wb免疫印跡實驗常見問題全匯總-資料下載頁
2025-03-24 05:08本頁面
【正文】 整濃度抗體孵育不充分增加抗體濃度，延長孵育時間酶失活直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體查詢相關(guān)文獻確定標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低設(shè)置陽性對照比對結(jié)果，增加標本上樣量雜帶多目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現(xiàn)多條帶查閱文獻或進行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作雜蛋白多處理目的蛋白抗體特異性不強使用特異性強的抗體抗體孵育時間過久減少抗體孵育時間二抗與抗原有交叉反應(yīng)選擇合適的封閉物二聚體或多聚體存在增加蛋白質(zhì)變性過程及強度底物顯色與曝光時間過長縮短顯色及曝光的時間大分子量WB膜孔徑太小更換孔徑較大的膜轉(zhuǎn)膜電壓電流低提高電壓/電流轉(zhuǎn)膜時間短延長轉(zhuǎn)膜時間膠濃度太大使用低濃度的膠轉(zhuǎn)膜緩沖液配方不合適調(diào)整轉(zhuǎn)膜緩沖液中甲醇及SDS濃度背景有黑色斑點抗體與封閉試劑反應(yīng)使用前過濾封閉試劑HRP 偶聯(lián)二抗中有聚集體過濾二抗試劑，去除聚集體暗背景上白色帶HRP 含量過高降低酶聯(lián)二抗的濃度背景有不均勻的白色斑點抗體分布不均勻孵育抗體時使用搖床順便給大家來幾張在實驗中的WB圖~
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