植物原生質體培養(yǎng)與體細胞雜交-資料下載頁
2025-01-19 00:36本頁面
【正文】 靜置使之沉降，增加觸融機會。 3）用 28%58%的 PEG溶液處理 1530分鐘，促使原生質體相互粘連； 4）然后用清洗培養(yǎng)基逐步清洗原生質體上的 PEG，或用高PH高濃度鈣離子溶液清洗。 注意清洗應逐步平緩進行，劇烈洗滌會減少異核體的形成。 5）融合體的培養(yǎng)。 ?誘導機制 四、原生質體融合產物的 細胞學 ?間期核融合的結果并不產生有活力的雜種細胞，只有有絲分裂期間的核融合形成的雜種細胞才能繼續(xù)進一步的發(fā)育。 ?原生質體融合將產生以下雜種細胞： 親合的細胞雜種： 具有雙親的全套染色體，并能進行正常分裂，形成異源雙倍體。 部分親合的細胞雜種： 一個親本的染色體組或全部消失，或其染色體只有部分的保留或重組于另一親本的染色體組。 形成非整倍體的混合群體： 如粉藍煙草（ 2N=24）和南氏煙草（ 2N=18）獲得的體細胞雜種，其染色體數處于 5664之間。 胞質雜種 ： 包含一個親本的染色體組，但包含雙親的細胞質。 普通小麥和簇毛麥體細胞雜交獲得的雜種細胞染色體 (紅色熒光者為普通小麥染色體，黃色者為簇毛麥染色體 ) 五、雜種細胞選擇 ?選擇的必要性 ?雜種細胞選擇方法 對于在 形態(tài)上 易區(qū)分的原生質體及雜種細胞，可在低密度下培養(yǎng)，然后用機械方法將雜種細胞分離出來。 熒光染料標記 選擇 互補 選擇法 利用兩親本原生質體對培養(yǎng)基成分、抗代謝物或溫度等的敏感性存在著的天然的互補性差異，以及隱性突變造成的遺傳互補來篩選雜種細胞。 互補選擇法 ?利用不同親本原生質體在遺傳上、抗性上和生理上的互補進行選擇： ?白化（ aaBB） +白化（ AAbb） ?綠色（ AaBb） ?營養(yǎng)缺陷（ aaBB ） +營養(yǎng)缺陷（ AAbb ） ?自養(yǎng)（ AaBb ） ?抗性（ aaBB ） +抗性（ AAbb ） ?雙抗（ AaBb ） ?對培養(yǎng)基成分和抗代謝物 互補 ?對光照敏感性互補 葉綠體缺失突變體 光敏突變體 融合，高光強 下培養(yǎng) 只有雜種細胞形成綠色的對光不敏感的細胞團 矮牽牛兩個種的原生質體對培養(yǎng)基成分及 放線菌素 D（抗代謝物）的敏感性存在差異 原生質體類型 在 MS培養(yǎng)基上能否形成愈傷組織 對放線菌素 D 敏感性 甲種 不能 不敏感 乙種 能 敏感 雜種細胞 能 不敏感 六、雜種植株鑒定 （一）鑒定的目的 確認體細胞雜種的雜種性；雜種所擁有的的遺傳組成及性狀變異情況。 （二）鑒定方法 形態(tài)鑒定 （ 1）在種間體細胞雜種中，雜種表現或多或少居于融合親本之間，而在屬間的體細胞雜種中，表現型更多的是偏向于親本之一。 （ 2）在鑒定中注意環(huán)境條件及非整倍變異的影響。 細胞學分析 酶譜分析： 如同工酶、淀粉酶、天冬氨酸氨基轉移酶等 DNA內切圖譜分析 七、細胞質雜種 ?細胞質雜種：由兩種來源不同的核外遺傳成分（細胞器）與一個特定的核基因組（雙親之一）結合形成的細胞雜種。 （一）細胞質雜種的獲得途徑 通過原生質體融合和培養(yǎng) 獲得 誘導原生質體攝入細胞器獲得胞質雜種 （二）胞質雜種的應用 在種內或種間轉移細胞質遺傳物質控制的性狀。如雄性不育。 （三）細胞質雜種的鑒定 表型鑒定 生化鑒定和核酸（核外）酶切分析 如對 1， 5二磷酸核酮糖羧化酶（ RuBPcase)亞基多肽圖譜的分析（該酶小亞基多肽有核 DNA編碼，大亞基有葉綠體DNA編碼） 在原生質體能夠完全融合情況下，胞質雜種可通過以下途徑產生： （ 1）一個正常的原生質體與一個去核的原生質體融合； （ 2）一個正常的原生質體和一個核失活的原生質體融合； （ 3）在異核體形成之后二個核中有一個消失； （ 4）在較晚的時期發(fā)生染色體選擇性的消除。 第六節(jié) 原生質體的應用價值 一、在植物遺傳改良上的應用 擴大物種間遺傳物質交流的范圍，創(chuàng)造新種。 轉移優(yōu)良性狀，改良 現有品種 作為遺傳轉化的受體應用于基因工程。 利用原生質體無性系變異選育新種質。 二、基礎理論研究上的應用 在植物生理學研究中的應用：如細胞壁再生、內吞作用、氣孔生理、離子吸收與運輸等； 在基因表達表達調控研究中的應用； 在植物病毒分子生物學研究中的應用。 由普通小麥和高冰草經體細胞雜交獲得的第三代植
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