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2025-05-01 18:15本頁(yè)面
【正文】 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測(cè)器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 FACSCalibur光路圖 每個(gè)探測(cè)器前往往為 BP，所以每個(gè)探測(cè)器只能接收特定波長(zhǎng)范圍的光信號(hào) FL1: 515nm 545nm 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測(cè)器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測(cè)器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 熒光光譜重疊與補(bǔ)償 530/30 585/42 利用電子術(shù)或計(jì)算機(jī)軟件等方法將串入相鄰熒光通道的信號(hào)加以扣除的技術(shù)稱(chēng) “ 熒光補(bǔ)償 ” 熒光補(bǔ)償 補(bǔ)償前 補(bǔ)償后 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測(cè)器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 — 體積 — 溫度 — 孵育時(shí)間 — 對(duì)照 4. 數(shù)據(jù)收集和分析 1) 畫(huà)圖（直方圖，散點(diǎn)圖） 2) 調(diào)整儀器設(shè)置到合適的狀態(tài) 3) 尋找目標(biāo)細(xì)胞 4) 我們可以得到怎樣的結(jié)果？ 它們意味著什么？ 儀器設(shè)置調(diào)節(jié) 1. 用陰性細(xì)胞調(diào)整儀器 PMT電壓 2. 用單染色的細(xì)胞調(diào)節(jié)儀器補(bǔ)償 二原則： 同型對(duì)照 （ Isotype control） — 例：一個(gè)雙色染色的實(shí)驗(yàn) 抗體 A FITC，抗體 B PE 對(duì)應(yīng)的同型對(duì)照是 IgG1 FITC,IgG1 PE 那么需要準(zhǔn)備的是 陰性對(duì)照：細(xì)胞加上 IgG1 FITC,IgG1 PE 單陽(yáng)性對(duì)照： FITC: 細(xì)胞加上 Ab A FITC PE: 細(xì)胞加上 Ab B PE 同型抗體為沒(méi)有特異性，與熒光抗體蛋白亞型一致的免疫球蛋白，通常是未進(jìn)行免疫小鼠血清的純化 IgG1或 IgG2. 同型對(duì)照就是使用同型抗體進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，反映待測(cè)樣本對(duì)抗體非特異性結(jié)合水平。 數(shù)據(jù)分析 — 設(shè)門(mén) — 設(shè)定陰性與陽(yáng)性群體的界限 — 確定陽(yáng)性與陰性細(xì)胞群體 — 統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性或陰性細(xì)胞群體的百分率，平均熒光值，絕對(duì)數(shù)或抗體結(jié)合數(shù) 如何設(shè)定陰性與陽(yáng)性的界限 直方圖 散點(diǎn)圖 Thanks!
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