【導讀】化方法、結構鑒定、生物合成途徑。變其藥理化學屬性的加工品。普遍存在于動物、植物及微生物中。這類化合物結構富于變化，多數(shù)具有明顯的生理活性。如生物堿、黃酮類、苷（甙）類、醌類、萜類、揮。發(fā)油、苯丙素類、甾體類、鞣質(zhì)、樹脂、色素等。利用超聲波的空化作用，破壞細胞壁結構，使其在瞬間破裂，植物細胞內(nèi)的成分得以釋放，直接進入溶劑，擴散性，對所需萃取的物質(zhì)組織有較好的滲透性。從而提高了溶質(zhì)進入超臨界流體

　　

【正文】 應用：除水提液中的酸、堿性成分和無機離子；酸性、中性、粘多糖的分離 。（分離酸性多糖用相同 pH 不同離子強度的緩沖液洗脫，分離中性多糖用不同濃度硼酸溶液洗脫） 常用 離子交換樹脂 ① 離子交換纖維素樹脂 陽離子型： CMCellulose， PCellulose， SECellulose 等 陰離子型： DEAE Cellulose， ECTEOLA Cellulose 等 ② 硼酸處理的強堿性陰離子交換樹脂 （ 7） 凝膠柱色譜 可將多糖按照分子大小和形狀的不同分離開 ，但不適于粘多糖分離 。 常用商品名稱及型號：葡聚糖凝膠（ SephadexG） 、 瓊脂糖凝膠（ Sepharose， BioGel A） 、 聚丙烯酰胺凝膠（ BioGel P） 、 羥丙基交聯(lián)葡聚糖凝膠（ Sephadex LH20， 親脂性，可在有機溶劑中進行分離的分子篩） 。除 Sephadex LH 外，均在H2O 中進行 ，且吸水越多孔徑越大 。 洗脫溶劑的選擇： 分離中性物質(zhì) —— 水及電解質(zhì)溶液（酸、堿、鹽溶液及緩沖液， 離子強度 ≥ ） 阻滯較大的組分 —— 水 +有機溶液（水 甲醇、水 乙醇、水 丙酮等） （ 8） 季銨氫氧化物沉淀法 季銨氫氧化物是一類乳化劑，常用于酸性多糖的分離。 pH＜ 9 時，可與酸性多糖形成沉淀 ； 調(diào)高 pH 或加硼砂緩沖液，也可使中性糖沉淀 。 利用其在酸性、中性、微堿性、堿性中的分級沉淀可分離多糖 。 （ 9） 分級沉淀或分級溶解法 在糖的水溶液中，逐步加入乙醇，即逐漸增大 醇 濃度，可得到各部分的沉淀物。 適于分離溶解度相差較大的多糖。 為使多糖穩(wěn)定，多糖通常在 pH=7 時進行 ； 酸性多糖在 pH=2~4 時進行 ，且 為防酸水解苷 鍵，操作宜迅速。 （ 10） 蛋白質(zhì)除去法 用分級沉淀法得到的多糖，常夾雜有較多的蛋白質(zhì)，通常選擇能使蛋白質(zhì)沉淀而使多糖不沉淀的試劑來處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。 為 避免多糖降解 ，應注意 處理時間要短，溫度要低。 三氟三氯乙烷法和 Sevag 法（用氯仿 :戊醇或丁醇 =5:1 混合） 處理， 在避免降解上有較好效果。 糖的鑒定 （ 1） 紙層析 （常用） 展開系統(tǒng)：常用水飽和的有機溶劑展開。 顯色劑：鄰苯二甲酸 苯胺、 Molish 試劑、硝酸銀試劑 （ 使還原糖顯棕黑色 ） 、三苯四氮唑鹽試劑（單糖和還原性低聚糖呈紅色）、 3,5二羥 基甲苯鹽酸試劑（酮糖呈紅色）等。 （ 2） 薄層層析 可用（硼酸液或 無機鹽） +硅膠 → 制板 硼酸與無機鹽制板的特點：增加糖在固定相中的溶解度，使硅膠薄層吸附能力下降，利于斑點集中，又可增加承載量。 吸附劑：硅膠 顯色劑：除紙層析應用的以外，還可用 H2SO4/H2O 或乙醇液 、 茴香醛 硫酸試劑 、 苯胺 二苯胺磷酸試劑等 （ 3） 氣相色譜 將糖制備成三甲基硅醚 化 、乙?；蛉阴；苌?，增加其揮發(fā)性； 將醛糖用 NaBH4 還原成多元醇（避免形成端基異構體）制成乙?；锘蛉阴；?。 操作簡單，分辨率高。 （ 4） 液相色譜 填充材料 ： 化學修飾的硅膠 優(yōu)點：不必制備成衍生物 ； 適合分析對熱不穩(wěn)定、不揮發(fā)的低聚糖和多糖。 分析單糖和低聚糖，其靈敏度不及氣相層析。 （ 5） 離子交換層析 糖的硼酸絡合物 —— 可進行離子交換層析 （ 四硼酸鉀的緩沖溶液 洗脫） 不必制成衍生物，而直接用水溶液進行分離 （ 糖自動分析儀 ） 1 糖鏈結構的測定 主要解決的問題 —— 單糖的組成、糖之間的連接位置和順序、苷鍵構型 （ 1） 單糖的組成 低聚糖、多糖的結構分析，首先要了解由哪些單糖所組成，各種單糖之間的比例如何。 一般是將苷鍵全水解，用 PC 檢出單糖的種類，經(jīng)顯色后用 薄層掃描儀求得各種糖的分子比， 也可用 GC 或 HPLC對單糖定性定量。 （ 2） 單糖之間連接位置的決定 ① 將糖鏈全甲基化→水解→甲基化單糖的定性和定量（ GC） （甲基化單糖中游離 OH 的部位就是連接位置） ② 13CNMR 測定：主要歸屬各碳信號，以確定產(chǎn)生苷化位移的碳。 ③ 利用 2DNMR，如 HMBC 譜中的遠程相關關系，確定糖與糖或糖與苷元的連接位置。 苷化位移（ glycosidation shift） ：糖與苷元成苷后，苷元的 αC、 βC 和糖的端基碳的化學位移值均會發(fā)生改變，這種改變稱為苷化位移。苷化位 移值與苷元結構有關，與糖的種類關系不大。 （ 3） 糖鏈連接順序的決定 ① 緩和水解法 （部分水解） ：將糖鏈水解成較小的片段，然后分析這些低聚糖的連接順序。 ② 質(zhì)譜分析。 ③ 利用 2DNMR，如 HMBC 譜中的遠程相關關系 （ 4） 苷鍵構型的決定 ① 分子旋光差（ Klyne 法） ② 酶催化水解方法 ③ 1HNMR 判斷糖苷鍵的相對構型 ： 根據(jù)端基質(zhì)子信號的個數(shù)和化學位移值，可推測糖的個數(shù)、種類、糖與糖以及糖與苷元的連接位置 。 端基質(zhì)子 —— ～ ppm 其它質(zhì)子 —— ~ ppm 甲基五碳糖的 甲基質(zhì)子 —— ppm 左右 質(zhì)子鄰位偶合常數(shù)與雙面角有關，通過 C1H 與 C2H 的偶合常數(shù)可判斷苷鍵的構型。 雙面角為 90o 時，偶合常數(shù)為0； 90～ 180o 時，隨角度的增大偶合常數(shù)變大 ； 0～ 90o 時，隨角度的變小偶合常數(shù)變大 。 aa： J6~8Hz； ea： J3~4Hz。 用 1HNMR 可判斷一些糖苷鍵的相對構型，但還有一些糖由于其結構上的原因，而無法判斷。 ④ 13CNMR 判斷糖苷鍵的相對構型：端基碳的化學位移值 、 端基碳與端基質(zhì)子間的偶合常數(shù) ： 甲基碳 —— δ18 左右 CH2OH—— δ62 左右 CHOH—— δ78 左右 端基碳 —— δ100 左右 ， αL、 βD 通常大于 100， αD、 βL 通常小于 100。 此外， 吡喃糖苷中 ， 端基質(zhì)子處于橫鍵時， JCH≈ 170~175Hz； 處于豎鍵時， JCH≈ 160~165Hz。 （ 5） 苷化位移 可用于 推測糖與苷元、糖與糖的連接位置；推測苷元被苷化碳的絕對構型。 苷類 αC βC 端基碳 脂鏈苷 向低場移動（ δ↑） 向高場移動（ δ↓） 向低場移動（ δ↑） 酯苷 向高場移動（ δ↓） 向低 場移動（ δ↑） 向高場移動（ δ↓） 酚苷 向高場移動（ δ↓） 向低 場移動（ δ↑） 向低場移動（ δ↑） 脂環(huán)苷 β 位無取代或取代后與端基碳構型相同時，與脂鏈苷類似；取代后構型不同時則較復雜 方法 單糖組成 氧環(huán)大小 連接位置 連接順序 苷鍵構型 酸催化水解法 √ √ 酸催化甲醇解法 √ 乙酰解 法 √ 堿水解法 √ 酶水解法 √ 氧化開裂法 √ √ 甲基化法 √ 質(zhì)譜 √ Klyne 法 √ NMR √ √ √ 黃酮類化合物 黃酮類化合物 （ Flavonoids） 基本母核為 2苯基色 原酮類化合物。現(xiàn)泛指兩個具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子連成的一系列化合物。 1 39。2 39。 3 39。4 39。5 39。6 39。OO123456782苯基色原酮 139。239。 339。439。539。639。O1 2345678A BCC6C3C6 苯環(huán)上常見的取代基： OH， CH3O， OCH2O，萜類側鏈等。 多存在于高等植物及羊齒植物中，苔蘚 植物中為數(shù)不多 ， 藻類、微生物、細菌中未發(fā)現(xiàn)。 對植物的生長、發(fā)育、開花、結果及抵御異物的侵入起重要作用。 木質(zhì)部堅硬組織中多為游離態(tài) ； 植物的花、葉、果 實等組織中多為苷類。 黃酮類 主要結構類型 根據(jù)中央三碳鏈的氧化程度、 B 環(huán)連接位置、三碳鏈是否構成環(huán)狀等特點，可將主要的天然黃酮類化合物分為： 黃酮和黃酮醇類 、 二氫黃酮和二氫黃酮醇類 、 雙黃酮類 、 異黃酮和二氫異黃酮類 、 查耳酮和二氫查耳酮類 、 花色素類 、 黃烷醇類 、 其他 （如 山酮類 、 生物堿型黃酮 、橙酮類） 。 （ 1）黃酮類化合物 7 位上多有羥基； （ 2）二氫黃酮常與相應黃酮類共存于同一植物內(nèi)； （ 3）雙黃酮類包括 3’,8’’雙芹菜素類、 8,8’雙芹菜素類和雙苯醚類，常見于除松科外的的裸子植物中； （ 4）黃烷醇類 常多分子聚合成鞣質(zhì)（又稱原花青素） ； （ 5）黃烷 3醇類 如 兒茶素類， 黃烷 3,4醇類又稱無色花色素類； （ 6） 2’酚羥基查耳酮酸性下可環(huán)合為二氫黃酮，堿性下則開環(huán) ： OOH +O H O HO1 39。2 39。3 39。4 39。5 39。6 39。12 3456 名 稱 基本結構 名 稱 基本結構 黃酮類 fl avo nes OO 異黃酮類 isof la vone s OO 黃酮醇類 fl avo nol s OOO H 二氫異黃酮類 isof la vano nes OO 二氫黃酮類 fl ava none s OO 查耳酮類 c hal c one s O HO 二氫黃酮醇類 fl ava nanol s OOO H 二氫查耳酮類 dih y dr o cha lco nes O HO 黃烷 3 醇類 fl ava n 3 ol s OO H 花色素類 a ntho cy a nid ins OO H+ 黃烷 3,4 二醇類 fl ava n 3, 4 dio ls OO HO H 高異黃酮類 ho moisof lavon es OO 雙苯吡酮類( 酮類 ) xant hone s OO 橙酮類 ( 噢 類 ) au r on es OOC H 黃酮苷的結構特點 （ 1） 組成黃酮苷的糖類 單糖類 ： D葡萄糖 、 D半乳糖 、 D木糖 、 L鼠李糖 、 L阿拉伯糖 、 D葡萄糖醛酸等 。 雙糖類 ： 槐糖 （ glcβ1→ 2glc）、 龍膽二糖 （ glcβ1→ 6glc）、 蕓香糖 （ rhaα1→ 6glc）、 新橙皮糖 （ rhaα1→ 2glc）、 刺槐二糖 （ rhaα1→ 6gal） 等 。 三糖類 ： 龍膽三糖 （ glcβ1→ 6glcα1→ 2βfru）、 槐三糖 （ glcβ1→ 2glcβ1→ 2glc） 等 . ?；穷?： 2乙酰葡萄糖 、 咖啡酰基葡萄糖等 。 （ 2） 糖的連接位置 O糖苷 ： 與苷元的結構類型有關 ， 如黃酮醇類 常形成 3’、 4’位的單糖苷或 3, 3,4’、 7,4’的雙糖 鏈 苷。 C糖苷 ： 6 位或 8 位 生物合成 黃酮類的基本骨架是由桂皮酸途徑（ B 環(huán) 及三碳 ） 與 AAMA 途徑（ A 環(huán)）生物合成的。 首先合成得到查耳酮，查 耳酮異構化等得到二氫黃酮及異黃酮，二氫黃酮再生成其他黃酮化合物。 生物活性 （ 1） 對心血管系統(tǒng)的作用 降低血管脆性及異常的通透性 ， 如蘆丁 、 橙皮苷 、 d兒茶素等 。 擴 張 冠 脈， 如蘆丁 、 槲皮素 、 葛根素 、 立可定等 。 降低血脂及膽固醇 ，如銀杏雙黃酮。 降壓 ，如蘆丁。 抑制血小板凝集及血栓形成 ， 如槲皮素等 。 （ 2） 抗肝臟毒作用 水飛薊素 、 異水飛薊素 、 次水飛薊素等治療急、慢性肝炎 、 肝硬化及多種中毒性肝損傷 。 (+)兒茶素 ： 抗肝臟毒藥物 ， 對脂肪肝及因半乳糖胺或 CCl4 等引起的中毒性肝損傷有一定效果 。 （ 3） 抗炎作用 如蘆丁 、 二氫槲皮素等 。 （ 4） 雌性激素樣作用 如大豆素 、染料木素等異黃酮類。 （ 5） 抗菌及抗病毒作用 抗菌作用 ： 木犀草素 、 黃芩苷 、 黃芩素等 。 抗病毒作用 ： 槲皮素 、 桑色素 、 二氫槲皮素 、 山柰酚等 。 （ 6） 瀉下作用 如營實甙 A （ 7） 解痙作用 如 異甘草素 、 大豆素 可解除平滑肌痙攣， 大豆 苷、 葛根黃 素等可 緩解高血壓患者的頭痛等癥狀 。 （ 8） 其他的生理作用 （如止咳、祛痰、平喘） 理化性質(zhì) （ 1） 形態(tài) 多為結晶性固體 ， 少數(shù)如黃酮苷類為無定型粉末 。 （ 2） 旋光性 游離黃酮類化合物中 ， 二氫黃酮、二氫黃酮醇、二氫異黃酮、黃 烷及黃烷醇有旋光性 。 苷類均具有旋光性 ， 多為左旋體 （糖苷類由于存在糖基，故均有旋光性） （