【正文】 時(shí)采用較高溫度進(jìn)行試驗(yàn)，也是充分考慮到溶菌酶的耐熱性較好和一些文獻(xiàn)資料而確定的。 NaCl濃度的影響％NaCl、1％NaCl、％NaCl 、2％NaCl、％NaCl五種濃度進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)。提取pH： 提取溫度：室溫25℃表33 不同的NaCl濃度對(duì)溶菌酶提取的影響抽提條件溶酶菌％NaCl1％NaCl% NaCl2％NaCl％NaCl圖35 不同的NaCl濃度對(duì)溶菌酶提取的影響從表33和圖35中可以看出隨著溶液中鹽的濃度增大，酶的提取量也增大，但是達(dá)到一定濃度后提取量有所下降，所以當(dāng)NaCl濃度為2%時(shí)酶的提取量較大。 不同的NaCl濃度對(duì)酶活的影響圖36不同的NaCl濃度對(duì)溶菌酶活性的影響從圖36可以看出，抽提劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％時(shí)溶菌酶活力最大，隨著抽提劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變大，溶菌酶酶活變大，且其變化曲線明顯。出現(xiàn)這種情況可能是因?yàn)槌樘崛芤褐械柠}離子能減弱溶菌酶分子間離子鍵及氫鍵的作用力，其鹽離子作用于大分子表面，增加了表面電荷，從而極性增加，水合作用增強(qiáng)，形成穩(wěn)定的雙電層[10]。如果從溶解度角度考慮，鹽溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)加大，溶解度也會(huì)變大，因而鹽溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高，溶菌酶活性應(yīng)隨之增強(qiáng)。但抽提劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過2％時(shí)，對(duì)酶活性的影響進(jìn)一步加劇[7]。 鹽析時(shí)pH值對(duì)溶菌酶活性的影響這五組實(shí)驗(yàn)的條件是：抽提用NaCl溶液濃度2％．溫度40℃，鹽析用NaCl溶液濃度為5％。圖37 鹽析時(shí)pH值對(duì)溶菌酶活性的影響圖37表明鹽析pH為11時(shí)，溶菌酶的酶活最大，并且pH在9～1l內(nèi)酶活變化曲線陡峭，提取的pH接近等電點(diǎn)，利于溶菌酶的析出，酶量增加，也使酶活性顯著升高，并且此處析出的溶菌酶活性較好。所以在較低的鹽濃度下，溶液的pH值接近等電時(shí)，析出的溶菌酶活性較好。 溶菌酶酶活性 溶菌酶抑菌效果圖38 溶菌酶的抑菌作用從圖38可以看出，溶菌酶對(duì)枯草芽孢桿菌具有明顯的抑制作用。未加溶酶的培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)較大，而含有溶菌酶的培養(yǎng)基上的菌落非常小，并且分布比較分散，這說明雞蛋溶菌酶嚴(yán)重影響到枯草芽孢桿菌的生長(zhǎng)，對(duì)其生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。 溶菌酶活力測(cè)定根據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)得的數(shù)據(jù)可知，提取時(shí)的pH、溫度和氯化鈉的濃度不同時(shí)，溶菌酶的酶活力也不同，由表34可知，溫度40℃，氯化鈉濃度為2%時(shí)，溶菌酶酶活力最高。計(jì)算酶活力：△E450＝；Ew=；△ E450/(Ew)=()=15220U/mg所以測(cè)得溶菌酶的最高酶活力為15220U/mg。表34 不同條件下的酶活力pH溫度NaCl濃度△E450酶活力25℃%1187025℃%1262025℃%1384025℃%1342025℃%1314025℃%1364030℃%1468035℃%1506040℃%1522045℃%1518025℃%1246025℃1%1263025℃%1291025℃2%1358025℃%13210結(jié) 論本實(shí)驗(yàn)主要是采用聚丙烯酸沉淀法從廢棄的新鮮蛋殼中提取溶菌酶并測(cè)定其活力，在使用原料和廢物再利用的角度上，本實(shí)驗(yàn)對(duì)以減輕環(huán)境污染和廢物回收利用為原則提取的方法進(jìn)行改進(jìn)。得出以下幾個(gè)結(jié)論：(1) 。(2) 在實(shí)驗(yàn)過程中討論了不同pH值、溫度、NaCl溶液濃度等因索對(duì)抽提的影響，對(duì)比不同條件下溶菌酶的抽提量和不同條件下提取的溶菌酶的酶活力，確定了最佳的抽提條件：，最佳抽提溫度為40℃，％．最佳鹽析pH為11(3) 研究了溶菌酶對(duì)枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)的影響作用，發(fā)現(xiàn)溶菌酶對(duì)枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)有抑制作用(4) 計(jì)算不同條件下提取的溶菌酶的酶活力，在最佳抽提條件下提取的溶菌酶的酶活力最高，15220U／mg。本實(shí)驗(yàn)的成功完成，對(duì)于環(huán)境保護(hù)和廢棄資源再利用有著重要的意義，我國作為一個(gè)產(chǎn)蛋大國，每天產(chǎn)生的廢棄蛋殼重量以千噸計(jì)，成批拋棄的蛋殼很快就會(huì)腐敗變質(zhì)，造成環(huán)境的污染，與其我們不遺余力地尋求解決垃圾污染、破壞環(huán)境的方法，還不如做到垃圾的減量化、資源化，這才是最具積極意義的，最值得提倡的。廢棄蛋殼數(shù)量之多可以說是取之不盡，用之不竭，如果能夠被深度加工綜合利用起來，那么可以為人類帶來無比龐大的資源，但是目前蛋殼的開發(fā)利用明顯滯后，主要是因?yàn)榈皻さ膩碓捶稚⒉灰资占?，易于污染。而發(fā)展現(xiàn)代蛋制品工業(yè)將會(huì)在很大的程度上改變這一現(xiàn)狀，所以對(duì)蛋殼的開發(fā)和資源化研究具有重要的理論和實(shí)踐意義。參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)[1] 徐立宏,[D].廣州：華南理工大學(xué)應(yīng)用化學(xué)系,2005,（5）：25~27.[2] 生吉萍,申琳,范蓓,姜馗,[J].中國食品學(xué)報(bào), 2003(z1)：334~337[3] [J].重慶工商大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）,2006,23(6) ：551~555[4] 姚福榮,羅樂,向乾. 蛋殼中提取溶菌酶的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(35)：10977~10978[5] [J].食品科學(xué),2003,25(9)：119~121[6] [J].遼寧沈陽：沈陽化工學(xué)院環(huán)境與生物工程學(xué)院. ,22(3)：222~225[7] 趙玉萍,張灝,[J].食品科學(xué),2002(1)：58~54[8] 岳克,[D].內(nèi)蒙古石油化工,1997, 23(12):9~11[9] [D].華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2010[10] 鄒艷麗,孫溢,[J].生物工程學(xué) 報(bào),2005,21(3):520~525[11] 杜利成,楊葵華. 從雞蛋殼中提取溶菌酶的工藝研究[J]. 四川食品與發(fā)酵. 2005,41(2): 22~25[12] 劉楊,史清洪,趙黎明,[J] 控制學(xué)報(bào),2005,5(3):269~272[13] Nishiki T, Sato I,Muto A, et al. Mass transfer characterization in forward and back extractions of lysozyme by AOTisooctane reverse micelles across a flat liquidliquid interface[J]. Biochemical Engineering Journal, 1998,1(2):91~97[14] Noh KH, Imm JY. Onestep separation of lysozyme by reverse micelles formed by the cationic surfactant, cetyldimethylammonimn bromide[J]. Food Chemistry, 2005,93(1):95~101[15] 王煒軍,方穎,[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005,26(4):62~66[16] [J].廣州化工,2012,40(7)：53~56[17] 王煒軍,[J].植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào),1996,17(5):59~63[18] 劉秋葉,蓋青青,何錫文,[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào),2008,29(3):505~509[19] 李德海,[J].中國乳品工業(yè),2002,30(5)：128~129致 謝經(jīng)過四個(gè)多月的努力終于完成了大學(xué)四年的里最后的一項(xiàng)任務(wù)，回首這四年里，付出了多少的努力和汗水，在這四年里我不斷的進(jìn)步，不斷的成長(zhǎng)，學(xué)會(huì)了很多，也懂得了很多，這是我人生中最重要的四年。在此希望我的母校越來越好，老師們身體健康，生活順利。衷心的感謝我的導(dǎo)師趙晴瀟老師對(duì)我關(guān)心、指導(dǎo)和教誨，在您的幫助和陪伴下度過了大學(xué)最后的一段時(shí)光，您開闊的思維、敏銳的洞察力以及詳細(xì)的修改意見一直給我很大的啟發(fā)。唯一的遺憾是我自己不夠主動(dòng)，錯(cuò)過了許多與您交流的機(jī)會(huì)。在這里，請(qǐng)?jiān)试S我向我最尊敬的趙晴瀟老師表示真摯的謝意！同時(shí)，也要感謝魏群老師、鄭勝老師對(duì)我無私的幫助，感謝同學(xué)好友姜鴻儒、唐佳林、陳宗貴、韓振、劉志鵬等人對(duì)我的幫助，感謝生物101班同學(xué)在這四年中對(duì)我的關(guān)心和包容。最后，再次感謝為了我們默默地?zé)o私的奉獻(xiàn)著自己的老師們，老師，您幸苦了！衷心祝愿母校的明天更加美好！