微生物的實驗室培養(yǎng)-資料下載頁
2025-01-13 23:50本頁面
【正文】 —稀釋涂布平板法和平板劃線法。刪除偏差太大的數(shù)據(jù)，對剩下的多個培養(yǎng)數(shù)據(jù)進行平均處理就可以得到水樣中的大腸桿菌數(shù)。大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，通過密封培養(yǎng)，大腸桿菌可以進行無氧呼吸產(chǎn)生氣體，以氣泡的形式釋放出來。 [答案 ] (1)稀釋涂布平板法 D (2)需要 因為需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染 (培養(yǎng)基滅菌是否合格 ) (3) 108 (4)通過無菌操作向試管內(nèi)注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于 37℃ 恒溫箱培養(yǎng) 24 h。若試管內(nèi)有氣泡生成，則說明水樣中有大腸桿菌 [鏈一串 ] 微生物的數(shù)量測定 1．實驗流程 土壤取樣：從距地表約 3 ～ 8 c m 的土壤層中取樣 ↓ 樣品的稀釋????? 測細(xì)菌數(shù)：選用 10 10 106倍稀釋測放線菌數(shù)：選用 10 10 105倍稀釋測真菌數(shù)：選用 10 10 104倍稀釋 ↓ ↓ 微生物的培養(yǎng)與觀察????? 細(xì)菌：在 30 ～ 37 ℃ 下培養(yǎng) 1 ～ 2 d放線菌：在 25 ～ 28 ℃ 下培養(yǎng) 5 ～ 7 d霉菌：在 25 ～ 28 ℃ 下培養(yǎng) 3 ～ 4 d 2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法 (1)顯微鏡直接計數(shù)法： ①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。 ②方法：用計數(shù)板計數(shù)。 ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。 (2) 間接計數(shù)法 (活菌計數(shù)法 )： ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。 通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。 ②操作：為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 30～ 300 的平板進行計數(shù)。 ③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝ (C247。 V) M，其中 C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)， V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積 (mL)， M代表稀釋倍數(shù)。 3．操作提示 (1)將待測樣品經(jīng)一系列 10倍梯度稀釋，然后選擇 3個稀 釋度的菌液，分別取 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。 (2)為使結(jié)果接近真實值，可將同一稀釋度菌液加到 3個 或 3個以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù)。 [關(guān)鍵一點 ] 統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。這是因為當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。 [通一類 ] 4．通過實驗測定土壤中的細(xì)菌數(shù)量，下列與此操作有 關(guān)的敘述中，不正確的是 ( ) A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、 高壓滅菌后倒平板 B．取稀釋倍數(shù)分別為 10 105和 106倍的土壤稀釋 液各 mL，分別涂布于各組平板上 C．將培養(yǎng)皿倒置， 37℃ 恒溫培養(yǎng) 12～ 24小時 D．選擇菌落數(shù)在 300個以上的培養(yǎng)皿進行計數(shù) . 解析： 檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)，用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板，取 10 10106倍的土壤稀釋液各 mL，分別涂布于各組平板上，將平板倒置， 37℃ 恒溫培養(yǎng) 24～ 48小時，選擇菌落數(shù)在30～ 300的平板進行計數(shù)。 答案： D 5．在做分離分解尿素的細(xì)菌實驗時，某同學(xué)從對應(yīng) 106 倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約 150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約 50個菌落。某同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有 ( ) ① 土樣不同 ② 培養(yǎng)基污染 ③ 操作失誤 ④ 沒有設(shè)置對照 A． ①②③ B． ②③④ C． ①③④ D． ①②④ 解析： 某同學(xué)比其他同學(xué)的實驗結(jié)果數(shù)據(jù)大許多，可能由于選取的土樣不同、培養(yǎng)基滅菌不徹底或操作過程中雜菌污染，也可能是操作失誤，如配制的培養(yǎng)基中混入其他含氮物質(zhì)等。 答案： A
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