【正文】 敷前觀察及記錄紅斑、水腫、色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及其發(fā)生時(shí)間及消退時(shí)間，并對(duì)紅斑及水腫進(jìn)行評(píng)分。末次貼敷后，在去除藥物后 3060分鐘， 2 48和72小時(shí)肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況。持久性和中度以上損傷的觀察同單次給藥。 ④ 結(jié)果評(píng)價(jià)：?jiǎn)未谓o藥計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各組受試物及賦形劑皮膚反應(yīng)積分平均分值。將受試側(cè)皮膚反應(yīng)平均分值減去賦形劑皮膚平均分值得到原發(fā)性刺激指數(shù)，按表進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。多次給藥首先計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各組原發(fā)性刺激積分均值，然后計(jì)算觀察期限內(nèi)每天每只動(dòng)物刺激積分均值即累積刺激指數(shù)，進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。 紅斑 水腫 刺激反應(yīng) 分值 刺激反應(yīng) 分值 無紅斑 0 無水腫 0 輕度紅斑（勉強(qiáng)可見） 1 輕度水腫（勉強(qiáng)可見） 1 中度紅斑（明顯可見） 2 中度水腫（明顯隆起） 2 重度紅斑 3 重度水腫（皮膚隆起 1mm，輪廓清楚） 3 紫紅色紅斑到輕度焦痂形成 4 嚴(yán)重水腫（皮膚隆起 1mm以上并有擴(kuò)大） 4 最高總分值 8 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 分值 評(píng)價(jià) 無刺激性 輕度刺激性 中度刺激性 強(qiáng)刺激性 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 4） 試驗(yàn)報(bào)告 符合 GLP實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范，內(nèi)容包括：受試物名稱、理化性狀、配制方法和用量；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別、體重和來源（注明動(dòng)物合格證號(hào)和動(dòng)物級(jí)別）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境（包括飼料來源、室溫、濕度、照明、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施合格證號(hào)）；詳細(xì)的試驗(yàn)操作；每只動(dòng)物在每一觀察時(shí)間點(diǎn)的皮膚反應(yīng)積分；具體描述其它毒性反應(yīng)；試驗(yàn)結(jié)論等。 5） 試驗(yàn)結(jié)果的解釋 該試驗(yàn)系統(tǒng)比人皮膚刺激反應(yīng)敏感，刺激反應(yīng)陰性大多可確定為無刺激性，陽性反應(yīng)要排除假陽性。除非受試物有大范圍或長時(shí)間的使用，否則輕度刺激性可不予重視。 4. 注射給藥部位刺激性試驗(yàn) 炎癥、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。 1）試驗(yàn)方法 試驗(yàn)動(dòng)物：家兔，每組（單次給藥、多次給藥）不少于 3只。設(shè)生理鹽水對(duì)照，用同體左右側(cè)自身對(duì)比。 給藥方法：途徑與臨床使用情況一致，可選用耳緣靜脈，耳中心動(dòng)脈、股和背部肌肉，側(cè)胸壁皮下組織等。給藥容積和速率應(yīng)根據(jù)動(dòng)物情況進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。給藥期限應(yīng)根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不超過 7天。 動(dòng)物觀察：?jiǎn)未谓o藥，在給藥后 4896小時(shí)對(duì)動(dòng)物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察；多次給藥，每天給藥前以及最后一次給藥后 4896小時(shí)對(duì)動(dòng)物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察。觀察期結(jié)束時(shí)應(yīng)對(duì)部分動(dòng)物進(jìn)行病理學(xué)檢查。留下的動(dòng)物繼續(xù)觀察 14－21天再進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以了解刺激性反應(yīng)的可逆程度。 2）結(jié)果評(píng)價(jià)：根據(jù)肉眼觀察和病理檢查結(jié)果，對(duì)受試物進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。 3）試驗(yàn)報(bào)告 試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)符合 GLP實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范，內(nèi)容包括：受試物名稱、理化性狀、配制方法和用量；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別、體重和來源（注明動(dòng)物合格證號(hào)和動(dòng)物級(jí)別）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境（包括飼料來源、室溫、濕度、照明、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施合格證號(hào)）；詳細(xì)的試驗(yàn)操作；每只動(dòng)物在每一觀察時(shí)間點(diǎn)的刺激反應(yīng)情況；具體描述其它毒性反應(yīng)；試驗(yàn)結(jié)論等。 ⒊ 眼刺激性試驗(yàn) 眼前部表面可逆性組織改變（炎癥、變性和壞死等）。 1）試驗(yàn)方法 試驗(yàn)動(dòng)物 ：首選家兔，動(dòng)物數(shù)每組不少于 3只。應(yīng)設(shè)置生理鹽水對(duì)照組，可采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。試驗(yàn)前 24小時(shí)內(nèi)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行雙眼檢查（包括熒光素鈉檢查）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結(jié)膜損傷動(dòng)物棄用。 給藥方法 ：每只眼睛滴入 ，然后合眼瞼約 10s。不需沖洗眼睛。用藥周期根據(jù)擬臨床情況決定，多次給藥一般不超過 4周。 眼部觀察 ：?jiǎn)未谓o藥，在給藥后 2 48和 72小時(shí)對(duì)眼部進(jìn)行檢查；多次給藥，每天給藥前以及最后一次給藥后 2 48和 72小時(shí)對(duì)眼部進(jìn)行檢查。如果在 72小時(shí)未見任何刺激癥狀，試驗(yàn)則可結(jié)束。如存在持久性損傷，有必要延長觀察期限。但一般不超過 21天?？墒褂梅糯箸R、裂隙燈、生物顯微鏡和其他器械進(jìn)行眼刺激反應(yīng)檢查。在記錄了 24h的觀察后，可進(jìn)一步用熒光素染色檢查。記錄每次檢查眼部反應(yīng)的分值（見表）。觀察部位：結(jié)膜、角膜、虹膜及其他。 2）結(jié)果評(píng)價(jià) ：將每一個(gè)觀察時(shí)間每一動(dòng)物的眼角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應(yīng)分值相加得總積分，將一組的積分總和除以動(dòng)物數(shù)，即得最后分值。 眼刺激反應(yīng)分值標(biāo)準(zhǔn) 角膜 虹膜 結(jié)膜 （瞼結(jié)膜和球結(jié)膜） 充血 水腫 分泌物 眼刺激反應(yīng) 分值 眼刺激反應(yīng) 分值 眼刺激反應(yīng) 分值 眼刺激反應(yīng) 分值 眼刺激反應(yīng) 分值 無混濁 0 正常 0 血管正常 0 無水腫 0 無分泌物 0 散在或彌漫性混濁，虹膜清晰可見 1 皺褶明顯加深、充血 ,腫脹 ,角膜周圍輕度充血 ,瞳孔對(duì)光仍有反應(yīng) 1 血管充血呈鮮紅色 1 輕微水腫 (含眼瞼 ) 1 少量分泌物 1 半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清 2 出血 /肉眼可見壞死 /對(duì)光無反應(yīng)（或其中一種） 2 血管充血呈深紅色，血管不易分辨 2 明顯水腫伴部分眼瞼外翻 2 分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著 2 出現(xiàn)灰白半透明區(qū) ,虹膜細(xì)節(jié)不清 ,瞳孔大小勉強(qiáng)可見 3 彌漫性充血呈紫紅色 3 水腫至眼瞼近半閉合 3 分泌物使整個(gè)眼區(qū)潮濕或粘著 3 角膜不透明 ,虹膜無法辨認(rèn) 4 水腫至眼瞼超過半閉合 4 最大總積分 16 眼 刺 激 性 評(píng) 價(jià) 標(biāo) 準(zhǔn) 分值 評(píng)價(jià) 03 無刺激性 48 輕度刺激性 912 中度刺激性 1316 強(qiáng)度刺激性 3）試驗(yàn)報(bào)告 內(nèi)容包括：同上，每只動(dòng)物在每一觀察時(shí)間點(diǎn)的眼睛反應(yīng)分值；具體描述毒性反應(yīng)；試驗(yàn)結(jié)論等。 4）試驗(yàn)結(jié)果的解釋 該試驗(yàn)系統(tǒng)比人眼睛刺激反應(yīng)敏感，刺激反應(yīng)陰性大多可確定為無刺激，陽性反應(yīng)要排除假陽性。除非受試物有大范圍或長時(shí)間的使用，否則輕度刺激性可不予重視。 ⒈ 被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)（ PCA） 1）基本原理： 將致敏動(dòng)物血清（內(nèi)含豐富 IgE抗體）皮內(nèi)注射于正常動(dòng)物。IgE與皮膚肥大細(xì)胞的 Fcз受體結(jié)合，使之被動(dòng)致敏。當(dāng)致敏抗原激發(fā)時(shí)，引起局部肥大細(xì)胞釋放過敏介質(zhì)，從而使局部血管通透性增加，注入染料可滲出于皮丘，形成一個(gè)藍(lán)斑。根據(jù)藍(lán)斑范圍或分光光度計(jì)法測(cè)定，判定過敏反應(yīng)程度。 2）試驗(yàn)動(dòng)物 ： PCA反應(yīng)常用的動(dòng)物是大鼠，亦用小鼠，有時(shí)根據(jù)試驗(yàn)需要用家兔。因這些動(dòng)物 PCA反應(yīng)是由 IgE介導(dǎo)的。 3）試驗(yàn)分組： 應(yīng)設(shè)立陰性、陽性對(duì)照組和受試物不同劑量組。陰性對(duì)照組應(yīng)給予同體積的溶媒，陽性對(duì)照組給予卵白蛋白或天花粉或已知致敏陽性藥物。每組動(dòng)物數(shù)至少 4只。 4）致敏： 按臨床擬給藥途徑。隔日致敏一次，共 5次。末次致敏后 10天左右采血， 2022轉(zhuǎn) /分離心 10分鐘，分離血清， 20℃ 保存， 2周內(nèi)備用。 5）激發(fā)： 上述各組抗血清用生理鹽水稀釋成 1: 1: 1:32。在背部脫毛3 4cm2動(dòng)物皮內(nèi)注射各組的抗血清 。經(jīng) 24或 48小時(shí)后，各組靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原加等量的 %伊文思蘭染料共 1mL。 6）測(cè)定及結(jié)果評(píng)價(jià)： 30分后麻醉處死各組動(dòng)物，剪取背部皮膚，測(cè)量皮膚內(nèi)層的斑點(diǎn)大小，直徑大于 5mm者判定為陽性。 ㈡ 過敏性試驗(yàn)方法 ⒉ 全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)（ ASA） 1）基本原理 對(duì)致敏動(dòng)物體內(nèi)靜脈注射抗原，觀察抗原與 IgE抗體結(jié)合后導(dǎo)致肥大細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞脫顆粒、釋放活性介質(zhì)而致的全身性過敏反應(yīng)。觀察受試物經(jīng)全身給藥后對(duì)動(dòng)物引起的過敏性反應(yīng)。 2）試驗(yàn)方法 ① 動(dòng)物 通常選用體重為 300400克的 Hartley種雄性豚鼠。 ② 劑量組別 陰性、陽性對(duì)照組，低、高劑量組。每組動(dòng)物至少 4只。 ③ 致敏 致敏途徑：按臨床給藥途徑；致敏次數(shù)：隔日一次，共 5次；致敏劑量：陰性對(duì)照組給予同體積溶解藥物的溶媒；陽性對(duì)照組：給予 15mg/只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致敏陽性物質(zhì)；低劑量組給予臨床最大劑量（ /kg或 m2）；高劑量組給予低劑量的數(shù)倍量。 ④ 激發(fā) 激發(fā)途徑：通常靜脈內(nèi)給藥；激發(fā)次數(shù)：末次注射后第 1014日一次激發(fā)；激發(fā)劑量：通常為致敏劑量的 25倍量；觀察指標(biāo)：致敏期間每日觀察每只動(dòng)物的癥狀，初次和最后一次致敏和激發(fā)當(dāng)日測(cè)定每組每只動(dòng)物的體重。靜脈注射后立刻至 30分鐘，按表 5癥狀詳細(xì)觀察每只動(dòng)物的反應(yīng)，癥狀的出現(xiàn)及消失時(shí)間。最長應(yīng)觀察 3小時(shí)。 0 正常 7 呼吸急促 14 步態(tài)不穩(wěn) 1 不安 8 排尿 15 跳躍 2 立毛 9 排糞 16 喘息 3 發(fā)抖 10 流淚 17 痙攣 4 搔鼻 11 呼吸困難 18 橫轉(zhuǎn) 5 噴嚏 12 羅音 19 潮式呼吸 6 咳嗽 13 紫癜 20 死亡 過敏反應(yīng)癥狀 0 過敏反應(yīng)陰性 14癥狀 + 過敏反應(yīng)弱陽性 110癥狀 ++ 過敏反應(yīng)陽性 119癥狀 +++ 過敏反應(yīng)強(qiáng)陽性 20 ++++ 過敏反應(yīng)極強(qiáng)陽性 全身致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 五、參考文獻(xiàn) ? 1 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