【正文】 16093C 16129A Differences are reported by the position and the nucleotide change (pared to the rCRS) Differences from Reference Sequence 16093 16129 1．群體資料的特征 （ 1）序列變異： 對(duì)無(wú)關(guān)個(gè)體樣本作 HVI ＆ HVII區(qū)段序列測(cè)定的群體調(diào)查，與標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)，可以檢測(cè)出高變區(qū)中出現(xiàn)堿基變異的特定位置數(shù)目，以及觀察隨機(jī)個(gè)體之間的堿基差異平均數(shù)目。 ? 堿基變異主要是 點(diǎn)突變，多位置堿基變異； ? HVI 區(qū)域變異高于 HVII變異區(qū)段 HVI區(qū)的變異位置數(shù)和變異堿基數(shù)都大于 HVII （ 2）群體參數(shù) 由于 mtDNA是核外基因組，自主復(fù)制， 沒(méi)有重組和交換，全部控制區(qū)的堿基序列的變異只能夠看作是一個(gè)單倍型。 –群體遺傳變異率（度） /基因多樣性（ geic diversity） GD = (1Σx2) n / (n 1) –偶合率 (match probability) –個(gè)體識(shí)別力 (power of discrimination) – 群體遺傳變異率（度）（ geic diversity） h = (1Σx2) n / (n 1) – 偶合率 (match probability) p =Σx2 mtDNA頻率估計(jì)的計(jì)算 如果在包括 N個(gè) mtDNA分型的數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)，觀察到一定次數(shù)（ X）的某一 mtDNA分型，其頻率計(jì)算公式 P = X/ N 可信區(qū)間上限概率 P＋ √ P（ 1P） /N 如果在數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)未觀察到分型，可信區(qū)間的上限 1a1/N A代表可信系數(shù)（ %的可信區(qū)間 ) 單體型 (haplotype) 法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中如何根據(jù) mtDNA序列多態(tài)性進(jìn)行個(gè)體識(shí)別或親子鑒定 ？ mtDNA分型時(shí)注意事項(xiàng) ? 數(shù)據(jù)解釋 Data Interpretation –異質(zhì)性 （ Heteroplasmy） – 混合樣品 (目前基本上不可能 ) ? DNA 數(shù)據(jù)庫(kù)大小 – Similar issues to YSTRs but takes longer to generate mtDNA data than YSTR haplotypes ? DNA Database Quality Disadvantages to Sequencing ? Expensive ? Error possibilities with more data to review ? Most information is not used Review forward and reverse sequences across 610 bases only to report… 263G, Most mon type: found in ~7% of Caucasians… （三）在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 ? 優(yōu)點(diǎn) ? 局限性 ? 結(jié)果解釋 mtDNA的特點(diǎn)及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用優(yōu)勢(shì) DNA來(lái)源： 可檢測(cè)樣品范圍增大 ，為很少或沒(méi)有 nDNA（ nucleic DNA） 的樣本的檢驗(yàn)提供了希望 ， 如骨骼 、 指甲 、 毛干等； ： 適于微量 、 高度降解樣本； ： 可選擇的比對(duì)參照樣本范圍擴(kuò)大 。 ? 如遺骸的個(gè)人認(rèn)定或一個(gè)失蹤的人無(wú)法提供參考樣本，可用其母親、兄弟姐妹等血液作為參考樣本。 mtDNA序列分析的一般用于下列情況 ? 脫落毛發(fā) ? 指甲、骨骼或牙齒樣本 ? 極微量血痕 ? 核 DNA分型失敗樣本 ? 案例 1 Holland等（ 1993年）對(duì) 1984年越南歸還的越戰(zhàn)身亡美國(guó)士兵的殘骸成功地進(jìn)行了身源鑒定。這些殘骸遺存于自然環(huán)境下長(zhǎng)達(dá) 24年之久。 ? 案例 2 沙皇遺骸的辨認(rèn)（ 1918年埋葬， 1991年挖掘， 1994年測(cè)定 mtDNA序列） ? 案例 3 （ 1996年美國(guó)）現(xiàn)場(chǎng)僅從死者身上發(fā)現(xiàn) 1根毛發(fā)。 mtDNA序列分析與犯罪嫌疑人 Paul Ware 的完全匹配， Paul Ware 被 判強(qiáng)奸、謀殺罪。這是 mtDNA序列分析首次在法庭上作為證據(jù)。 沙皇遺骸的辨認(rèn) ? 1917年，十月革命后，尼古拉二世被流放到西伯利亞的葉卡捷琳堡。 ? 1918年 7月 17 日清晨全家被槍殺（至少 9人）。 ? 80年代后，俄羅斯總統(tǒng)葉利欽親自參加了在圣彼得堡舉行的安葬儀式。 Identifying the Romanov Remains (the Last Russian Czar) Tsarina Alexandra Tsar Nicholas II Xenia CheremeteffSfiri Prince Philip Duke of Edinburgh Geij Romanov Mitotype 16111T 16357C 263G Mitotype 16126C 16169T 16294T 16296T 73G 263G 16169T/C 16169T/C Louise of HesseCassel SOURCES: Gill et al. (1994) Nature Geics, 6, 130135.。 Ivanov et al. (1996) Nature Geics, 12, 417420。 Stone, R. (2022) Science, 303, 753. Mitotyping在法醫(yī)學(xué)應(yīng)用的局限性（一） ?分型技術(shù)要求高 ， 耗時(shí)耗力耗錢(qián) ?FBI： 2022年計(jì)劃 $4,000,000再次資助 4個(gè)區(qū)域性的法醫(yī) mtDNA實(shí)驗(yàn)室； 一年約須 2/3的人力分析大約 120 mtDNA 的案件 。 （ FBI laboratory 2022 annual report） 局 限 性（二） ? 識(shí)別力相對(duì)較低： ? US Caucasians的 mtDNA database： 1175 個(gè)個(gè)體檢出 982種單倍型， 7％的 US Caucasians 有 mon HV1/ HV 2型；13種其它的 HV1/ HV2在人群中的比例為 ％。 中國(guó)的 mtDNA database：檢出 356種單倍型 。 非洲裔美洲人的 mtDNA database：檢出 1655種單倍型 （ 最多 ） 。 巴勒斯坦的 mtDNA database：檢出 8種單倍型 （ 最少 ） 。 局 限 性（三） ? 不存在嚴(yán)格的匹配概念，不能作為絕對(duì)個(gè)人認(rèn)定的遺傳標(biāo)記 ? 異質(zhì)性 ? 高污染風(fēng)險(xiǎn) ? 混合斑（幾乎不可能） 注意！！ 異質(zhì)性 （ Heteroplasmy ） ? 概念 ：一個(gè)個(gè)體的線粒體 DNA有兩套或兩套以上不同堿基序列差異的情況。 ? 三種形式： a: 個(gè)體的不同組織中含有一種以上的 mtDNA序列 B:同一個(gè)體同一組織的不同細(xì)胞的 mtDNA序列不同 C:同一個(gè)體同一組織的不同細(xì)胞同一細(xì)胞間不同拷貝的線粒體間有不同序列。 在同一細(xì)胞中只有一個(gè)拷貝核染色體，但約有 100000個(gè)拷貝的線粒體 DNA，所以一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的 mtDNA比例大于一定值時(shí)，才能被檢測(cè)到其遺傳突變（異質(zhì)性）。 異質(zhì)性 出現(xiàn)頻率： 28 % ? 為避免可能存在異質(zhì)性影響序列必須雙向測(cè)序和至少重復(fù)一次。 異質(zhì)性的種類(lèi) ： 長(zhǎng)度異質(zhì)性：出現(xiàn)在 HVⅠ nt1618416193和 HVⅡ nt1303310,的多聚 C區(qū) 。 序列異質(zhì)性：在一個(gè)堿基的位置上出現(xiàn)兩個(gè)堿基的存在，表現(xiàn)為基因重疊。 注意：在 mtDNA序列同時(shí)出現(xiàn)兩個(gè)位點(diǎn)的異質(zhì)性很少見(jiàn)。 異質(zhì)性樣本的主要問(wèn)題是不同組織間的堿基比例不同 ，如在毛發(fā)與毛發(fā)之間，和血液和毛發(fā)之間堿基的比例不同。 一般實(shí)驗(yàn)室建議對(duì)同一個(gè)體的多根毛發(fā)檢測(cè)序列異質(zhì)性。 注意事項(xiàng) 異質(zhì)性隨著人的年齡增加而增加； 在不同組織中的異質(zhì)性不同，如在肌肉組織中最高。 長(zhǎng)度異質(zhì)性 16093 (C/T) 16086 16101 序列異質(zhì)性 16093 在 mtDNA的雙向測(cè)序結(jié)果中 ， 在同一堿基的位置出現(xiàn)了明顯高于背景水平的兩個(gè)峰 （ 次峰信號(hào)占主峰的 40%以上 ） ， 則可考慮該位點(diǎn)的異質(zhì)性 。 國(guó)際法庭遺傳學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn) （ international society for forensic geic, ISFG） 結(jié)果解釋 ? 比對(duì)樣品有 2個(gè)以上的堿基序列不同 排除 ? 比對(duì)樣品有 1個(gè)堿基序列不同 異質(zhì)性 不能確定 ? 比對(duì)樣品堿基序列相同 不能排除，匹配 可能來(lái)自嫌疑人 可能來(lái)自與嫌疑人同一母系的人 可能來(lái)自與嫌疑人無(wú)母系關(guān)系的同一個(gè)體 ? 考慮案件限定范圍，可有認(rèn)定意義。