紫外-可見分光光度法-資料下載頁
2025-04-30 05:03本頁面
【正文】 C H 3C = OC H 3安宮黃體酮 4 0 812 4 0%11m a x???cmEnm?5 7 112 4 0%11m a x???cmEnm?決諾酮 78 比較吸光度（吸光系數(shù)）的比值 不只一個(gè)吸收峰的化合物，可用在不同吸收峰處測(cè)得吸光度比值作為鑒別的依據(jù)?？上^對(duì)誤差 (或濃度、吸收池厚度 )。 212121EEClEClEAA ??例：中國藥典規(guī)定： B12在 361nm、 278nm吸光度的比值應(yīng)為 。361nm、 550nm比值為 。 79 作用：推斷發(fā)色團(tuán)及其之間的共軛關(guān)系，推斷分子的骨架。 １、飽和碳?xì)浠衔? 這類化合物在 200400nm沒有吸收，在紫外吸收光譜分析中常用作溶劑。 二、結(jié)構(gòu)分析 80 含有 K帶吸收，有共軛雙鍵。 在 200nm左右有吸收，可能有孤立雙鍵。 含有 R帶吸收，有 C＝ O等鍵 含有 B帶，有苯環(huán) 81 三、純度檢測(cè)： 雜質(zhì)檢查 A 化合物 無吸收 雜質(zhì) 強(qiáng)吸收 則含少量雜質(zhì)可用光譜檢查出來 82 B 化合物 強(qiáng)吸收 雜質(zhì) 無吸收 雜質(zhì)存在使化合物的表觀吸收系數(shù)值降低 C 化合物 強(qiáng)吸收 雜質(zhì) 更強(qiáng)吸收 雜質(zhì)存在使化合物的表觀吸收系數(shù)值升高 83 雜質(zhì)限量檢測(cè)： 腎上腺素中含雜質(zhì)腎上腺酮 在 310nm處， A 310nm 腎上腺酮 腎上腺素 84 167。 5 定量分析方法 測(cè)定條件： ① 波長的選擇 ② 控制 A大小 ③ 選擇合適的溶劑 85 選擇合適的溶劑 選擇原則： a 安全、無毒 b 被測(cè)物的溶解度大 C 不干擾：許多溶劑本身在紫外光區(qū)有吸收峰，所選用的溶劑應(yīng)不干擾被測(cè)組分的測(cè)定。 截止波長： 10mm光徑長度透過率 25%（ A=）的波長。 組分的測(cè)定波長必須大于溶劑的截止波長。 86 溶劑 極性 截止波長（ nm） 危險(xiǎn)性 蒸餾水 200 無 正已烷 199 易燃 無水乙醇 215 易燃 甲醇 215 易燃 /有毒 環(huán)已烷 211 易燃 /有毒 氯仿 245 易燃 /有毒 二甲亞砜 無 270 有毒 丙酮 331 易燃 一些常用溶劑性質(zhì) 87 注：使用易揮發(fā)性溶劑，最好用帶蓋的樣品池，以防溶劑揮發(fā)，改變樣品濃度。 綜上所述：常用溶劑中水、異丙醇、甲醇、乙醇 首選水，其次是甲（乙）醇。 甲醇用途廣范：原因主要是粘度小，色散小。 異丙醇有溶解氣泡的能力，折射光少，但價(jià)格較高。 88 一、單組分樣品的定量方法 （一）吸光系數(shù)法 根據(jù)公式 或 lAC??? lEACcm ?? %11計(jì)算物質(zhì)濃度的方法，也稱絕對(duì)法。 例 1： VB12的水溶液在 361nm處的 207%11 ?cmEb=1cm，測(cè)得 A=，則溶液濃度為？ 89 例： B12樣品 1000ml后，盛于 1cm吸收池中，在 361nm處測(cè)得吸光度A為 ，則：求其純度？ 90 （二）、工作曲線法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法） 步驟： ① 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定吸光度，繪制曲線。 ② 測(cè)定樣品吸光度。 ③ 計(jì)算樣品濃度。 91 配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定吸光度，繪制曲線。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 A C A C A C 92 影響標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)的原因： （ 1）空白溶液的選擇和配制不當(dāng)，不能完全消除干擾。 （ 2）顯色反應(yīng)不夠靈敏，被測(cè)組分低于某一濃度時(shí)不能顯色，無吸光度。 （ 3）吸收池的厚度或光學(xué)性能不一致；吸收池位置安放不妥；吸收池透光面不潔凈等。 93 計(jì)算樣品的濃度 方法： 作圖法 建立回歸方程 xbyaxxyyxxbbxayiii??????????2)())((94 ? ? ???????22 )()())((yyxxyyxxriiii相關(guān)系數(shù)（ r）：顯示所測(cè)數(shù)據(jù)的線性關(guān)系。0r1， r越接近 1，線性越好。紫外分光光度法一般要求 r。 造成 r不合要求的原因 :a 操作者操作誤差太大 .減免方法 :重新操作 . b 所選濃度范圍不對(duì) ,太大或太小 ,重新濃度范圍 . 95 標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)注意的問題 （ 1）制備一條標(biāo)準(zhǔn)曲線至少要 5個(gè)點(diǎn) （ 2）待測(cè)樣品濃度應(yīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍內(nèi) （ 3）待測(cè)樣品和對(duì)照品必須使用相同的溶劑系統(tǒng)和顯色系統(tǒng)，并在相同條件下測(cè)定。 （ 4）儀器更換元件，維修或重新校正波長時(shí)，必須重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 96 （三）對(duì)照法 在同樣條件下配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，在選定波長處，分別測(cè)量吸光度。 樣標(biāo)樣標(biāo)樣標(biāo)cclEclEcAA??使用條件： a通過原點(diǎn)時(shí)可用。 單點(diǎn)法對(duì)照法
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