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常用分子生物學(xué)技術(shù)的原理及其應(yīng)用-資料下載頁(yè)

2025-01-13 22:27本頁(yè)面

　　

【正文】 ? 各種親和分析（標(biāo)簽蛋白沉淀、免疫共沉淀等） ? 熒光共振能量轉(zhuǎn)換效應(yīng)分析 ? 噬菌體顯示系統(tǒng)篩選 ?常用蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù) 目錄標(biāo)簽融合蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)是一個(gè)基于親和色譜原理的、分析蛋白質(zhì)體外直接相互作用的方法。（一）標(biāo)簽蛋白沉淀標(biāo)簽融合蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)主要用于證明兩種蛋白分子是否存在直接物理結(jié)合、分析兩種分子結(jié)合的具體結(jié)構(gòu)部位及篩選細(xì)胞內(nèi)與融合蛋白相結(jié)合的未知分子。目錄標(biāo)簽融合蛋白沉淀實(shí)驗(yàn)流程示意圖目錄（二）酵母雙雜交技術(shù)的基本原理和用途目錄 ?酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用 ? 證明兩種已知基因序列的蛋白質(zhì)可以相互作用的生物信息學(xué)推測(cè)。 ? 分析已知存在相互作用的兩種蛋白質(zhì)分子的的相互作用功能結(jié)構(gòu)域或關(guān)鍵的氨基酸殘基。 ? 將擬研究的蛋白質(zhì)的編碼基因與 BD基因融合成為“誘餌”表達(dá)質(zhì)粒，可以篩選 AD基因融合的“獵物”基因表達(dá)文庫(kù)，篩選未知的相互作用蛋白質(zhì)。目錄電泳遷移率變動(dòng)測(cè)定 (electrophoretic mobility shift assay， EMSA)或稱凝膠遷移變動(dòng)實(shí)驗(yàn) (gel shift assay)最初用于研究 DNA結(jié)合蛋白與相應(yīng)DNA序列間的相互作用，可用于定性和定量分析，已經(jīng)成為轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法。目前這一技術(shù)也被用于研究 RNA結(jié)合蛋白和特定 RNA序列間的相互作用。二、 DNA蛋白質(zhì)相互作用分子分析技術(shù) （一）電泳遷移率變動(dòng)測(cè)定目錄放射自顯影未結(jié)合探針結(jié)合有蛋白的探針標(biāo)記探針 1X 1X 1X 1X 核蛋白提取物 1X 10X 10X 未標(biāo)記探針 10X ?凝膠遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖目錄染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù) (chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)是目前可以研究體內(nèi) DNA與蛋白質(zhì)相互作用的主要方法。（二）染色質(zhì)免疫沉淀法目錄 ?染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)流程及結(jié)果示意圖

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