【正文】 當(dāng)試樣中兩組分的吸收光譜重疊較為嚴(yán)重時，用解聯(lián)立方程的方法測定兩組分的含量可能誤差較大，這時可以用 雙波長分光光度法 測定。 雙波長分光光度法定量測定兩混合物組分的主要方法有 等吸收波長法 和 系數(shù)倍率法 兩種。 ★ 等 吸收波長 法 試樣中含有 a、 b兩組分，若要測定 b組分， a組分有干擾，采用雙波長法對 b組分測量時方法如下： 選擇待測組分 b的最大吸收波長 λ 2為測量波長 從 λ 2與組分 a吸收曲線的交點作一條平行于波長軸的直線，交于組分 a吸收曲線的另一點 ， 該點所對應(yīng)的波長為參比波長 λ 1。 組分 a在 λ 2和 λ 1處是等吸收點， aa AA12 ?? ? 由吸光度的加和性可知 ， 混合試樣在 λ2和 λ1處的吸光度可表示為 babaAAAAAA111222??????????λ λ 2 λ1 b A a a+b 2?A1?A測量波長 參比波長 雙波長分光光度計的輸出信號為 ΔA， 則 因 所以 可見儀器的輸出訊號Δ A與干擾組分 a無關(guān)，它只正比于待測組分b的濃度，即消除了 a的干擾。 abab AAAAAAA112212 ?????? ???????aa AA12 ?? ?bbbbb lC AAAΔ1212?????? ???? λλλλ εεΔ A λ λ 2 λ1 b A a a+b 2?A1?A測量波長 參比波長 ★ 系數(shù)倍率法 當(dāng)干擾組分 A的吸收光譜曲線不呈峰狀，僅是陡坡狀時，不存在兩個波長處的等吸收點時，如下圖所示。 原理自己看書！ 在這種情況下，可采用系數(shù)倍率法測定 B組分，并采用雙波長分光光度計來完成。 示差分光光度法 用普通分光光度法測定濃度 很稀 或 很濃 溶液的吸光度時，測量誤差都很大 ! 若用一已知合適濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為參比溶液，調(diào)節(jié)儀器的 100％透射比點（即 0吸光度點），測量試樣溶液對該已知標(biāo)準(zhǔn)溶液的透射比，則可以改善測量吸光度的精確度。 這種方法稱為 示差分光光度法。 當(dāng)測定低透射比（高吸光度）的高濃度試液時，用比試液濃度 C1稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液 C2作參比溶液，這種示差法叫 高吸收法 ； 其原理如下： 待測試液濃度 C1 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度 C2 根據(jù) Beer定律 A1=εL c1 A2= εL c2 測定時 : 先用比試樣濃度稍小的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入所需試劑后作為參比，調(diào)節(jié)透射比為 100%，即吸光度為 0。 然后測量試樣的吸光度 ,這時的吸光度實際是兩者差 △ A. A=△ A=A1A2= εL( c1c2)= εL △ c △ A與兩者的濃度差 △ c成正比，且處在正常的讀數(shù)范圍，以 △ A與 △ c作校準(zhǔn)曲線，根據(jù)測得△ A ，查相應(yīng)的 △ c ，則 c1=c2+ △ c 當(dāng)測定高透射比（低吸光度）的低濃度試液時，用比試液濃度稍高的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液，這種示差法叫 低吸收法； 若同時用濃度不同的兩種標(biāo)準(zhǔn)溶液（試液的濃度需介于兩標(biāo)準(zhǔn)溶液之間）分別調(diào)儀器的 100%透射比點及零透射比點，這種示差方法叫 最精密法 。 導(dǎo)數(shù)分光光度計法 解決干擾物質(zhì)與被測物質(zhì)的吸收光譜重疊，消除膠體和懸浮物散射影響和背景吸收，提高分辨率的一種技術(shù)。 將 對波長 λ 求導(dǎo) : 在整個波長范圍 ,I0 內(nèi)可控制在恒定值， 則 導(dǎo)數(shù)分光光度法的一階導(dǎo)數(shù)信號與濃度成正比例，不需要通過對數(shù)轉(zhuǎn)換為吸光度 對于二階導(dǎo)數(shù)光譜： 三階導(dǎo)數(shù)光譜： … 由數(shù)學(xué)推導(dǎo)可知， 經(jīng) n次求導(dǎo)后，導(dǎo)數(shù)信號與仍然濃度成正比，藉此可以用于定量分析。 由圖可見隨著導(dǎo)數(shù)的階次增加，譜帶變得更加尖銳，分辨率提高 導(dǎo)數(shù)分光光度法最大的優(yōu)點 是可以提高檢測的靈敏度。 右圖是用導(dǎo)數(shù)分光光度法測定乙醇中微量苯的情況。 乙醇中微量苯的定量測定 乙醇的吸收光譜 含 1ppm苯的乙醇的吸收光譜 含 10ppm苯的乙醇的吸收光譜 是 2的二階導(dǎo)數(shù)光譜 是 2的四階導(dǎo)數(shù)光譜 由圖可見，利用一般的吸收光譜法，只能檢測約10ppm的苯（曲線 3），而用四階導(dǎo)數(shù)光譜，可檢測低于 1ppm的苯。 在用導(dǎo)數(shù)光譜進行定量分析時，需要對導(dǎo)數(shù)光譜進行測量以獲得導(dǎo)數(shù)值 ,常用的方法有基線法、峰谷法和峰零法，如下圖所示 基線法 又稱 切線法 ，在相鄰兩峰的極大或極小處畫一公切線，在由峰谷引一條平行于縱坐標(biāo)的直線相交于a點，然后測量距離 t的大小。 峰谷法 測量相鄰兩峰的極大和極小之間的距離 p， 這是較常用的方法。 峰零法 測量峰至基線的垂直距離 z。 該法只適用于導(dǎo)數(shù)光譜曲線對稱于橫坐標(biāo)的高階導(dǎo)數(shù)光譜。 四、配合物組分及其穩(wěn)定性常數(shù)的測定 1. 摩爾比法 (也稱為飽和法 ) 它是根據(jù)金屬離子 M與配位體 R顯色過程中被飽和的原則來測定配合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的方法。 設(shè)配合反應(yīng)為 M + nR = MRn 若 M與 R均不干擾 MRn的吸收，且其分析濃度分別為 CM， CR。 固定金屬離子 M的濃度，改變配位體 R的濃度，可得到一系列 CR/ CM值不同的溶液。 在適宜波長下測定各溶液的吸光度，然后以吸光度 A對 CR/CM作圖 轉(zhuǎn)折點所對應(yīng)的摩爾比數(shù)便是配合物的組成比。 若配合物較穩(wěn)定，則轉(zhuǎn)折點明顯；反之則不明顯，這時可用外推法求得兩直線的交點。 由于配合物的離解，使吸光度 A＇ 減小至 A， A＇ 減小的程度取決于配合物的穩(wěn)定性。穩(wěn)定常數(shù)表示為 : 設(shè)配合物不離解時在轉(zhuǎn)折點處的濃度為 c， 配合物的離解度為 ?，達到平衡時： 則 式中 在轉(zhuǎn)折點處可求得 n， 吸光度 A由實驗測得， A＇ 由外推法求得，則 2. 等摩爾連續(xù)變化法（又稱 Job法） 配置一系列溶液，保持 CM＋ CR=C(C值恒定 )。改變 CM與 CR的相對比值，在 MRn的吸收波長下測定各溶液的吸光度 A。 當(dāng) A值達到最大時，即 MRn濃度最大，該溶液中 CM/CR比值即為配合物的組成比。 如以吸光度 A為縱坐標(biāo)， CM/C比值為橫坐標(biāo)作圖，即繪出連續(xù)變化法曲線 (左圖 )。由兩曲線外推的交點所對應(yīng)的 CM/C值即可計算配合物的組成 M與 R之比 (n值 )。 推導(dǎo)過程自己看書！ 167。 紫外 可見分光光度法的應(yīng)用 五、酸堿離解常數(shù)的測定 光度法是測定分析化學(xué)中應(yīng)用的指示劑或顯色劑離解常數(shù)的常用方法，因為它們大多數(shù)是有機弱酸或弱堿。 推導(dǎo)過程自己看書！ ? 本章需掌握的要點 ?掌握各種電子躍遷所產(chǎn)生的吸收帶及其特征、應(yīng)用 ?熟練掌握吸收定律的應(yīng)用及測量條件的選擇 ?較為熟悉儀器的類型、各組件的工作原理 ?運用各種類型光譜及 λ max的經(jīng)驗規(guī)則，判斷不同的化合物 ?掌握定量分析及測定物理化學(xué)常數(shù)的常見基本方法 本 章 作 業(yè) P50頁 P51頁