【正文】 在此希望我的母校越來(lái)越好，老師們身體健康，生活順利。計(jì)算酶活力：△E450＝；Ew=；△ E450/(Ew)=()=15220U/mg所以測(cè)得溶菌酶的最高酶活力為15220U/mg。如果從溶解度角度考慮，鹽溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)加大，溶解度也會(huì)變大，因而鹽溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高，溶菌酶活性應(yīng)隨之增強(qiáng)。圖34 溫度對(duì)溶菌酶活性的影響由圖34可知，隨著溫度的提高。提取溫度：室溫25℃；提取時(shí)NaCl含量：％表31 pH值對(duì)抽提的影響蛋殼pH溶酶菌50gpH不控制50g50g50g50g50g圖31 pH值對(duì)抽提的影響從表、pH不控制時(shí)溶菌酶的提取量最少。底物懸浮液的制備：，加入5ml磷酸鹽緩沖液，在研缽中研磨3min，然后倒入50ml燒杯中，再加入磷酸鹽緩沖液，使總體積達(dá)到50ml。棄去染色液，用蒸餾水把膠面漂洗幾次，然后加入脫色液，進(jìn)行擴(kuò)散脫色，經(jīng)常更換脫色液，直至蛋白質(zhì)帶清晰，最后測(cè)出蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。 蛋白質(zhì)樣品的處理：若標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)或預(yù)分離的蛋白質(zhì)樣品是固體，加入1520μL的樣品處理液。4℃冰箱保存濃縮膠緩沖液（）: Tris ,加蒸餾水溶解，6mol/L，定容100ml。解離：將前一步得到的溶菌酶聚丙烯酸凝聚物， mol/Ll的Na2C03將其溶解，轉(zhuǎn)移后。L1的HCl調(diào)pH值，然后每10分鐘測(cè)一次pH值并且調(diào)整，在水浴鍋中加熱4h，在這過(guò)程中不停的攪拌并且調(diào)整pH值，始終讓溶液中的pH值保持不變，然后用篩子將蛋殼過(guò)濾掉[11]。在各類(lèi)動(dòng)物性食品的廢棄物中，其骨、皮、血的資源化程度較高，市場(chǎng)上有多種骨鈣補(bǔ)劑、氨基酸、膠原蛋白功能制劑等，但尚未見(jiàn)到蛋殼鈣劑、蛋殼蛋白、蛋殼膠原等商品，蛋殼的開(kāi)發(fā)利用明顯滯后，這與長(zhǎng)期以來(lái)蛋殼來(lái)源十分分散有直接關(guān)系。聚乙二醇／無(wú)機(jī)鹽中所用的無(wú)機(jī)鹽主要是磷酸鹽和硫酸鹽。它的優(yōu)點(diǎn)是可用不同的金屬離子固定到螯合載體上，用一種更強(qiáng)的螯合劑將所用的螯合劑洗脫下來(lái)從而實(shí)現(xiàn)再生。 親和分離法親和分離法是一種以親和力為基礎(chǔ)的分離純化方法，利用物質(zhì)問(wèn)的特異性結(jié)合力，使得目的物質(zhì)或者雜質(zhì)與相應(yīng)的配基結(jié)合，達(dá)到相互分離的目的。由于溶菌酶是一種堿性蛋白質(zhì)，最適宜的酸度為pH ，因此制備溶菌酶時(shí)，一般選用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。結(jié)晶法是目前提取分離蛋清中溶菌酶的首選方法，它要求溶菌酶的含量相對(duì)高點(diǎn)，因此不適宜分離微量的溶菌酶，故除了蛋清，其他來(lái)源的溶菌酶生產(chǎn)一般不用結(jié)晶法。Shuting chon (1998)用反膠束萃取雞蛋淸溶菌酶，收率90%，比活高達(dá) 73000U/mg，是目前有報(bào)道的資料中溶菌酶活力最高的一種方法，但此種方法是否能達(dá)到所報(bào)道的酶活力，尚待測(cè)定。LiChan (1986)用陽(yáng)離子交換柱色譜分離蛋淸中溶菌酶，他用DuoliteC464 (一種弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂）吸附溶菌酶，再用一定濃度和pH的氯化鈉溶液或磷酸鹽緩沖液將溶菌酶洗脫下來(lái)，得到活力較高的溶菌酶，收率高達(dá)90%~95%。1927年，英國(guó)菲利普集團(tuán)發(fā)表了對(duì)雞蛋清溶菌酶一作用底物復(fù)合體第一射線衍射的研究[5]。一般應(yīng)用溶菌酶進(jìn)行菌體或細(xì)胞破壁提取細(xì)胞內(nèi)容物（如原生質(zhì)體等）應(yīng)用于融合育種，或生產(chǎn)蛋白質(zhì)、核酸 類(lèi)呈味物質(zhì)。溶菌酶作為防腐劑有以下優(yōu)點(diǎn)：(a)溶菌酶是很穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，有較強(qiáng)的抗熱性。（1）在醫(yī)學(xué)上，它是一種高效抑菌、殺菌、抗病毒蛋白質(zhì)，它能夠分解殺滅諸如葡萄球菌屬、鏈球菌屬等革蘭氏陽(yáng)性菌，用于抗菌、抗病毒、止血、消炎等。polyacrylic acid。eggson the關(guān)鍵詞：蛋殼；溶菌酶；聚丙烯酸；酶活力IAbstractAbandoned eggshell is an untapped treasure for human，its potential value is difficult to this experiment based on the previous research，In the use of raw materials and Waste recycling point of view to improve the method of the extraction of lysozyme. the polyacrylic acid precipitation method of extracting lysozyme from eggshell was studied. The extraction, removing impurity protein, dissociation, salting out a series of steps successfully from the eggshell extract the trace of lysozyme and protein identification, and influences of pH value, temperature, concentration of NaCl solution on the extraction in the process of test, determine the optimum extraction conditions :the best extraction pH ,the best extraction temperature is 40℃, the mass fraction of NaCl optimal extraction agent for %,the optimum salting out pH 11,The experiment采用聚丙烯酸沉淀法從廢棄的新鮮蛋殼中提取溶菌酶，經(jīng)抽提、除雜蛋白、吸附、解離、鹽析等一系列步驟成功地從廢棄蛋殼中提取出了一定量的溶菌酶。determination of enzyme activityof lysozymein the 1000g 溶菌酶的性質(zhì)及作用溶菌酶( Lysozyme) 又稱胞壁質(zhì)酶或N一乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是由129個(gè)氨基酸構(gòu)成的堿性蛋白, 化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定，通常情況下為白色或微白色的無(wú)定性粉末或晶體性、味甜、無(wú)臭、無(wú)毒性，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌中的耐輻射微球菌有強(qiáng)力分解作用?？谇恢兄饕凝x齒病原菌是突變鏈球菌，溶菌酶可有效抑制突變鏈球菌的生長(zhǎng)繁殖，防止齲齒的發(fā)生。溶菌酶與食鹽水溶液處理蠔、蝦和其它海洋食品，在冷藏條件下貯藏，可起到防腐作用。基于溶菌酶的廣泛用途及在蛋制品加工中發(fā)拝資源優(yōu)勢(shì)，綜合利用原材料，增加產(chǎn)值利潤(rùn)。1945年，奧爾德頓等人用彭潤(rùn)土巖吸附，再用吡啶溶出從雞蛋清中得到了收率較髙、結(jié)晶好的溶菌酶，第二年他們開(kāi)發(fā)出直接結(jié)晶法，即在含5%NaCl、pH10左右蛋白中加入溶菌酶晶體作為晶種，低溫下獲得了溶菌酶結(jié)晶品。施德恒（1992)采用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂CMSephadex抽提雞蛋殼膜中溶菌酶。 結(jié)晶法結(jié)晶法是一種傳統(tǒng)的制備溶菌酶晶體的方法，由于溶菌酶具有耐熱和耐酸，以及在鹽溶液中穩(wěn)定好，溶解性強(qiáng)的特點(diǎn)，結(jié)晶過(guò)程可以通過(guò)改變?nèi)芤旱臈l件，來(lái)使溶菌酶在溶液中以晶體態(tài)析出。其基本原理是通過(guò)膜蒸餾來(lái)脫除溶液中的溶劑，濃縮溶液，使溶液達(dá)到過(guò)飽和并通過(guò)膜表面的誘導(dǎo)作用而形成晶體[8]。目前，利用親和層析法分離溶菌酶的報(bào)導(dǎo)有很多。親和膜色譜技術(shù)是兼具膜分離與親和分離的特點(diǎn)，與傳統(tǒng)的膜分離、親和色譜相比，不僅具有純化倍數(shù)高，壓降小，分離時(shí)間短，生物大分子在分離過(guò)程中變性幾率小，允許較快的加料速度等特點(diǎn)，而且比柱親和色譜更易實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)。兩相的組成和密度均不相同，通常密度較小的一相浮于上方，為上相；密度較大的一相沉于下方，為下相。本實(shí)驗(yàn)就是從廢棄的蛋殼中提取出溶菌酶。但溶菌酶在雞蛋殼中含量很低，所以我將采用聚丙烯酸沉淀法從廢棄蛋殼中提取溶菌酶進(jìn)行初步的研究，將經(jīng)過(guò)提、除雜蛋白、吸附、鹽析等一系列步驟成功地提取出蛋殼中的微量溶菌酶，討論不同的條件對(duì)抽提的影響；本試驗(yàn)在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)優(yōu)化試驗(yàn)條件，在溶菌酶酶活性質(zhì)研究過(guò)程中，以枯草芽孢桿菌作為研究對(duì)象，研究溶菌酶對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用及在不同的抽提條件下提取的溶菌酶的酶活力。棄掉濾渣。至恒溫培養(yǎng)箱中40℃條件下干燥稱重。然后用細(xì)滴管或注射器仔細(xì)注入少量水。電泳：加樣完畢，蓋好上蓋，連接電泳儀，打開(kāi)電泳儀開(kāi)關(guān)后，樣品進(jìn)膠前電流控制在15~20mA，大約15~20min；樣品中的溴酚藍(lán)