【正文】 等單位對(duì)莪術(shù)油納米制劑進(jìn)行了研究。 1 莪術(shù)油固體脂質(zhì)納米粒 制備 取莪術(shù)油 ，在 75℃ 177。5 ℃ 水浴下，加熱至完全熔融，作為油相；稱取大豆卵磷脂 、泊洛沙姆 188 80溶于適量的蒸餾水中，水浴加熱至與油相溫度相同，作為水相。在 2 10 3 r min－ 1 攪拌條件下，用預(yù)熱過的注射器將油相緩慢滴加于水相中，并高速攪拌 1 h，形成初乳。將所得初乳在 75℃ 177。5 ℃ 、 120 Pa條件下，高壓乳勻 3次，然后迅速冷至室溫，得到乳光明顯的澄明莪術(shù)油 一 SLN混懸液， 4℃ 保存?zhèn)溆谩? 取適量莪術(shù)油一 SLN混懸液，加入適量的凍干保護(hù)劑甘露醇，在 － 40℃ 抽真空條件下， 48 h低溫冷凍干燥得凍干粉，外觀呈淡黃色粉末狀，流動(dòng)性良好。 表征 取莪術(shù)油一 SLN混懸液適量，加適量蒸餾水稀釋，滴加在覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，在透射電鏡下觀察納米粒的形態(tài) （見圖 920）為 類球形實(shí)體粒子，且粒徑均勻。用激光散射粒度測(cè)定儀測(cè)定其粒徑，平均值為 nm，粒徑分布圖見圖921， 可見粒徑分布較窄，且基本呈正態(tài)分布。莪術(shù)油納米粒的載藥量和包封率分別為 ％和 ％。 圖 920 莪術(shù)油一 SLN透射電鏡照片（ 105） 圖 921 莪術(shù)油一 SLN粒徑分布 2 莪術(shù)油納米乳劑 制備 取甘油、吐溫 80，攪拌分散于 60℃處方量 2/5的蒸餾水中。另取卵磷脂、 泊洛沙姆 （ F68），攪拌下依次加入到水相溶液中。待卵磷脂與 F68分散完全后，將莪術(shù)油逐滴加入到水相中，同時(shí)磁力攪拌，加完后，以探頭式超聲破碎儀超聲 6min，即得莪術(shù)油初乳。在攪拌下加入剩余處方量的蒸餾水，超聲 6min。將此膠體分散體系用高壓均質(zhì)機(jī)于 130MPa 循環(huán) 3 次，即可得到乳光明顯的莪術(shù)油乳劑。 表征 采用動(dòng)力 光散射法測(cè)定其平均粒徑為 (177。 )nm；透射電鏡下觀察納米乳劑形態(tài)為類球狀 ,大小均勻；采用葡聚糖凝膠柱層析法測(cè)定吉馬酮的包封率為 (177。 )％。 葫蘆素 葫蘆素類成分是一類從植物中提取的高度氧化的四環(huán)三萜類化合物，今已發(fā)現(xiàn) 40多種，葫蘆素 BE（ CuBE）主要從中藥甜瓜蒂中提取的。它具有多種生物活性，有保肝，抗炎，提高機(jī)體免疫功能，抗化學(xué)致癌和抗腫瘤等作用 [66]，目前臨床上主要用于治療肝炎和原發(fā)性肝癌。有人通過體外抗瘤試驗(yàn)證明 [6768]，葫蘆素BE對(duì)人舌鱗癌 Tca8113和人頰鱗癌 BcaCD885細(xì)胞系、人腺樣囊性癌 (ACC－ M)和粘液表皮樣癌 (MEC－ 1)細(xì)胞系有較強(qiáng)的相對(duì)抗腫瘤活性。重慶醫(yī)科大學(xué)楊凱 [6972]等制備納米微粒 —— 葫蘆素 BE聚乳酸納米微粒 (Cucurbitaein BE polylactic acid nanopartieales， CuBEPLANP) 凍干針劑，并證明了其行口腔癌周注射后對(duì)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶具有靶向性的抗癌緩釋作用。 制備與表征 將 CuBE 和 PLA 按質(zhì)量比 1： 3 的比例溶于乙酸乙 脂 混合溶液中，混合均勻后加人含有表面活性劑的 水性溶液中，室溫下以中速電磁攪拌 6 h，溶于乙酸乙脂 混合溶液中的聚乳酸由于乙酸乙 脂 的揮發(fā)而發(fā)生聚合，將藥物包裹、鑲嵌和吸附而形成載藥納米微粒，然后用微孔濾膜抽濾即得乳白色的 CuBEPLANP 膠體溶液，在 CuBEPLANP 膠體溶液中加人 10％的甘露醇作支架劑，拌攪溶解后以2 ml／瓶分裝于安瓿中，然后冷凍干燥即得 CuBEPLANP 凍干針劑。將CuBEPLANP 凍干針劑用 γ 射線消毒備用。 CuBEPLANP凍干針劑在透射電鏡下均為球形顆粒，無粘連，粒徑分布范圍為 47120 nm，平均粒徑 為 85nm。 CuBE— PLANP凍干針劑的載藥量為 ％ 177。 ％，包封率為 ％ 177。 ％。 體外釋藥研究 用 ％生理鹽水作為釋藥介質(zhì)，取 CuBEPLANP凍干針劑 5瓶，每瓶均用 l0 m1生理鹽水溶散后，定量轉(zhuǎn)移至透析袋中，然后懸置于盛有 50 m1生理鹽水的 100 m1錐形瓶中，塞緊，將錐形瓶放置于 37℃ 恒溫水溶振蕩器上，以 60r/min恒溫恒速振蕩，在實(shí)驗(yàn)后第 0. 、 、 、 、 、 l2 .0、 、 、． 、 、 、 h吸取釋藥介質(zhì) 5 m1，用高效液相色譜儀測(cè)定藥物含量．同時(shí)補(bǔ)充等量 5 ml生理鹽水，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積釋藥百分率。 CuBEPLANP凍干針劑體外累積釋藥曲線見圖 922。經(jīng)數(shù)據(jù)處理， CuBE－PLA－ NP凍干針劑的體外累積釋藥規(guī)律與 Higuchi方程擬合。表明 CuBE－ PLA－ NP在 0～ 24 h內(nèi)為突釋期，藥物釋放較快，這有利于微粒進(jìn)入體內(nèi)后在較短的時(shí)間內(nèi)使藥物達(dá)到有效的藥物濃度，而 24～ 168 h為緩釋期，這保證了在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)能維持藥物的有效濃度。 圖 922 CuBEPLANP凍干針劑體外累積釋藥曲線 靶向性研究 用高頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌株 U14 建立昆明小鼠頰癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型，用CuBEPLANP 和葫蘆素 BE(CuBE)分別進(jìn)行癌周黏膜下注射，注射后在 15 個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物，用高效液相色譜儀檢測(cè)血、心、肝、脾、肺、腎和頸淋巴結(jié)在不同時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度，用靶向指數(shù)、選擇性指數(shù)、靶向效率、相對(duì)靶向效率和藥物峰濃度比來全面評(píng)價(jià) CuBEPLANP 的頸淋巴結(jié)靶向性。結(jié)果顯示：CuBEPLANP 組各時(shí)間點(diǎn)頸淋巴結(jié) 內(nèi)藥物濃度遠(yuǎn)高于 CuBE 組，且藥物持續(xù)作用時(shí)間明顯長(zhǎng)于 CuBE 組； CuBEPLANP 組藥物對(duì)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的 5 個(gè)靶向指標(biāo)值均顯著高于 CuBE 組； CuBEPLANP 組各時(shí)間點(diǎn)血、心、肝、脾、肺、腎中藥物濃度顯著低于 CuBE 組。結(jié)論平均粒徑為 85 nm 的 CuBEPLANP 對(duì)口腔癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶具有良好的靶向性，既提高頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶內(nèi)藥物濃度和延長(zhǎng)藥物持續(xù)作用時(shí)間，同時(shí)也降低了血、心、肝、脾、肺、腎中藥物濃度。 急性毒性與皮膚刺激性研究 用不同劑量的 CuBEPLANP凍干針劑和葫蘆素 BE(CuBE)行小鼠皮下和尾靜脈注射，注射后常規(guī)飼養(yǎng) 2周，觀察用藥后小鼠的活動(dòng)度、攝食、毛發(fā)、大小便等情況，記錄小鼠的死亡數(shù)。結(jié)果 CuBE－ PLA－ NP39。凍干針劑皮下和靜脈注射的 LD50 值分別為 177。 mg/ kg和 5. 60 mg/kg177。 mg/kg； CuBE皮下和靜脈注射的 LD50值分別為 8. 63 mg/ kg177。 mg/ kg和 mg/kg177。 mg/kg。無論皮下和靜脈注射，當(dāng) CuBE和 CuBE－ PLA－ NP的注射劑量小于半數(shù)致死量(LD50 )時(shí)，用藥后 小鼠攝食、小便、毛發(fā)及活動(dòng)度均無變化，當(dāng) CuBE和 CuBE－PLA－ NP的劑量超過 LD50值時(shí)，存活小鼠的活動(dòng)度和毛發(fā)的光澤度有所下降，余無明顯變化。 大耳白兔 l0只，隨機(jī)分為 2組，每組 5只，用濃度為 ％的 CuBE、CuBEPLANP和 0. 9％生理鹽水各 1 ml行兔股四頭肌注射。注射后 48h放血處死動(dòng)物，縱形剖開注射部位肌肉，觀察股四頭肌變化。結(jié)果 CuBEPLANP凍干針劑局部肌肉注射后注射部位與對(duì)照部位肌肉無明顯差異， CuBE組中有 3只注射部位肌肉組織有充血現(xiàn)象，直徑在 。 實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明， CuBEPLANP凍干針劑對(duì)機(jī)體的毒副作用和局部刺激性小于 CuBE。 細(xì)胞生物學(xué) 用四唑鹽顯色法 (MTT法 )檢測(cè)用不同劑量的 CuBEPLANP和 CuBE在 1~8 d內(nèi) 8個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì) Tca8113和 BcaCD885的抗癌活性。從時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)曲線（圖923）可看出： CuBE對(duì) Tea8113和 BeaCD885的時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)主要在用藥后的前 5 d， 5 d后其時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)增加很小，但 CuBEPLANP由于是緩釋劑，它對(duì) Tea8113和 BeaCD885的時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)一直持 續(xù)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)的 8 d，但在相同濃度的相同時(shí)間點(diǎn)，其 IC50大于 CuBE的 IC50。 第 5天時(shí)， CuBE和 CuBE— PLA— NP對(duì) Tea8113和 BcaCD885的劑量依賴性殺傷效應(yīng)曲線見圖 924。從圖中可看出， CuBE和 CuBE－ PLA－ NP對(duì) Tea811BcaCD885均有高度敏感的殺傷活性，且這種殺傷作用呈劑量依賴性，即藥物濃度越大，殺傷作用越強(qiáng)。 圖 923 CuBE和 CuBEPLANP對(duì) Tea8ll3和 BcaCD885的 時(shí)間依賴性殺傷曲線 圖 924 CuBE和 CuBEPLANP對(duì) Tea8113和 BeaCD885的 劑量依賴性殺傷效應(yīng)曲線 雄黃 雄黃為硫化物類礦物，早在我國(guó)第一部藥物學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》上就有記載，應(yīng)用歷史十分悠久，主要用于祛風(fēng)除濕，解毒殺蟲，入丸散或外用。近年來的研究表明雄黃可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞 DNA的合成，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能等多種因素發(fā)揮抗腫瘤作用，顯示出廣闊的應(yīng)用前景。雄黃的主要成分為二硫化二砷，難溶于水，服用方法一般是將其研磨成粉末入藥，在胃腸道不易分解，僅極少部分被吸收。歷來雄黃的臨床運(yùn)用都 是以水飛的形式，工業(yè)生產(chǎn)速度慢，且顆粒較大，吸收度小。華中科技大學(xué)的謝長(zhǎng)生等 [34]發(fā)明了納米雄黃的制備方法，目的在于提高中藥雄黃的藥效，以及雄黃顆粒在納米狀態(tài)的更高的抗腫瘤作用。 納米雄黃的制備方法有： 方法一：將 － 氛的球磨罐中，同時(shí)裝入 － 20kg的磨球，使球與雄黃粉比保持在（ 5:1）－（ 15:1），控制高能球磨機(jī)的轉(zhuǎn)速和時(shí)間，使其在 200－ 400r/min(轉(zhuǎn) /分 )和 2－ 60h范圍，溫度控制在－ 50~100℃，以獲取平均粒徑 小于 100nm的雄黃粉末。 方法二：采用超音速氣流粉碎機(jī)，機(jī)內(nèi)操作氣氛為惰性氣體，溫度控制在－50~100℃。 兩種方法所用惰性氣體為氮?dú)夂投趸?。?jīng)電子顯微鏡觀察，兩種方法制備的雄黃粉末粒徑全部達(dá)到納米級(jí)（ 1－ 100nm）。 王曉波等 [73]用家兔做了納米雄黃的藥代動(dòng)力學(xué)研究。兩組家兔分別單劑量口服 50mg，比較納米級(jí)雄黃粉體和傳統(tǒng)雄黃在兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 。結(jié)果表明，納米級(jí)雄黃粉體與傳統(tǒng)雄黃比較，其藥代動(dòng)力學(xué)發(fā)生顯著變化，吸收相增大而消除相減小，這為雄黃納米化研究提供了有力依據(jù)。 徐輝碧等 [74]以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系 ECV 304作為研究對(duì)象，開展了中藥雄黃對(duì)其增殖作用影響的尺寸效應(yīng)研究，觀察了不同粒徑 ( 100nm, 150nm, 200nm, 500nm)的雄黃顆粒對(duì) ECV－ 304細(xì)胞存活率、凋亡的影響。結(jié)果表明，對(duì)應(yīng)粒徑 100－ 500nm的雄黃，凋亡率分別為 %, %,%, %，其藥效作用呈現(xiàn)明顯的尺寸效應(yīng)，納米顆粒表現(xiàn)出尤為突出的生物效應(yīng)。 葉寒青等 [75]比較了納米雄黃與普通原料雄黃對(duì)白血病早幼粒細(xì)胞 HL－ 60的影響。結(jié)果顯示，納米雄 黃能顯著降低 HL－ 60細(xì)胞的成活率并產(chǎn)生典型的細(xì)胞凋亡，包括細(xì)胞形態(tài)改變、 DNA梯帶形成、具有 subG1phase的細(xì)胞數(shù)量增加，而相同濃度的原料雄黃未誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。此外，納米雄黃有顯著的細(xì)胞膜毒性，能加強(qiáng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，促進(jìn)乳酸脫氫酶的釋放和減少細(xì)胞膜的流動(dòng)性，而原料雄黃 j僅僅減小細(xì)胞膜的流動(dòng)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，納米雄黃可能是通過提高脂質(zhì)過氧化和減小細(xì)胞膜的通透性來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的。 黃連 中藥黃連為毛茛科植物黃連 Coptis chinensis Franch、三角葉黃連 Coptis deltoiden et Hsiao或云連 Coptis teeta ，藥用歷史久遠(yuǎn)，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。該藥味苦性寒，歸心、肝、腎、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效，其主要有效成分是以鹽酸小檗堿為代表的生物堿 [76]。黃連的臨床應(yīng)用非常廣泛，在含黃連的常用中成藥中，有許多是以黃連原藥粉直接入藥，如香連丸、化毒散、化痔靈片等。黃連中所含的生物堿為水難溶性，以常規(guī)粉末入藥生物利用度低，藥效難以得到充分得發(fā)揮。北京中醫(yī)藥大學(xué)丁志平等 [6， 7， 77]對(duì)黃連納米粉體進(jìn)行了研究 。 納米黃連的制備及體外溶出度研究 取一定量的黃連原料用 FFC230粉碎機(jī)粉碎，過 100 目篩得到黃連的常規(guī)粉體樣品。取部分黃連常規(guī)粉體用 TC10超音速氣流粉碎分級(jí)機(jī)粉碎，得到黃連的超微粉體樣品。再取部分黃連常規(guī)粉體用高速離心氣流沖擊粉碎機(jī)粉碎，經(jīng)離心式空氣分級(jí)機(jī)分級(jí)，得到黃連的納米粉體樣品。經(jīng)測(cè)定黃連常規(guī)粉體、超微粉體和納米粉體的粒徑 D50分別為 、 、 ， D90分別為 、 nm。 分別進(jìn)行黃連常規(guī)粉體、超微粉體和納米粉體的體外溶 出度試驗(yàn)，結(jié)果溶出4h時(shí)黃連納米粉體和超微粉體的小檗堿溶出量比常規(guī)粉體分別增加 %和%。不同粒徑黃連粉體中小檗堿體外溶出速度曲線見圖 925。從圖中可以看出，隨著黃連粉體粒徑的減小，小檗堿的溶出速率加快，黃連超微粉體和納米粉體中小檗堿溶出速率比常規(guī)粉體大，而納米粉體比超微粉體表現(xiàn)得更加明顯。這是因?yàn)殡S著黃連粉顆粒的超微化和納米化，粒徑變小，比表面積增大，增大了和溶出介質(zhì)間的有效接觸面積，同時(shí)縮短了溶劑進(jìn)入顆粒中心的距離，從而使得小檗堿的的溶出