免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟-資料下載頁(yè)
2025-04-16 23:05本頁(yè)面
【正文】 酸酶(AP)標(biāo)記的抗兔二抗，比例為1:200。將塑料大盒從冰庫(kù)中拿出，浸入TBS（PH=）緩沖液中洗一抗，5min，重復(fù)3次，在洗一抗的過(guò)程中準(zhǔn)備封口膜。將片子上的殘余緩沖液倒去（但片子必須保持濕潤(rùn)?。。。┟繌埰蛹硬簧儆?00ul的二抗稀釋液，蓋上封口膜，放入塑料大盒中，室溫放置1~。洗二抗并顯色 用TBS(PH=)緩沖液洗二抗，5min,重復(fù)3次。同時(shí)在暗處配制顯色液（40ul溶液A+40ul溶液B+720ul水，可根據(jù)實(shí)際切片數(shù)量按比例配制顯色液），剪切封口膜。將片子至于暗處，倒去緩沖液，每張片子加不少于100ul的顯色液，輕輕蓋上封口膜，放于暗處進(jìn)行顯色。每隔15分鐘左右看一下片子是否開(kāi)始顯色(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，加入顯色液30min~1小時(shí)會(huì)開(kāi)始顯色,但是需要根據(jù)不同蛋白表達(dá)強(qiáng)弱，把握顯色時(shí)間)。發(fā)現(xiàn)顯色之后需加蒸餾水終止反應(yīng)，再蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察并拍照。 試劑：1. PBS（PH=）: 購(gòu)買的小包裝粉末，溶于1L水中。2. TBS: Tris, NaCl溶于1L水中，3. 檸檬酸鈉緩沖液(PH=)： 檸檬酸三鈉?2H2O溶于1L蒸餾水中，4. 3%BSA封閉液 BSA溶于250毫升PBS(PH=)中。7
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