抑菌圈的半徑 (毫米） M：抗生素在管中的量（單位） C：最低抑菌濃度（單位 /毫升） H：培養(yǎng)基的厚度（毫米） L：管子的高度（毫米） D：抗生素的擴(kuò)散系數(shù)（毫米 /小時(shí)） T：細(xì)菌生長(zhǎng)到肉眼所用的時(shí)間 （小時(shí)） 2022/5/30 83 抗生素濃度與抑菌圈的半徑成一定數(shù)學(xué)關(guān)系 logM=(1/)r2+log() 抗生素的總量的對(duì)數(shù)值與抑菌圈半徑的平方呈正比。此外還受 C、 H、 D、T的影響 但是 C、 H、 D、 T是無法測(cè)量的，在實(shí)際計(jì)算中要設(shè)法消去 2022/5/30 84 一般的消去方法有 ?二劑量法 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線法 2022/5/30 85 KmMmM ??39。39。兩劑量法： 標(biāo)準(zhǔn)品低單位 總量 :m 抑菌圈半徑 SL 標(biāo)準(zhǔn)品高單位 總量 :M 抑菌圈半徑：SH 樣品高單位 總量 :M’ 抑菌圈半徑 UH 樣品低單位 總量 :m’ 抑菌圈半徑： UL )4l o g () 1(l o g 2 DT HCSDTM H ????)4l o g () 1(39。l o g 2 DT HCUDTM H ????)4l o g () 1(39。l o g 2 DT HCSDTm L ????)4l o g () 1(l o g 2 DT HCUDTm L ??????MM 39。? ?? ? KUSUSSUSULLHHLLHH l o gl o g22222222????????已知： 令： 得出： ? ?? ? KUSUS SUSU LLHH LLHH l o gl o g ??? ?????→ KWV lo glo g ??→ 2022/5/30 86 logM’—logM＝ D T HCDT U H ? g) 1( 2 ?_ DTHCDT S H ? o g) 1( 2 ?logM’/M= 同理 logm’—logm=logm’/m= )( 1 22 SU HHDT ?=logθ =logθ )(1 22LL SUDT ?2logθ= )(1 2222LLHH SUSUDT ???)( )(loglog 22222222LHLHLLHH SSUU SUSUK ??? ?????2022/5/30 87 logM’—logm’=logM’/m’= )(1 22 UULHDT ?=logK logM—logm=logM/m= )( 1 22 LH SSDT ? =logK 2logK= )(1 2222LHLH SSUUDT ???)()(l ogl og22222222LHLHLLHHSSUUSUSUK ????????2022/5/30 88 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 優(yōu)點(diǎn)：在一個(gè)碟子上可以同時(shí)做兩個(gè)樣品的效價(jià)，當(dāng)要做的樣品量大時(shí)，采取標(biāo)準(zhǔn)曲線法可以提高效率。 假設(shè)選用的濃度為： 3U， 4U，5U， 6U,7U 中心點(diǎn)是 5U 1 1 2 2 2022/5/30 89 每個(gè)濃度做三個(gè)碟子。 5U為中心點(diǎn)，每個(gè)碟子中有 3個(gè)杯中加中心點(diǎn)濃度，其余 3個(gè)加其它濃度。測(cè)得抑菌圈后，將濃度和抑菌圈平均直徑做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2022/5/30 90 logM r 2022/5/30 91 管碟法影響因素的討論： )4l o g () 1(l o g 2 DT HCrDTM ????斜率小 D、 T大 ,誤差小 截距小 C、 D、 T、 H小，誤差小 2022/5/30 92 logM r logM1 r1 r1 r1 2022/5/30 93 ?培養(yǎng)基厚度 H越小，其它條件相同時(shí) r越大。 影響 H的因素：培養(yǎng)基的厚度 ?細(xì)菌生長(zhǎng)到肉眼可見所需的時(shí)間 T越大在其它條件相同時(shí)， r越大 影響 T的因素：菌體本身，及影響菌體生長(zhǎng)的條件如：接種量，培養(yǎng)溫度、及營(yíng)養(yǎng)環(huán)境 其它影響因素：上層鋪得平整、菌液加入時(shí)的溫度、鋼圈的放置、滴液
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1