植物原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交-資料下載頁(yè)
2025-01-19 00:36本頁(yè)面
【正文】 靜置使之沉降，增加觸融機(jī)會(huì)。 3）用 28%58%的 PEG溶液處理 1530分鐘，促使原生質(zhì)體相互粘連； 4）然后用清洗培養(yǎng)基逐步清洗原生質(zhì)體上的 PEG，或用高PH高濃度鈣離子溶液清洗。 注意清洗應(yīng)逐步平緩進(jìn)行，劇烈洗滌會(huì)減少異核體的形成。 5）融合體的培養(yǎng)。 ?誘導(dǎo)機(jī)制 四、原生質(zhì)體融合產(chǎn)物的 細(xì)胞學(xué) ?間期核融合的結(jié)果并不產(chǎn)生有活力的雜種細(xì)胞，只有有絲分裂期間的核融合形成的雜種細(xì)胞才能繼續(xù)進(jìn)一步的發(fā)育。 ?原生質(zhì)體融合將產(chǎn)生以下雜種細(xì)胞： 親合的細(xì)胞雜種： 具有雙親的全套染色體，并能進(jìn)行正常分裂，形成異源雙倍體。 部分親合的細(xì)胞雜種： 一個(gè)親本的染色體組或全部消失，或其染色體只有部分的保留或重組于另一親本的染色體組。 形成非整倍體的混合群體： 如粉藍(lán)煙草（ 2N=24）和南氏煙草（ 2N=18）獲得的體細(xì)胞雜種，其染色體數(shù)處于 5664之間。 胞質(zhì)雜種 ： 包含一個(gè)親本的染色體組，但包含雙親的細(xì)胞質(zhì)。 普通小麥和簇毛麥體細(xì)胞雜交獲得的雜種細(xì)胞染色體 (紅色熒光者為普通小麥染色體，黃色者為簇毛麥染色體 ) 五、雜種細(xì)胞選擇 ?選擇的必要性 ?雜種細(xì)胞選擇方法 對(duì)于在 形態(tài)上 易區(qū)分的原生質(zhì)體及雜種細(xì)胞，可在低密度下培養(yǎng)，然后用機(jī)械方法將雜種細(xì)胞分離出來(lái)。 熒光染料標(biāo)記 選擇 互補(bǔ) 選擇法 利用兩親本原生質(zhì)體對(duì)培養(yǎng)基成分、抗代謝物或溫度等的敏感性存在著的天然的互補(bǔ)性差異，以及隱性突變?cè)斐傻倪z傳互補(bǔ)來(lái)篩選雜種細(xì)胞。 互補(bǔ)選擇法 ?利用不同親本原生質(zhì)體在遺傳上、抗性上和生理上的互補(bǔ)進(jìn)行選擇： ?白化（ aaBB） +白化（ AAbb） ?綠色（ AaBb） ?營(yíng)養(yǎng)缺陷（ aaBB ） +營(yíng)養(yǎng)缺陷（ AAbb ） ?自養(yǎng)（ AaBb ） ?抗性（ aaBB ） +抗性（ AAbb ） ?雙抗（ AaBb ） ?對(duì)培養(yǎng)基成分和抗代謝物 互補(bǔ) ?對(duì)光照敏感性互補(bǔ) 葉綠體缺失突變體 光敏突變體 融合，高光強(qiáng) 下培養(yǎng) 只有雜種細(xì)胞形成綠色的對(duì)光不敏感的細(xì)胞團(tuán) 矮牽牛兩個(gè)種的原生質(zhì)體對(duì)培養(yǎng)基成分及 放線菌素 D（抗代謝物）的敏感性存在差異 原生質(zhì)體類型 在 MS培養(yǎng)基上能否形成愈傷組織 對(duì)放線菌素 D 敏感性 甲種 不能 不敏感 乙種 能 敏感 雜種細(xì)胞 能 不敏感 六、雜種植株鑒定 （一）鑒定的目的 確認(rèn)體細(xì)胞雜種的雜種性；雜種所擁有的的遺傳組成及性狀變異情況。 （二）鑒定方法 形態(tài)鑒定 （ 1）在種間體細(xì)胞雜種中，雜種表現(xiàn)或多或少居于融合親本之間，而在屬間的體細(xì)胞雜種中，表現(xiàn)型更多的是偏向于親本之一。 （ 2）在鑒定中注意環(huán)境條件及非整倍變異的影響。 細(xì)胞學(xué)分析 酶譜分析： 如同工酶、淀粉酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等 DNA內(nèi)切圖譜分析 七、細(xì)胞質(zhì)雜種 ?細(xì)胞質(zhì)雜種：由兩種來(lái)源不同的核外遺傳成分（細(xì)胞器）與一個(gè)特定的核基因組（雙親之一）結(jié)合形成的細(xì)胞雜種。 （一）細(xì)胞質(zhì)雜種的獲得途徑 通過(guò)原生質(zhì)體融合和培養(yǎng) 獲得 誘導(dǎo)原生質(zhì)體攝入細(xì)胞器獲得胞質(zhì)雜種 （二）胞質(zhì)雜種的應(yīng)用 在種內(nèi)或種間轉(zhuǎn)移細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)控制的性狀。如雄性不育。 （三）細(xì)胞質(zhì)雜種的鑒定 表型鑒定 生化鑒定和核酸（核外）酶切分析 如對(duì) 1， 5二磷酸核酮糖羧化酶（ RuBPcase)亞基多肽圖譜的分析（該酶小亞基多肽有核 DNA編碼，大亞基有葉綠體DNA編碼） 在原生質(zhì)體能夠完全融合情況下，胞質(zhì)雜種可通過(guò)以下途徑產(chǎn)生： （ 1）一個(gè)正常的原生質(zhì)體與一個(gè)去核的原生質(zhì)體融合； （ 2）一個(gè)正常的原生質(zhì)體和一個(gè)核失活的原生質(zhì)體融合； （ 3）在異核體形成之后二個(gè)核中有一個(gè)消失； （ 4）在較晚的時(shí)期發(fā)生染色體選擇性的消除。 第六節(jié) 原生質(zhì)體的應(yīng)用價(jià)值 一、在植物遺傳改良上的應(yīng)用 擴(kuò)大物種間遺傳物質(zhì)交流的范圍，創(chuàng)造新種。 轉(zhuǎn)移優(yōu)良性狀，改良 現(xiàn)有品種 作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體應(yīng)用于基因工程。 利用原生質(zhì)體無(wú)性系變異選育新種質(zhì)。 二、基礎(chǔ)理論研究上的應(yīng)用 在植物生理學(xué)研究中的應(yīng)用：如細(xì)胞壁再生、內(nèi)吞作用、氣孔生理、離子吸收與運(yùn)輸?shù)龋? 在基因表達(dá)表達(dá)調(diào)控研究中的應(yīng)用； 在植物病毒分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用。 由普通小麥和高冰草經(jīng)體細(xì)胞雜交獲得的第三代植
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