選修一專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用-資料下載頁
2025-01-07 09:59本頁面
【正文】 的菌落 (4)需要，以免菌種對環(huán)境造成污染和感染操作者 [示例 ] 下面是探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計數(shù)的實驗，完成下列問題： (1)實驗原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。 將用表層土制成的稀泥漿，接種到無氮培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。 在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖。用這種方 法，可以將自生固氮菌與其他細菌分離開來。材料用具：農(nóng) 田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，盛 9 Ml 無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛 90 mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱。 (2)方法步驟： ①倒平板：分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平 板，操作過程應(yīng)在火焰旁。 ②制備土壤稀釋液：取土樣 10 g加入盛有 90 mL無菌水的錐 形瓶中，充分搖勻。用無菌吸管吸取上清液 1 mL，轉(zhuǎn)至 9 mL 的無菌水的大試管中，依次稀釋到 107稀釋度。 ③涂布：按照由 107～ 103稀釋度的順序分別吸取 mL進行 平板涂布，每個稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布 ________個平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布 1個平板。 ④培養(yǎng)：放入恒溫箱內(nèi)，在 28～ 30℃ 下培養(yǎng) 3～ 4天。 ⑤細菌的計數(shù)：當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在 ________________ 的平板進行計數(shù)。如果測試的平均值 為 50，則每克樣品中的菌落數(shù)是 ________。 (稀釋度是 105) (3)預(yù)測結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上 的菌落數(shù)應(yīng)多于無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。請說明原因。 [解析 ] 分離自生固氮微生物，應(yīng)用無氮培養(yǎng)基，因為氮是生物必需的元素，只有具有固氮能力的自生固氮微生物才能在無氮培養(yǎng)基上生長。而營養(yǎng)全面的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基則允許多種微生物生長。 [答案 ] (2)③ 3 ⑤ 30～ 300 5 107 (3)無氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存。 1．篩選菌株的原理 在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮 源，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長；把纖維素 作為培養(yǎng)基中的唯一碳源，只有能夠利用纖維素的微生 物才能夠生長；無氮源的培養(yǎng)基上，只有自生固氮菌才 能夠生長。 2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法 (1)顯微鏡直接計數(shù)法 ①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微 鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。 ②方法：用計數(shù)板計數(shù)。 ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。 (2)間接計數(shù)法 (活菌計數(shù)法 ) ①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的 一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。 通過統(tǒng)計 平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。 ②操作 為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在 30～ 300 的平板 進行計數(shù)。 ③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝ (C247。 V) M，其中 C 代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)， V代表涂布 平板時所用的稀釋液的體積 (mL)， M代表稀釋倍數(shù)。 3．該實驗中的注意事項 (1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要 至少涂布 3個平板作重復(fù)組，增強實驗結(jié)果的說服力與準 確性。 (2)對照原則 ①判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的培養(yǎng)基 同時進行培養(yǎng)。 ②判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋 白胨培養(yǎng)基進行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù) 目，進行對比得出結(jié)論。 點擊此圖片進入“創(chuàng)新演練 大沖關(guān)”
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