【正文】 yces kasugaensis* Streptomyces lividans Streptomyces parvulus符合附表三(3)者P1下列之低等真核生物為宿主，而以質(zhì)體或微小染色體為載體之宿主載體系統(tǒng) Acremonium chrysogenum Aspergillus oryzae Aspergillus sojae Neurospora crassa Pichia pastoris Sacchamycopsis lipolytica Schizosaccharomyces pombe Trichoderma viride Zygosaccharomyce rouxii符合附表三(3)者P1*︰慣用名稱 第五節(jié)　不需報備即可進行之實驗。　合乎此規(guī)定的實驗如下：　　[1]使用基因重組之DNA，其核酸序列本身並不存在於任何細胞或病毒的基因體中，且不具危險性者?！　2]將原核細胞中之染色體、質(zhì)體或其噬菌體DNA，再送回同一或類似品系細胞中之實驗?！　3]將真核細胞中之DNA、葉綠體、粒線體或質(zhì)體再送回同一或類似品系細胞中之實驗。　　[4]在可以互相交換基因之不同種細菌間，做選殖實驗（附表四）。 coli K12之宿主－載體系統(tǒng)　　[1]在E. coli K12宿主中，如果沒有任何可以引起細菌接合或轉(zhuǎn)導之DNA片段，此類基因重組實驗，可不必向研究機構(gòu)生物實驗安全委員會報備。　　[2]如果DNA是來自可以和E. coli K12交換基因的細菌，不論E. coli K12宿主中是否有DNA片段可以引起細菌接合或轉(zhuǎn)導，此類實驗可不必向研究機構(gòu)生物實驗安全委員會報備。 subtilis宿主－載體系統(tǒng)　　[1]宿主必需是不產(chǎn)生孢子之突變株，其反突變率必需低於107?！　2]除了必需向研究機構(gòu)生物實驗安全委員會及行政院國家科學委員會報備或申請核準之實驗外，均可自行進行實驗而不需報備。 subtilis以外之革蘭氏陽性細菌之載體　　　除了本章必需向研究機構(gòu)生物實驗安全委員會及行政院國家科學委員會報備或申請核準之實驗外，凡是使用由附表七所載細菌質(zhì)體所製成之載體（包含穿梭載體），均可自行進行實驗而不需報備。－載體系統(tǒng)　　　除了本章必需向研究機構(gòu)生物實驗安全委員會及行政院國家科學委員會報備或申請核準之實驗外，均可自行進行實驗而不需報備。第六節(jié) 需向研究機構(gòu)報備之實驗需向研究機構(gòu)報備之實驗：使用EKBSSC1及EK2之宿主載體系統(tǒng)之實驗中，使用植物及相當於附表五(3)(第74頁)之DNA供應體之實驗皆屬於需先向研究機構(gòu)報備之實驗。第七節(jié)　需經(jīng)由研究機構(gòu)生物實驗安全委員會核準後方可進行之實驗：　　[1]所有使用屬於第二級、第三級、及第四級危險群微生物（附表二）為宿主之實驗?！　　?1)所有第二級危險群微生物之實驗，必需在P2之物理防護下進行。　　　(2)所有第三級危險群微生物之實驗，必需在P3之物理防護下進行?！　　?3)所有第四級危險群微生物之實驗，必需在P4之物理防護下進行?！　2]將第二級、第三級及第四級危險群微生物DNA殖入非病原性原核細胞或低等真核細胞之實驗。　　　(1)屬於第二級及第三級危險群微生物之實驗，可以在P2之情況下進行?！　　?2)屬於第四級危險群微生物之實驗，只要能夠證明所殖入的基因已發(fā)生了不可逆的突變時，即可在P2的情況下進行。　　　(3)在經(jīng)主管機構(gòu)生物實驗安全委員會之審查後，一些特殊實驗可以在P1的情況下進行?！　3]在組織培養(yǎng)或細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，培養(yǎng)具有感染性之動植物病毒類實驗，或在輔助病毒的存在下，培養(yǎng)有缺陷之病毒類實驗，涉及數(shù)種同科之病毒、病毒突變株、或選殖DNA片段時，因可能產(chǎn)生重組或互補，故所有外源性之病毒均應視為一種病毒?！　　?1)牽涉到第一級危險群微生物中之病毒類實驗，可在P1之情況下進行?！　　?2)牽涉到第二級危險群微生物中之病毒類實驗，必需在P2之情況下進行?！　　?3)牽涉到第三級危險群微生物中之病毒類實驗，必需在P3之情況下進行?！　　?4)牽涉到第四級危險群微生物中之病毒類實驗，必需在P4之情況下進行。　　　(5)如果實驗之結(jié)果會使病毒之感染力增加，或使宿主之範圍擴大時，所使用之物理性防護必需至少增加一級?！　4]人體除外之動物及植物實驗　　相關(guān)人體之實驗請參照行政院衛(wèi)生署之辦法。　　　(1)任何要送入動植物體內(nèi)的真核細胞病毒基因，只要是少於整個病毒基因體之三分之二，就可以在P1的情況下進行?？墒窃趯嶒炃埃瑢嶒炄藛T必需證明所使用之DNA不具感染性及不具複製病毒之能力?！　　?2)任何不包含在上項(1)中所敘述之動植物實驗，必需由研究機構(gòu)生物實驗安全委員會決定其防護條件?！　5]體積超過20公升以上之醱酵實驗　　　　　實驗開始前，必需向主管機構(gòu)之生物實驗安全委員會申請核準，生物實驗安全委員會應以個案處理，並應遵照一般大規(guī)模醱酵所應注意的事項處理。研究機構(gòu)生物實驗安全委員會可以提高醱酵實驗之物理防護條件?！　6]在進行本（第七）節(jié)前述之所有（包括1.[1]、[2]、[3]、[4]、[5]）(第29至30頁)實驗前，計畫主持人應儘可能向研究機構(gòu)生物實驗安全委員會提出下列資料，例如：　　　(1)DNA來源、特性及核酸序列?！　　?2)宿主及載體之來源及特性資料?！　　?3)DNA產(chǎn)生之蛋白質(zhì)產(chǎn)物之特性?！　　?4)是否要達到基因表現(xiàn)之目的?！　　?5)將使用之物理及生物防護條件?！　　　　∵@些資料都必需簽名及註明日期。研究機構(gòu)生物實驗安全委員會應在實驗前審查所有資料，對所有降低物理及生物防護之要求，需經(jīng)行政院國家科學委員會核準。，必需通知研究機構(gòu)生物實驗安全委員會之實驗：　　　凡是不屬於本（第七）節(jié)，1.[1]、[2]、[3]、[4]、[5]所列出之實驗，均可在P1之情況下進行。計畫主持人在實驗開始之前，必需填妥「管制致病性寄生蟲、微生物或病毒基因重組實驗申請表」（附表八），通知研究機構(gòu)生物實驗安全委員會。第八節(jié)　需經(jīng)由行政院所屬主管機構(gòu)核準後方可進行之實驗，並知會行政院衛(wèi)生署、行政院環(huán)境保護署及行政院農(nóng)業(yè)委員會後，經(jīng)行政院國家科學委員會核準，方可進行的實驗：　　　釋放任何經(jīng)基因重組過的生物進入自然界，但是此規(guī)則不適用於所有基因轉(zhuǎn)殖植物之田間試驗（見第五節(jié)）。，並知會行政院農(nóng)業(yè)委員會、行政院衛(wèi)生署後，經(jīng)行政院國家科學委員會核準，方可進行的實驗：　　　所有牽涉到通用的動物病原性病毒（附表二）之實驗，需由行政院農(nóng)業(yè)委員會、行政院衛(wèi)生署及行政院國家科學委員會核準後方可進行。各項實驗之防護條件以個案處理?！　　≡]：如果所操作之適用的動物病原性病毒不會在人體發(fā)生病害，則不需經(jīng)由行政院衛(wèi)生署核準。，並在必要時知會行政院衛(wèi)生署及行政院農(nóng)業(yè)委員會，經(jīng)行政院國家科學委員會核準，方可進行的實驗：　　[1]選殖產(chǎn)生劇毒之基因：　　　　　所謂劇毒，是指對脊椎動物的LD50小於100ng/kg（包括任何方式測得）之毒素及毒蛋白?！　2]選殖LD50不明之毒素基因?！　3]將抗藥性基因殖入病原微生物，而有可能導致疾病防治困難的實驗（此項需知會行政院衛(wèi)生署或行政院農(nóng)業(yè)委員會）。　　[4]將基因重組後之DNA，或其產(chǎn)生之任何物質(zhì)送入人體中（此項需經(jīng)行政院衛(wèi)生署同意）。，並經(jīng)行政院農(nóng)業(yè)委員會，依據(jù)「基因轉(zhuǎn)殖植物田間試驗管理規(guī)範」核準後始可進行之實驗：　　基因轉(zhuǎn)殖植物之田間試驗，且合乎下列條件者：　　[1]宿主是田間常見之作物，而非雜草者?！　2]與植物宿主同屬之植物，不得有雜草?！　3]所送入宿主之基因，其特性非常清楚，而且對人及動植物無害?！　4]所用之載體來源必需是　　　(1)來自屬於本章第五節(jié)之2.、3.、4.、5.（第28頁）中所敘述之宿主載體系統(tǒng)?！　　?2)來自與植物宿主類似或相同之植物。　　　(3)來自非病原性原核細胞或低等真核細胞。　　　(4)來自植物病原微生物，可是致病之基因必需在事先去除，並證明在植物上不會致病?！　　?5)來自植物病原微生物並含有可以使植物致病之基因，可是實驗人員必需先在植物生長箱或溫室中種植，證明此載體不會在宿主中發(fā)生病害及不會在所有天然感染之宿主中引發(fā)新的或更嚴重之病害後，方可在田間進行試驗。，並經(jīng)行政院環(huán)境保護署，依據(jù)「遺傳工程環(huán)境用藥微生物製劑開發(fā)試驗管理辦法」核準後始可進行之實驗：以產(chǎn)製為目的之遺傳工程環(huán)境用藥微生物製劑開發(fā)試驗研究，於環(huán)境開發(fā)試驗(即田間試驗)前，應先經(jīng)行政院環(huán)境保護署核準。第九節(jié)　毒素基因之選殖，其基因之選殖沒有任何的限制。，選殖實驗前必需由主管機構(gòu)生物實驗安全委員會核準，並向行政院國家科學委員會報備。，其選殖可以在P1的情況下進行。 ng/kg與1μg/kg（1000 ng/kg）之間的毒素基因，其選殖必需在P3之防護下進行。LD50小於100 ng/kg以下時，需在P3或更高之防護下進行。如採用E. coli c1776為宿主時，可在P2防護下進行。：　　[1]霍亂毒素基因?！　2]大腸桿菌熱敏感毒素基因?！　3]能產(chǎn)生類似霍亂毒素及大腸桿菌熱敏感毒素之基因。：　　[1]綠膿桿菌A型外毒素：P1?！　2]金黃色葡萄球菌Ａ型外毒素：P3＋枯草桿菌HV2宿主?！　3]白喉毒素：P4?！　4]引起毒素休克癥候之金黃色葡萄球菌基因：P2?！　5]志賀毒素相類似之基因：P3（如果在宿主中所產(chǎn)生之志賀毒素量少於Shigella dysenteriae 60 R所產(chǎn)生之毒素，以及所用的載體是不屬於能夠主動經(jīng)由細菌進入其他宿主的類別時，如pBR322，可以在P2下進行實驗）。第十節(jié) 需經(jīng)由行政院所屬主管機構(gòu)監(jiān)督下方可進行之基本守則外實驗基本守則外的實驗：本守則未定出防護基準之實驗，需經(jīng)研究機構(gòu)相關(guān)之生物實驗安全委員會審查，並且得到研究機構(gòu)主管許可後，需在監(jiān)督機關(guān)之監(jiān)督下進行實驗，但最長以三年為限。1. 使用微生物及培養(yǎng)細胞為宿主的實驗中，屬於下列任何一項的實驗則認為基準外實驗。[1] 使用尚未鑑定種別但未證實為不具病原性之微生物之實驗?！　2] 不產(chǎn)生感染性之病毒體之DNA中，使用來自符合附表五(4)及附表六(4)之DNA供應體之實驗?！　3] 附表三(1)所列為宿主或載體之實驗。　　[4] 對脊椎動物具蛋白質(zhì)毒素之產(chǎn)生基因之選殖實驗。　　[5] 包含重組體在自然界散布之實驗。 第四章　重組體之處理第一節(jié)　重組體之增殖實驗　　宿主載體系統(tǒng)所得到重組體的增殖實驗，若被選殖之特定DNA，經(jīng)過該研究機構(gòu)的生物實驗安全委員會審查，其安全性已被確認為非常高，該研究機構(gòu)主管可以核準該實驗按第二章第二節(jié)所規(guī)定之P2級以上之物理性防護降一級來操作。第二節(jié)　重組體之保管1. 含有重組體的材料，需清楚標示「重組體」，並且安全地保管在符合操作重組體所需物理性防護等級標準的實驗室、實驗區(qū)域或大量培養(yǎng)區(qū)域內(nèi)。計畫主持人應把這些重組體詳細記錄，並且妥為保管。保管重組體試料及廢棄物之冷藏庫、冷凍庫也要標示「重組體保管中」之牌子。2. 計畫主持人要把重組體之試料及廢棄物做紀錄保管之，但在P2層級以下之物理性安全防護，可以用實驗紀錄來代替。3. 動物、植物及培養(yǎng)細胞（不以分化至成體為目的者）為宿主之實驗時，除了上述之注意事項外，請參考第五章及第六章。第三節(jié)　重組體之搬運1. P2層級以下之物理性防護之重組體、試料及廢棄物之實驗的東西搬出時，要用堅固不易漏的容器密封再搬出實驗室外。2. P3層級以上之物理性防護之重組體、試料及廢棄物要搬出實驗室時，即使破損時，內(nèi)容物也不會外漏之容器裝之，容器或包裝物的外面要在明顯的地方標示「注意小心搬運」之紅色標籤。3. 計畫主持人，對於搬運或郵寄時，要把重組體名稱、數(shù)量、寄達地（試驗所及計畫主持人）要紀錄保存之，但在P2層級以下作物理性防護時，以重組體之實驗紀錄就可替代。4. 有關(guān)大量培養(yǎng)實驗，LSC層級之物理性防護或所用之重組體、試料及廢棄物要搬出大量培養(yǎng)實驗區(qū)域外時，和P2層級以下的物理性防護操作方法相同。LS1及LS2層級所用的重組體、試料、廢棄物的時候，和P3層級之安全防護法相同。5. 動物、植物及培養(yǎng)細胞（不以分化至成體為目的者）用為宿主進行實驗時，以上所列之外，請參考第五章及第六章。6. 國內(nèi)郵寄含有需要P3以上之物理性防護的重組體材料時，必需遵照本國郵寄之規(guī)定。寄至國外時，需遵照該國郵寄規(guī)定，以及國際郵寄條約或規(guī)定。第四節(jié)　重組體之轉(zhuǎn)讓及實驗結(jié)束後之處理1. 重組體之轉(zhuǎn)讓：重組體可轉(zhuǎn)讓其他試驗研究機構(gòu)。惟受讓之試驗研究機構(gòu)針對利用該重組體之有關(guān)實驗，依照本守則第一章第六節(jié)所示之程序完成後，方可接受該重組體之轉(zhuǎn)讓。2. 重組體實驗結(jié)束後之處理：實驗結(jié)束後，須使重組體不活化之處理。但是當須利用該重組體進行所申請之實驗以外之實驗時，向所屬試驗研究機構(gòu)主管提出所請實驗之結(jié)案報告書，以及該重組體保存場所及負責人員後，則可保存該重組體。假若想保存從基準外實驗所製備之重組體，或利用該重組體再進行實驗時，除遵守上述規(guī)定之外尚需接受各主管部會之監(jiān)督。第五章　使用動物為宿主之實驗第一節(jié)　動物實驗安全評估之守則本守則適用於使用經(jīng)殖入重組DNA或剔除某基因，使基因體永久改變之完整基因轉(zhuǎn)殖動物的實驗，及使用含重組DNA之存活微生物的動物實驗。而後者，除了只有垂直性傳染的病毒外，所有實驗不得在P1的條件進行，基本的實驗條件應為P2級。至於基因轉(zhuǎn)殖動物的實驗條件評估，在特殊狀況下，如增加重組病原體感染力或使動物宿主