【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 二、紫外 可見分光光度計(jì)的類型 單光束分光光度計(jì) 其光路示意圖如前面的圖 所示 ，國(guó)產(chǎn) 722型、751 型、 724型、英國(guó) SP500型以及 Backman DU－8型等均屬于此類光度計(jì)。 雙光束分光光度計(jì) 其光路示意于下圖。由于兩束光同時(shí)分別通過參比池和樣品池，因而能自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。這類儀器有國(guó)產(chǎn) 710型、 730型、 740型等。 167。 紫外 可見分光光度計(jì) 單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)原理圖 3. 雙波長(zhǎng)分光光度計(jì) 其基本光路如下圖所示。 雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)光路示意圖 ΔA (ΔA= Aλ1 Aλ2 ) 對(duì)于多組分混合物、混濁試樣 (如生物組織液 )分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長(zhǎng)分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性 。 三、分光光度計(jì)的校正 自己看書！ 167。 分析條件的選擇 一、儀器測(cè)量條件 儀器測(cè)量條件的選擇包括 測(cè)量波長(zhǎng)，吸光度范圍 , 狹縫寬度。 最強(qiáng)吸收帶的最大吸收波長(zhǎng) 作為測(cè)量波長(zhǎng)，稱為最大吸收原則，以獲得最高的分析靈敏度。 2. 適宜吸光度范圍的選擇 由于吸收定律中透射比 T與濃度 C是負(fù)對(duì)數(shù)的關(guān)系，當(dāng)濃度較大或濃度較小時(shí)，相對(duì)誤差都比較大。因此，要選擇適宜的吸光度范圍進(jìn)行測(cè)量，以降低測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差。 根據(jù)吸收定律 ld cTd TdT ???? 4 3 4 lcTA ???? lgclTT ???? ?4 3 4 TTTcclg ?? ?微分后得 或 將上式代入 lambertBeer定律 ,則測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差為 要使測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差 ( Δc/c)最小，對(duì) T求導(dǎo)應(yīng)有一極小值，即 ? ? ? ?? ? 02lg ?? ??? TT TTTT TdTd解得 4 3 4 ??T或 A= T=% 表明當(dāng)吸光度 A=，儀器的測(cè)量誤差最小 。這個(gè)結(jié)果也可以從左圖中看出。 在吸光分析中，一般選擇： A 測(cè)量范圍 ～ T％ 65～ 15％ 此時(shí)如果儀器的透射率讀數(shù)誤差 (ΔT )為 1％時(shí)，由此引起的測(cè)定結(jié)果相對(duì)誤差 (Δc/c)約為 3％。 濃度測(cè)量的相對(duì)誤差 ( Δc/c)與溶液透射比 (T)的關(guān)系 在實(shí)際工作中，可通過 調(diào)節(jié)待測(cè)溶液的濃度 或選用 適當(dāng)厚度 的吸收池的方法，使測(cè)得的吸光度落在所要求的范圍內(nèi)。 3. 儀器狹縫寬度的選擇 狹縫的寬度會(huì)直接影響到測(cè)定的靈敏度和校準(zhǔn)曲線的線性范圍。 ● 狹縫寬度過大時(shí)，入射光的單色性降低，校準(zhǔn)曲線偏離比耳定律，靈敏度降低； ● 狹縫寬度過窄時(shí)，光強(qiáng)變?nèi)?，?shì)必要提高儀器的增益，隨之而來的是儀器噪聲增大，于測(cè)量不利。 最佳狹縫寬度：減小狹縫寬度時(shí)，試樣的吸光度不再增加。 二、顯色反應(yīng)條件的選擇 顯色反應(yīng)條件的選擇包括 顯色劑及其用量 、 反應(yīng)酸度 、 溫度 、 時(shí)間 等的選擇。 顯色劑及其用量 ● 顯色劑的選擇原則 ： ● 顯色劑用量： 配位數(shù)與顯色劑用量有關(guān)；在形成逐級(jí)配合物 ， 其用量更要嚴(yán)格控制 。 顯色劑與待測(cè)離子顯色反應(yīng)的產(chǎn)物組成恒定、穩(wěn)定性好、顯色條件易于控制； 產(chǎn)物對(duì)紫外、可見光有較強(qiáng)的吸收能力，即 ε 大； 顯色劑與產(chǎn)物的顏色對(duì)照性好，即吸收波長(zhǎng)有明顯的差別，一般要求 Δ λ ＞ 60nm。 2. 反應(yīng)的酸度 介質(zhì)的酸度往往是顯色反應(yīng)的一個(gè)重要條件。 ● 多數(shù)顯色劑是有機(jī)弱酸（或弱堿），介質(zhì)的酸度直接影響著顯色劑的離解程度，從而影響顯色反應(yīng)的完全程度。 p H 范圍 配合物組成 顏色＜4Fe(C 7 H 4 O 3 )+（1 ：1 ） 紫紅色4 ～7Fe(C 7 H 4 O 3 ) 2－（1 ：2 ） 棕橙色8 ～1 0Fe(C 7 H 4 O 3 ) 33－（1 ：3 ） 黃色 Fe(Ⅲ) 與水楊酸的配合物，隨介質(zhì) pH值的不同而變化如下表所示。對(duì)于這一類的顯色反應(yīng)，控制反應(yīng)酸度至關(guān)重要。 例如 : 在實(shí)際分析工作中，是通過實(shí)驗(yàn)來選擇顯色反應(yīng)的適宜酸度的。 具體做法是 : 固定溶液中待測(cè)組分和顯色劑的濃度，改變?nèi)芤?通常用緩沖溶液控制 )的酸度 (pH)， 分別測(cè)定在不同酸度下溶液的吸光度 A， 繪制 A～ pH曲線，從中找出最適宜的 pH范圍。 3. 顯色的時(shí)間 4. 反應(yīng)的溫度 三、參比溶液的選擇 1. 溶劑參比 當(dāng)試樣溶液的組成較為簡(jiǎn)單，共存的其他組分很少且對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)的光幾乎沒有吸收，以及顯色劑沒有吸收時(shí)，可采用溶劑作為參比溶液，這樣可消除溶劑、吸收池等因素的影響。 2. 試劑參比 如果顯色劑或其他試劑在測(cè)定波長(zhǎng)有吸收，按顯色反應(yīng)相同的條件，只是不加入試樣溶液，同樣加入試劑和溶劑作為參比溶液。這種參比溶液可消除試劑中的組分產(chǎn)生吸收的影響。 3. 試樣參比 如果試樣基體（除被測(cè)組分外的其它共存組分）在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，而與顯色劑不起顯色反應(yīng)時(shí)可按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，只是不加顯色劑，作為參比溶液。 4. 平行操作溶液參比 用不含被測(cè)組分的試樣，在相同條件下與被測(cè)試樣同樣進(jìn)行處理，由此得到平行操作參比溶液。 四、干擾及消除方法 干擾物質(zhì)的影響有以下幾種情況： ? 干擾物質(zhì)本身有顏色或與顯色劑形成有色化合物，在測(cè)定條件下也有吸收； ? 在顯色條件下，干擾物質(zhì)水解，析出沉淀使溶液混濁，致使吸光度的測(cè)定無法進(jìn)行； ? 與待測(cè)離子或顯色劑形成更穩(wěn)定的配合物，使顯色反應(yīng)不能進(jìn)行完全。 可以采用以下幾種方法來消除這些干擾作用： 根據(jù)配合物的穩(wěn)定性不同，可以利用控制酸度的方法提高反應(yīng)的選擇性，以保證主反應(yīng)進(jìn)行完全。 例如 鋼鐵中微量鈷的測(cè)定，常用鈷試劑為顯色劑。 鈷試劑與 Co2+ 、 Ni2+、 Zn2+、 Mn2+、 Fe2+等都有反應(yīng)。 但它與 Co2+在弱酸性介質(zhì)中一旦完成反應(yīng)后，即使再用強(qiáng)酸酸化溶液，該配合物也不會(huì)分解。 而 Ni2+、 Zn2+、 Mn2+、 Fe2+等與鈷試劑形成的配合物在強(qiáng)酸介質(zhì)中很快分解，從而消除了上述離子的干擾，提高了反應(yīng)的選擇性。 4. 選擇適當(dāng)?shù)臏y(cè)量波長(zhǎng) 分離 若上述方法不易采用時(shí)，也可以采用預(yù)先分離的方法，如沉淀、萃取、離子交換、蒸發(fā)和蒸餾以及色譜分離法 (包括柱色譜、紙色譜、薄層色譜等 )。 此外，還可以利用化學(xué)計(jì)量學(xué)方法實(shí)現(xiàn)多組分同時(shí)測(cè)定，以及利用導(dǎo)數(shù)光譜法、雙波長(zhǎng)法等新技術(shù)來消除干擾。 167。 紫外 可見分光光度法的應(yīng)用 一、定性分析 1. 比較吸收