【正文】 巴樣 組織（ MALT）淋巴瘤等疾病密切相關(guān) 。 世界衛(wèi)生組織 (WHO)已將其列為一類致癌因子； Marshall與 Warren因?qū)τ拈T螺桿菌的開創(chuàng)性研究而獲得2022年度諾貝爾生理學(xué) /醫(yī)學(xué)獎。 幽門螺桿菌 helicobacter pylori, Hp ? 1982， Warren 和Marshall分離出“ unidentified curved bacilli” ? 1984， Langenberg et al命名為“ campylobacterlike anism,CLO” ? 1988， Thompson et al發(fā)現(xiàn)其 16srRNA序列分析相似于“ Wolinella屬” ? 1989， Goodwin et al 發(fā)現(xiàn) 5個分類學(xué)特征，命名為“ Hp”。 ? 1997， Tomb et al完成了Hp 26 695菌株的基因組測序工作。 ? 1999， Alm et al 完成了Hp J99 菌株的基因組測序工作。 幽門螺桿菌 ? 特征 : G()桿菌， S形，長 4?m，寬 ?m， 26條鞭毛， 微需氧菌 ， 37℃ , ～ ? 幽門螺桿菌能在強酸環(huán)境中存活生長，而且能在 胃 黏膜深層繁殖 ? 流行病學(xué)：糞 口，或口 口傳播。 ? 自然人群中的感染率隨年齡增長而上升 ? HP感染 自愈率接近零 在各種胃病中的檢出率 ? 慢性胃炎 53%～ 95% ? 胃潰瘍病 60%～ 100%，平均 84% ? 十二指腸潰瘍 90%～ 100%，平均 95% ? 胃癌 43%～ 78% ? 胃淋巴瘤（尤其是 MALT） 90%以上 致病機理 ? 定植 (colonization)于胃粘膜上皮表面和胃粘液的底層 ? 損害胃粘膜屏障 ： H＋ 反向彌散 細胞毒素：空泡毒素 (Vac)A、空泡形成相關(guān)蛋白(Cag)A 尿素酶：氨降低粘蛋白含量，毒性作用 ? 炎癥反應(yīng) ：直接刺激免疫細胞，直接 刺激胃粘膜上皮產(chǎn)生細胞因子。 ? 胃泌素關(guān)聯(lián)假說 ：增加胃泌素釋放，使胃酸分泌和胃蛋白酶活性增加。 Helicobacter pylori — the bacterium causing peptic ulcer disease 幽門螺旋桿菌感染胃竇 十二指腸 胃竇 幽門 胃體 炎性細胞 潰瘍 胃炎可能導(dǎo)致 十二指腸或 胃潰瘍，引起胃出血、胃 穿孔等嚴(yán)重的并發(fā)癥。 目前有關(guān) Hp的研究方向 ? 遺傳變異的研究 ? 毒力因子的確定 ? 免疫靶點和診斷靶點的篩選 ? 生理學(xué)研究 ? 耐藥機制及細菌分型 ? 有關(guān) Hp的功能蛋白質(zhì)組研究 Hp基因組及蛋白質(zhì)組信息的 部分相關(guān)網(wǎng)站 ? ? scripts/CMR2/?database=gHp ? scripts/CMR2/?database=ntHp01 ? ? ? H. pylori感染人胃癌細胞株 AGS(ATCC Number: CRL1739)的蛋白組學(xué)研究 Molecular and cellular proteomics, 2022, 5(4): 702～ 13. ? Chan等通過 H. pylori 按 . 100 (multiplicity of infection100，感染復(fù)數(shù) 100)的量感染人胃癌細胞株 AGS (ATCC Number: CRL1739) 建立 H. pylori 體外感染模型 。 ? 感染前后蛋白質(zhì)表達譜的變化通過 2D DIGE/MS策略加以鑒定。 ? 在亞細胞水平考查了感染前后功能蛋白質(zhì)組的變化情況 。 ? 研究鑒定出 28種差異蛋白：屬于蛋白合成與折疊相關(guān)蛋白、細胞骨架蛋白、代謝酶、轉(zhuǎn)錄和翻譯相關(guān)蛋白、血管形成 /轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白或其它類（氧調(diào)蛋白和癌蛋白）。 Molecular and cellular proteomics, 2022, 5(4): 702～ 13 MOI :multiplicity of infection，感染復(fù)數(shù)。傳統(tǒng)的 MOI含義是感染時噬菌體與細菌的數(shù)量比值，即平均每個細菌感染噬菌體的數(shù)量。噬菌體的數(shù)量單位為 pfu（ plaque forming unit, 空斑形成單位）。一般認(rèn)為 MOI是一個比值，沒有單位，其實其隱含的單位是 pfu number/cell。后來 MOI被普遍用于病毒感染細胞的研究中，含義是感染時病毒與細胞數(shù)量的比值。 ? 層粘連蛋白 γ1鏈前體（ laminin gamma1 chain precursor） ? 含纈酪肽蛋白 (valosincontaining protein,VCP) ? 熱休克蛋白 70（ heat shock protein, HSP 70） ? 線粒體基質(zhì)蛋白 P1（ mitochondrial matrix protein pl， MMPP1） ? FK506結(jié)合蛋白 4（ FK506 binding proteins 4,FKBPs 4） ? T復(fù)合物蛋白 1（ TCP1） ? 烯醇化酶 α（ αenolase） ? 1433β Immunohistochemical staining VCP， MMPP TCP αenolase and 1433β可能通過介導(dǎo)抗凋亡和增殖反應(yīng)而在 H. pylori誘導(dǎo)的胃癌發(fā)生中起重要作用。 Molecular and cellular proteomics, 2022, 5(4): 702～ 13 Western blotting identification (環(huán)周正常組織為對照 ) H. pylori感染 AGS細胞中的胞質(zhì)溶膠的 2D DIGE分析結(jié)果。 H. pylori感染 AGS細胞中的胞質(zhì)溶膠裂解物以 Cy3標(biāo)記（綠色），未受感染細胞中的胞質(zhì)溶膠裂解物以 Cy5標(biāo)記（紅色），合并的內(nèi)標(biāo)以 Cy2標(biāo)記。以 13cm IPG 、 pH 4–7的膠條分離后，再以 SDSPAGE (10%)分離。 A， H. pylori感染（綠色）與未感染（紅色）樣品分析結(jié)果的合成圖。 B，一張典型的 2DE 圖象，所顯現(xiàn)的蛋白質(zhì)點表明 H. pylori感染后蛋白表達的改變。 Molecular and cellular proteomics, 2022, 5(4): 702～ 13 層粘膜蛋白 γ1鏈前體 含纈酪肽蛋白 熱休克蛋白 70 T復(fù)合物蛋白 1 線粒體 基質(zhì)蛋白 P1 FK506 結(jié)合蛋白 4 α 烯醇化酶 1433β 在 . 100的條件下所 獲得的經(jīng) H. pylori感染 24 h的 AGS細胞與未受 感染細胞中，八種蛋白 的免疫雜交和三維熒光 強度的比較圖。 Molecular and cellular proteomics, 2022, 5(4): 702～ 13 含纈酪肽蛋白 T復(fù)合物蛋白 1 線粒體 基質(zhì)蛋白 P1 1433β α 烯醇化酶 Normal Tumor 對正常胃組織和胃癌組織中含 纈酪肽蛋白、 T復(fù)合物蛋白 線粒體基質(zhì)蛋白 P α烯醇化 酶和 1433β等五種蛋白的免 疫組化研究結(jié)果（ 400x）。 這五種蛋白質(zhì)在胃癌組織中的 表達明顯增高。 Molecular and cellular proteomics, 2022, 5(4): 702～ 13 Samples： Helicobacter pylori 26695 III、腸道干細胞 的蛋白質(zhì)組學(xué)研究 國內(nèi)腸道疾病常見 ,腸道黏膜 ,甚至黏膜下肌 層的結(jié)構(gòu)和功能受到破壞 ,通過干細胞技術(shù)和組 織工程技術(shù)定向誘導(dǎo)腸道干細胞使其分化為特定 的細胞以替代功能障礙的細胞或組織缺損 ,這可 能是治療腸道疾病的有效方法 Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro Nature 腸道干細胞（ intestinal stem cells ， SCs ） 位于腸黏膜隱窩基底部，即基底隱窩是腸道干細胞的細胞庫。正常情況下，位于隱窩基底部的腸道干細胞不斷向隱窩頂部 (腸腔方向 )遷移，整個遷移過程大約 35d，在遷移過程中腸道干細胞分化形成不同的腸黏膜細胞。 果蠅的腸道切片（熒光顯微鏡下）： 綠色、擁有藍綠色細胞核的上皮細胞； 由深藍色細胞核而識別的腸道干細胞。 Huaqi Jiang, Marc Grenley, MariaJose Bravo, Rachel Blumhagen und Bruce Edgar: EGFR/Ras/MAPK signaling mediates adult midgut epithelial homeostasis and regeneration in Drosophila. Cell Stem Cell 2022 干細胞成功修復(fù)受損的腸粘膜 干細胞通過動脈介入的方法進入結(jié)腸粘膜，通過分泌各種細胞活性因子，修復(fù)病損粘膜上皮細胞。最新報道指出：干細胞成功修復(fù)受損的腸粘膜。 Lgr5 Ascl2 Olfm4 (Barker et al., 2022。Van der Flier et al., 2022) CBC stem cell markers: ?Located at the crypt base ?Lrig1, an ErbB negative regulator, marks quiescent intestinal stem cells ?Lrig1 and Lgr5 transcriptome profiles are distinct ?Functionally null Lrig1 mice develop duodenal adenomas The panErbB negative regulator Lrig1 is an intestinal stem cell marker that functions as a tumor suppressor. Cell 2022 Mar 30。149(1):14658 VanderbiltIngram Cancer center IV、 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在其 他消化系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用 肝硬化 藥物性肝臟損傷 炎癥性腸病 急性胰腺炎 脂肪肝 其他 早期新標(biāo)記物的尋找 病因及機理的研究 新藥靶的發(fā)現(xiàn) 總 結(jié) ? 我國心血管疾病已居死因構(gòu)成首位。心血管疾病蛋白質(zhì)組學(xué)研究工作的開展將有助于 闡明心血管疾病發(fā)病的分子機制和篩選特異的生物標(biāo)志物。 ? 脂肪組織還是一種代謝十分活躍、功能非常復(fù)雜的內(nèi)分泌和旁分泌器官，從蛋白質(zhì)組學(xué)層面開展研究，對認(rèn)識脂肪組織的內(nèi)分泌功能具有重要意義。 ? 幽門螺旋桿菌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究有助于進一步認(rèn)識 Hp的致病機理和耐藥機制，為 Hp分型提供新的依據(jù)。 ?目前研究較多停留在蛋白質(zhì)表達模式的層次，對蛋白質(zhì)功能研究較少，但蛋白質(zhì)組學(xué)研究的最終目的是闡明蛋白質(zhì)的功能。另外蛋白質(zhì)的翻譯后修飾如磷酸化、甲基化和糖基化對蛋白質(zhì)功能有重要影響，如蛋白激酶的活性與其磷酸化程度密切相關(guān)，因而對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究是了解蛋白質(zhì)功能的重要途徑，將是未來研究的重點。 ?蛋白質(zhì)組學(xué)作為連接基因、蛋白質(zhì)和疾病的紐帶，盡管歷史不長，心血管領(lǐng)域和消化疾病研究也剛剛起步，但其發(fā)展前景卻不可否認(rèn)，隨著蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)的日益完善，它必將為疾病的研究和防治開辟新的天地 復(fù)習(xí)題 ? 中國心血管病危險因素有哪些？ ? 如何研究 自噬？ 主要談?wù)勗趺醋C明細胞發(fā)生了 自噬，即自噬的判斷標(biāo)準(zhǔn)和各種研究自噬的方 法及局限性 ? 為什么要開展 脂肪組織分泌蛋白質(zhì)組的研究？ ? 開展 幽門螺旋桿菌蛋白質(zhì)組學(xué)研究的目標(biāo)是什么？ Thanks!!!