植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-01 02:17本頁(yè)面
【正文】 體系的植物細(xì)胞經(jīng)常不能處于同一細(xì)胞周期，這種差異使懸浮細(xì)胞分裂、代謝以及生理生化狀態(tài)等復(fù)雜化。 ? 通過(guò)一定的理化措施可以使同一體系中的細(xì)胞達(dá)到相對(duì)同步化。 什么措施？ ?細(xì)胞周期 饑餓法 ? 饑餓導(dǎo)致的細(xì)胞分裂受阻常常是使細(xì)胞不能合成 DNA，即不能進(jìn)入 S期，或細(xì)胞分裂不能進(jìn)行，即不能進(jìn)入 M期。因此，通過(guò)饑餓法可以獲得處于 G1和 G2期的同步化細(xì)胞。 –氮饑餓時(shí)，通常獲得 G1期的同步化細(xì)胞 –磷和碳饑餓時(shí)，獲得 G1和 G2期的同步化細(xì)胞。 ? 將饑餓細(xì)胞轉(zhuǎn)入完整培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞分裂又可重新恢復(fù)。 抑制劑法 ? 通過(guò)一些 DNA合成抑制劑處理細(xì)胞，使細(xì)胞滯留在 DNA合成前期，當(dāng)解除抑制后，即可獲得處于同一細(xì)胞周期 (G1)的同步化細(xì)胞。 –常用抑制劑主要有 5氟脫氧尿苷 (FudR)和羥基尿 (HU)。 –用羥基尿處理獲得同步化細(xì)胞的方法在小麥、玉米、西芹等植物細(xì)胞培養(yǎng)中已有成功應(yīng)用。 ? 利用破壞微管的藥物將細(xì)胞阻斷在中期，常用的藥物有秋水仙素和秋水仙酰胺，后者毒性較小。 分選法 ? 依據(jù)：細(xì)胞體積大小 ? 方法 –常規(guī)分選方法是梯度離心 –精細(xì)的分選可采用流式細(xì)胞儀 ? 優(yōu)點(diǎn) –操作簡(jiǎn)單 –分選細(xì)胞維持了自然生長(zhǎng)狀態(tài)，不會(huì)有其它處理帶來(lái)的副作用 ? 缺點(diǎn) –分選精細(xì)度較差 低溫處理 ? 可以提高培養(yǎng)體系中細(xì)胞同步化的程度 –Okamura等曾采用此方法使胡蘿卜懸浮細(xì)胞較好地同步化。 –梅興國(guó)等（ 2022）采用 6℃ 低溫處理紅豆杉細(xì)胞也獲得較明顯同步化效果。 ? 可能的原因 –不同的溫度對(duì)細(xì)胞的有絲分裂有極明顯的影響，在一定范圍內(nèi)，溫度下降使細(xì)胞分裂速度減慢，細(xì)胞周期延長(zhǎng)，從而相應(yīng)地延長(zhǎng)了分裂期的時(shí)間，使分裂指數(shù)提高，細(xì)胞同步化率升高。 固定化培養(yǎng)法（ cell immobilization culture) ? 將細(xì)胞限制或定位于特定空間位置的培養(yǎng)技術(shù)稱(chēng)為細(xì)胞固定化培養(yǎng)。 ? 固定化培養(yǎng)方法 :吸附 \交聯(lián) \共價(jià)結(jié)合 \包埋 ? ① 吸附固定化 ? ②離子 /共價(jià)交聯(lián)法 ? ③共價(jià)結(jié)合法 ? ④包埋法 –微囊化、凝膠包埋 ? 與懸浮培養(yǎng)相比，固定化培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)： ① 提高了藥物的合成、積累 ； ②能長(zhǎng)時(shí)間保持細(xì)胞活力； ③可以反復(fù)使用； ④ 抗剪切能力強(qiáng) ； ⑤耐受有毒前體物質(zhì)的濃度高； ⑥遺傳性狀較穩(wěn)定； ⑦后處理難度小。 ? 固定化植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要進(jìn)入工業(yè)化生產(chǎn)有許多問(wèn)題尚待解決 。 – 首先 ， 固定化培養(yǎng)要求代謝產(chǎn)物必須是分泌到細(xì)胞外的 。 – 第二 ， 植物細(xì)胞藥物的積累是不連續(xù)的 ，這也限制了固定化細(xì)胞方法的應(yīng)用 。 – 第三 ， 易污染 。 Flash 對(duì)固定化細(xì)胞活力的測(cè)定方法 ? 染色法 ? 呼吸強(qiáng)度測(cè)定 ? 細(xì)胞生長(zhǎng)和分解速率的測(cè)定 兩類(lèi)培養(yǎng)方法所使用的反應(yīng)器的比較 ? 機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器 ? 氣升式生物反應(yīng)器 ? 鼓泡式生物反應(yīng)器 兩類(lèi)培養(yǎng)方法所使用的反應(yīng)器的比較 ? 流化床生物反應(yīng)器 ? 固定床生物反應(yīng)器 –填充床生物反應(yīng)器 –涓流床生物反應(yīng)器
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