醫(yī)學(xué)第七組ppt課件-資料下載頁
2025-03-22 06:22本頁面
【正文】 別為重組大腸桿菌 GFP的本底水平表達(dá)、葡萄糖降解物阻遏效應(yīng)后的表達(dá)及誘導(dǎo)表達(dá)，因而只有 3號(hào)泳道有 GFP的出現(xiàn)，當(dāng)然， 3號(hào)泳道還有其他雜蛋白的表達(dá)，上圖中可以看出幾條隱約出現(xiàn)的細(xì)細(xì)的條帶。 170 130 95 72 55 43 34 26 17 10 M 1 2 1號(hào)泳道是離心上清， 2號(hào)泳道是300mM咪唑洗脫蛋白。 50mM咪唑洗脫蛋白和穿流峰洗脫蛋白被不幸剪掉。 可以明顯看到目標(biāo)蛋白，在 26KD和34KD之間。 ? 從上圖可以看出，剪膜時(shí)出現(xiàn)差錯(cuò)，將 4號(hào)泳道剪掉，原因是 marker并非點(diǎn)在最左端，為方便標(biāo)記分子量圖中未畫出 PVDF膜左側(cè)的膜，因而剪膜時(shí)對(duì)點(diǎn)樣在 marker左側(cè)還是右側(cè)判斷失誤，當(dāng)時(shí)以為點(diǎn)樣在左側(cè)，結(jié)果將右側(cè) PVDF膜剪掉，因而錯(cuò)失了 4泳道的條帶。 ? 從上圖中只可以看出 marker、 1號(hào)泳道全部條帶及 2號(hào)泳道部分條帶，marker泳道中 10KD和 17KD兩條帶幾乎重合，但還是可以看出上面的藍(lán)色及下方的綠色條帶； ? 1號(hào)泳道鑒定的是離心上清中的可溶蛋白，可以看出只含 GFP一條帶，約在 2634KD之間，與其實(shí)際分子量 27KD相符，由于離心上清中有許多其他蛋白，而蛋白印跡只有一條帶，證明一抗特異性十分好，二抗結(jié)合能力也較好； ? 2號(hào)泳道為用 300mM咪唑洗脫后的蛋白印跡，可以看出 GFP條帶最明顯。圖中無法明顯分辨是否有其他條帶，由 1號(hào)泳道可知一抗和二抗特異性很好，因而理論上是無其它條帶的； ? 4號(hào)泳道由于被剪去而無法分析，但理論上 3號(hào)泳道由于含有 GFP會(huì)出現(xiàn)一條條帶； 4號(hào)泳道因?yàn)榇┝鞣逯缓s蛋白，即使轉(zhuǎn)膜成功，一抗不會(huì)特異結(jié)合， HRP所連的二抗也不會(huì)結(jié)合一抗，因而 DAB也就不會(huì)顯示出棕色條帶。
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1