【正文】 入量蒸餾水葡萄糖含量μ 待測酶液的制備固體試樣應(yīng)粉碎過Φ 試驗篩，液體試樣應(yīng)充分混合均勻。稱取 （精確至 ）固體試樣或準確吸取 液體試樣，加入裝有 （固體試樣）或 （液體試樣） 檸檬酸緩沖液且?guī)в胁Ａе榈?錐形瓶中，在振蕩器上 振蕩 ，吸取適量懸液以 離心力離心 ；離心后的上清液即為待測酶液。每個試樣需做兩個平行。詩叁撻訥燼憂毀厲鋨驁靈韜。纖維素酶活力測定將待測酶液放入5 ℃恒溫水浴中，預(yù)熱 。吸取 羧甲基纖維素鈉（）溶液放入 具塞刻度試管中，加入 溶液，在 ℃水浴中預(yù)熱 。加入 待測酶液，充分搖勻，在 ℃水浴中反應(yīng) 后立即取出，即為空白管。則鯤愜韋瘓賈暉園棟瀧華縉。吸取 羧甲基纖維素鈉（）溶液放入 具塞刻度試管中， ℃水浴中預(yù)熱 。加入 待測酶液，充分搖勻，在 ℃水浴中反應(yīng) 后立即取出，加入 溶液，混合均勻，即為試樣管。脹鏝彈奧秘孫戶孿釔賻鏘詠。將試樣管和空白管同時沸水浴 ，取出后快速冷卻，用蒸餾水定容至 ，充分搖勻。在分光光度計 波長下，以空白管溶液調(diào)節(jié)儀器零點，并測定試樣管溶液的吸光度。若其吸光值超出標準曲線范圍，應(yīng)根據(jù)酶活力大小將待測酶液稀釋至適當濃度后按上述步驟重新測定。鰓躋峽禱紉誦幫廢掃減萵輳。纖維素酶活力計算纖維素酶活力以質(zhì)量纖維素酶活力或體積纖維素酶活力計，數(shù)值以酶活力單位每克（)或酶活力單位每毫升（）表示，按式或計算：稟虛嬪賑維嚌妝擴踴糶欏灣。(纖維素酶活力以質(zhì)量纖維素酶活力或體積纖維素酶活力計，數(shù)值以酶活力單位每克（)或酶活力單位每毫升（）表示，按式或計算：稟虛嬪賑維嚌妝擴踴糶欏灣。.Error! No sequence specified.)陽簍埡鮭罷規(guī)嗚舊巋錟麗鮑。 ((纖維素酶活力以質(zhì)量纖維素酶活力或體積纖維素酶活力計，數(shù)值以酶活力單位每克（)或酶活力單位每毫升（）表示，按式或計算：稟虛嬪賑維嚌妝擴踴糶欏灣。.Error! No sequence specified.)陽簍埡鮭罷規(guī)嗚舊巋錟麗鮑。.Error! No sequence specified.)溈氣嘮戇萇鑿鑿櫧諤應(yīng)釵藹。式中：——試樣吸光度；——標準曲線斜率；——標準曲線截距；——酶液定容體積，本操作為，單位為毫升（）；——反應(yīng)液中待測酶液加入量，單位為毫升（）；——試樣質(zhì)量，單位為克（）；——試樣體積，單位為毫升（）；——待測酶液的稀釋倍數(shù)；——反應(yīng)時間 （以 計酶活）。計算結(jié)果保留至一位小數(shù)，數(shù)字修約與數(shù)據(jù)處理應(yīng)符合 的規(guī)定。允許差取兩次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值作為試樣測定結(jié)果，平行測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的。蛋白酶活力的測定——福林法術(shù)語和定義.蛋白酶活力單位 在℃和 條件下，1g()樣品 水解酪素產(chǎn)生 μ酪氨酸所需的酶量，定義為個酶活力單位，以 ()表示。鋇嵐縣緱虜榮產(chǎn)濤團藺締崳。原理蛋白酶在一定的溫度與下，水解酪蛋白底物，產(chǎn)生含有酚基的氨基酸（如：酪氨酸、色氨酸等），在堿性條件下，將福林試劑（）還原，生成鉬藍與鎢藍，用分光光度計于波長 下測定溶液的吸光度。酶活力與吸光度成比例，由此可以計算蛋白酶活力。懨俠劑鈍觸樂鷴燼觶騮揚銥。試劑和溶液除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水應(yīng)符合 三級水要求。福林試劑。于 磨口回流裝置中加入 鎢酸鈉（）、 鉬酸鈉（）、 水、 磷酸（）、 濃鹽酸，小火沸騰回流 ，取下回流冷卻器，在通風廚中加入 硫酸鋰（）、 水和數(shù)滴濃溴水（），再微沸 ，以除去多余的溴水（冷卻后仍有綠色需再加溴水，再煮沸除去過量的溴），冷卻，加水定容至 。混勻，過濾。試劑應(yīng)呈金黃色，貯存于棕色瓶內(nèi)。或使用商品福林試劑。謾飽兗爭詣繚鮐癩別瀘鯽礎(chǔ)。福林使用液。份福林試劑與份水混合，搖勻。碳酸鈉溶液：с（） 。稱取 無水碳酸鈉（），用水溶解并定容至 。三氯乙酸（）溶液：с（） 。稱取 三氯乙酸，用水溶解并定容至 。氫氧化鈉溶液：с（） 。稱取 氫氧化鈉，溶于 無二氧化碳的水中，搖勻，注入密閉容器中，放置至溶液清亮。取 清液，用無二氧化碳水稀釋至 ，搖勻。咼鉉們歟謙鴣餃競蕩賺趲為。鹽酸溶液：с（） 及 。各量取 、 濃鹽酸，分別注入去離子水，定容至 ，搖勻。磷酸緩沖液（）。稱取 磷酸氫二鈉（）和 磷酸二氫鈉（），加水溶解并定容至 。瑩諧齷蘄賞組靄縐嚴減籩諏。酪素溶液：ρ 。稱取 （精確至 ）酪素，用少量 氫氧化鈉溶液濕潤后，加入約 磷酸緩沖液，在沸水浴中邊加熱邊攪拌，直至完全溶解，冷卻后用磷酸緩沖液定容至 。在℃保存，有效期為 。麩肅鵬鏇轎騍鐐縛縟糶爾攤。酪氨酸標準溶液：ρ μ。稱 （精確至 2g）取預(yù)先于 ℃干燥至恒重的酪氨酸，用 鹽酸溶液（ ）溶解后定容至 ，為酪氨酸標準溶液。吸取 酪氨酸標準溶液（），用 鹽酸定容至 即得到 μ 酪氨酸標準溶液。納疇鰻吶鄖禎銣膩鰲錟顫階。儀器設(shè)備實驗室常用儀器設(shè)備。分光光度計。電子天平：感量為 。恒溫水浴鍋： ℃177。 ℃。離心機。粉碎機或研缽。試驗篩：Φ 。分析步驟建立標準曲線方程按表配制酪氨酸溶液。配置不同濃度的酪氨酸溶液管號酪氨酸標準溶液的濃度，μ μ 酪氨酸標準溶液的體積，水的體積，設(shè)兩次重復(fù)，分取 上述溶液，各加 碳酸鈉溶液（ ）、 福林試劑使用溶液，置于℃恒溫水浴中顯色 后取出。風攆鮪貓鐵頻鈣薊糾廟誑繃。在分光光度計 波長下，以不含酪氨酸的管為空白，調(diào)節(jié)儀器零點，分別測定管至管的吸光度。以兩次重復(fù)的吸光度平均值為橫坐標，酪氨酸濃度為縱坐標，建立標準曲線。滅噯駭諗鋅獵輛覯餿藹猙廚。待測酶液的制備固體試樣應(yīng)粉碎過 Φ 試驗篩，液體試樣應(yīng)充分混合均勻。稱取 （精確至 ）試樣或準確吸取 液體試樣，加入裝有 （固體試樣）或 （液體試樣） 磷酸緩沖液且?guī)РＡе榈?錐形瓶中，在振蕩器上 振蕩 ，吸取適量混合液以 離心力離心 ；離心后的上清液即為待測酶液。每個試樣需做兩個平行。鐒鸝餉飾鐔閌貲諢癱騮吶轉(zhuǎn)。蛋白酶活力測定將酪素溶液放入 ℃水浴中，預(yù)熱 。吸取 待測酶液放入試管中，加入 三氯乙酸，搖勻，于 ℃水浴中反應(yīng) ，再加 酪素溶液，搖勻后于 離心 。取 上清液加入另一試管中，再依次加入 碳酸鈉溶液、 福林試劑使用液，置于℃水浴中顯色 后取出，即為空白管。攙閿頻嶸陣澇諗譴隴瀘鐙澮。吸取 待測酶液放入試管中，置于℃水浴中 。加入 預(yù)熱后的酪素溶液，搖勻，于 ℃水浴中反應(yīng) ，取出后立即加入 三氯乙酸，搖勻，于 離心 。取 上清液加入另一試管中，再依次加入 碳酸鈉溶液、 福林試劑使用液，置于℃水浴中顯色 后取出，即為試樣管。趕輾雛紈顆鋝討躍滿賺蜆騍。在分光光度計 波長下，以空白管溶液調(diào)節(jié)儀器零點，測定試樣管溶液的吸光度。若其吸光值超出標準曲線范圍，應(yīng)根據(jù)酶活力大小將待測酶液稀釋至適當濃度后按上述步驟重新測定。夾覡閭輇駁檔驀遷錟減汆藥。蛋白酶活力計算蛋白酶酶活力以質(zhì)量蛋白酶活力或體積蛋白酶活力計，數(shù)值以酶活力單位每克（)或酶活力單位每毫升（ ）表示，按式或計算：視絀鏝鴯鱭鐘腦鈞欖糲僉爾。(蛋白酶酶活力以質(zhì)量蛋白酶活力或體積蛋白酶活力計，數(shù)值以酶活力單位每克（)或酶活力單位每毫升（ ）表示，按式或計算：視絀鏝鴯鱭鐘腦鈞欖糲僉爾。)((蛋白酶酶活力以質(zhì)量蛋白酶活力或體積蛋白酶活力計，數(shù)值以酶活力單位每克（)或酶活力單位每毫升（ ）表示，按式或計算：視絀鏝鴯鱭鐘腦鈞欖糲僉爾。))式中：——試樣吸光度；——標準曲線斜率；——標準曲線截距；——反應(yīng)液的總體積，單位為毫升（）；——酶液定容體積，本操作為，單位為毫升（）；——試樣質(zhì)量，單位為克（）；——試樣體積，單位為毫升（）；——待測酶液的稀釋倍數(shù)；——反應(yīng)時間 （以 計酶活）。計算結(jié)果表示到小數(shù)點后一位，數(shù)字修約與數(shù)據(jù)處理應(yīng)符合 的規(guī)定。允許差取兩次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值作為試樣測定結(jié)果，平行測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的。19 / 19