基因工程課后習(xí)題答案-資料下載頁(yè)
2025-10-18 09:59本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】序列以及強(qiáng)有力的終止子結(jié)構(gòu)，使得克隆在合適位點(diǎn)上的任何外源基因均能在受體細(xì)胞中高效表達(dá)。通常含有報(bào)告基因，但缺少相應(yīng)的調(diào)控序列（如啟動(dòng)子或。直接反應(yīng)了克隆進(jìn)入的調(diào)控元件的強(qiáng)弱。具有大的裝載量，功能上：DNA聚合酶I比klenow酶多了5’→3’核酸外切酶活性，兩者都具有5’→3’DNA聚合酶活性和。3’→5’核酸外切酶活性。在退火條件下，粘性末端的連接為分子內(nèi)反應(yīng)，平頭末端是分子間反應(yīng)，平頭末端的連接反應(yīng)更加復(fù)雜，受體細(xì)胞，形成一套重組克隆，從中篩選出含有目的基因的期望重組子。特定的基因組DNA片段，整個(gè)克隆群體就包含基因組的全部基因片段總和稱為基因組文庫(kù)。
【正文】 子和 AOX1 終止子分別位于線型 DNA 片段的兩端，并轉(zhuǎn)化 HIS的受體細(xì)胞。在 HIS+的轉(zhuǎn)化子中，重組 DNA片段與受體染色體 DNA 上的 AOX1 基因發(fā)生同源交換，單 拷貝的 HBsAg 編碼序列穩(wěn)定地整合在染色體上，用甲醇誘導(dǎo) HBsAg 的表達(dá)，形成類似病毒攜帶者的 22um 顆粒。 第五章 工程胚胎干細(xì)胞法和體細(xì)胞轉(zhuǎn)基因克隆法的主要區(qū)別？ ES 細(xì)胞能在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，是保持分化能力的胚性細(xì)胞。整合了外源基因的 ES 細(xì)胞能夠輸入到胚泡細(xì)胞，最終形成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物個(gè)體。 ES 細(xì)胞的基因?qū)ぐ校河猛庠?DNA 替換內(nèi)源的序列，對(duì)選定的基因進(jìn)行定點(diǎn)突變。 大多數(shù)基因?qū)ぐ性囼?yàn)是用以打斷內(nèi)源基因位點(diǎn)，以形成定向的無效等位基因（基因 敲除） 體細(xì)胞克隆：受體動(dòng)物選擇 TK或者 DHFR，與帶有轉(zhuǎn)基因的重 組載體建立遺傳互補(bǔ)，不能作為永生細(xì)胞存在，需不斷進(jìn)行體外培養(yǎng)。 尋靶載體的設(shè)計(jì) 特化的質(zhì)粒載體，導(dǎo)入 ES 細(xì)胞后可以促進(jìn)同源重組 大多數(shù)基因?qū)ぐ性囼?yàn)是用以打斷內(nèi)源基因位點(diǎn)，以形成定向的無效等位基因（基因 敲除） 插入載體在同源區(qū)內(nèi)線性化，使整個(gè)載體插入目的基因位點(diǎn) ,打斷了目的基因 ，但也會(huì)使選擇標(biāo)記附近的序列重復(fù) .. 替換載體使同源區(qū)域目的基因 共線性 . 轉(zhuǎn)染前在同源區(qū)外切割載體，成線性。交換 會(huì)使內(nèi)源 DNA 被導(dǎo)入的 DNA 替換 . 第六章 簡(jiǎn)述 Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的二元整合轉(zhuǎn)化戰(zhàn)略的基本過程 Ti 質(zhì)粒轉(zhuǎn)移區(qū) (TDNA）：參與在不同農(nóng)桿菌中的接合轉(zhuǎn)移 毒性區(qū)（ Vir）：直接參與 TDNA 的轉(zhuǎn)移和插入植物染色體 二元載體：構(gòu)建含 TDNA 區(qū)的根瘤農(nóng)桿菌 大腸桿菌穿梭質(zhì)粒，將外源基因， NPT II 和多克隆位點(diǎn)取代 TDNA上的 tms,tmr 和 tmt 基因組，重組分子轉(zhuǎn)化大腸桿菌，鑒定擴(kuò)增后再導(dǎo)入攜帶一個(gè) Ti 輔助質(zhì)粒的根瘤農(nóng)桿菌中，該輔助質(zhì)粒含有 vir 區(qū)但缺失了 TDNA 區(qū)；將上述的根瘤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子懸浮液涂布在植物根部愈傷組織中，輔助質(zhì)粒中的 vir 基因表達(dá)產(chǎn)物便會(huì)促使重組 TDNA 片段進(jìn)入受體細(xì)胞。 工程胚胎干細(xì)胞 ES 細(xì) 胞：能在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，保持分化能力的胚性細(xì)胞。 整合了外源基因的 ES 細(xì)胞能夠輸入到胚泡細(xì)胞，最終形成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物個(gè)體。 ES 細(xì)胞整合外源基因的載體 A、 非特異性整合及 PCR 鑒定 B、 特異性整合及 PCR 鑒定 ES 細(xì)胞的基因?qū)ぐ? 用外源 DNA 替換內(nèi)源的序列，對(duì)選定的基因進(jìn)行定點(diǎn)突變突變
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