藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證-資料下載頁(yè)
2025-01-06 08:03本頁(yè)面
【正文】 近中性提取 —— 生物基質(zhì)中內(nèi)源性物質(zhì)多為酸性，在堿性下不易萃取 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 pH = 13 pH = 7 pH = 2 空白血清乙醚提取物的 HPLC色譜圖 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 2. 固相萃取法 （ Solidphase extraction, SPE） ① SPE原理 —— 將不同填料作為固定相裝入微型小柱，當(dāng)含有藥物的生物樣品溶液通過(guò)時(shí)，由于受到吸附、分配、離子交換或其它親和力作用，藥物或雜質(zhì)被保留在固定相上，用適當(dāng)溶劑清洗雜質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗脫藥物。 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 ② 洗脫方式 —— A: 藥物與固定相的親和力比雜質(zhì)強(qiáng)而被保留，用一 種對(duì)藥物親和力更強(qiáng)的溶劑洗脫 B: 雜質(zhì)與固定相親和力比藥物強(qiáng)，藥物被直接洗脫 通常為 A模式，前應(yīng)用最廣泛的 微型柱 —— Bond Elut（美國(guó) Analytichem International公司）和 Seppak微型柱（美國(guó) Waters公司） 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 ③ 固相的選擇 原則 ——固相與被測(cè)組分應(yīng)具有相似的極性 SPE的填料種類繁多，可分成三類 1） 親脂型 （大孔吸附樹(shù)脂、 親脂性鍵合相硅膠 ） 2）親水型（硅膠、硅藻土、棉纖維） 3）離子交換型 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 ④ 試驗(yàn)步驟 —— 五步 1）用甲醇活化填料 —— 固相表面可被水性溶液潤(rùn)濕 2）用水或適當(dāng)?shù)木彌_液沖洗小柱 —— 除去殘留的甲醇 3）加樣 —— 使樣品經(jīng)過(guò)小柱，棄去廢液 4）用水或適當(dāng)?shù)木彌_液沖洗小柱 —— 除去殘留的干擾物 5）選擇適當(dāng)?shù)南疵撊軇_洗小柱 —— 洗脫被分析物，收集 洗脫液，揮干溶劑，備用或直接進(jìn)行在線分析 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 ⑤ 方法特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： 1）引入雜質(zhì)少 2）完全避免乳化的形成 3）較高萃取率、重現(xiàn)性較好 4）使用溶劑多數(shù)與水混溶，易于自動(dòng)化 缺點(diǎn)： 1）價(jià)格昂貴 2）技術(shù)要求高 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 （ 4）化學(xué)衍生化 藥物分子中含有活潑氫者均可被化學(xué)衍生化 ——如 RCOOH、 ROH、 RNH RNHR’ 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 1） GC法中的化學(xué)衍生化 目的： a: 使極性藥物變成非極性、易揮發(fā)藥物；使具有被分離特性 b: 增加藥物的穩(wěn)定性 c: 提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體的分離能力 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 1） GC法中的化學(xué)衍生化 主要衍生化反應(yīng)： a: 烷基化（ Alkylations） b: ?；?Acylations） c: 硅烷化（ Silylations） —— 應(yīng)用最廣泛 d: 非對(duì)映體衍生化（ to produce diastereomers） 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 2） HPLC法中的化學(xué)衍生化 A目的 ： a: 提高對(duì)樣品的檢則靈敏度 b: 改善樣品混合物的分離度 c: 進(jìn)一步結(jié)構(gòu)鑒定 (如 MS、 IR、 NMR) 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 2） HPLC法中的化學(xué)衍生化 B化學(xué)衍生反應(yīng)的要求 a: 反應(yīng)條件不苛刻、能迅速定量進(jìn)行 b: 生成單一衍生物，反應(yīng)副產(chǎn)物、包括過(guò)量的衍生試劑不干擾被測(cè)樣品的分離和檢測(cè) c: 衍生試劑方便易得、通用性好 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 2） HPLC法中的化學(xué)衍生化 柱前衍生法 —— 是在色譜分離之前 ， 預(yù)先將樣品制成適當(dāng)?shù)难苌?， 然后進(jìn)樣分離和檢測(cè) 。 CHPLC衍生化可分為柱前衍生法與柱后衍生法兩種 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 柱后衍生法 —— 是在色譜分離 (出柱 )后 ， 色譜流出組分直接在系統(tǒng)中與衍生試劑及輔助反應(yīng)液進(jìn)行反應(yīng) ， 在線檢測(cè)衍生化產(chǎn)物 。 柱前衍生和柱后衍生的主要差別 柱前衍生 —— 根據(jù)衍生物的性質(zhì)不同而進(jìn)行色譜分離的 柱后衍生 —— 根據(jù)待測(cè)物的性質(zhì)分離后再衍生 —— 為保持較高的反應(yīng)產(chǎn)率和重現(xiàn)性結(jié)果，一般要求加 過(guò)量的衍生試劑，對(duì)柱后衍生的方式不利 —— 對(duì)大量樣品做常規(guī)分析，柱后衍生更適合于連續(xù)的 自動(dòng)化操作 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 D根據(jù)衍生化目的和試劑不同，衍生化反應(yīng)分四種 HPLC—— 紫外衍生化反應(yīng) HPLC—— 熒光衍生化反應(yīng) HPLC—— 電化學(xué)衍生化反應(yīng) HPLC—— 手性衍生化反應(yīng) 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 四、生物樣品定量分析方法的驗(yàn)證與要求 1． 專屬性 ——避免干擾 2． 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 ——覆蓋所有濃度范圍 3． 準(zhǔn)確度 ——與實(shí)際狀況相符 4． 精密度 ——結(jié)果可重現(xiàn) 5． 定量下限 ——達(dá)到峰濃度的 1/10~1/20 6． 穩(wěn)定性 ——確保所有樣品準(zhǔn)確測(cè)定 7． 提取回收率 ——確保準(zhǔn)確度 8. 質(zhì)量控制 9. 測(cè)定要求 學(xué)科熱點(diǎn)問(wèn)題 ?游離型血藥濃度測(cè)定方法研究 ?血中游離型藥物濃度 (F)與總濃度 (T)的比率 (F/T) 及唾液與血液游離濃度的比率 (S/P)以及它們之間的相關(guān)性的研究 ?代謝物的監(jiān)測(cè)與研究 ?對(duì)映體的監(jiān)測(cè)與研究 ?體內(nèi)微量元素的測(cè)定與研究 ?方便 、 快捷的樣品制備方法與樣品直接進(jìn)樣分析的研究 ?分析新方法 、 新技術(shù)的聯(lián)用研究 ?體內(nèi)藥物分析方法的質(zhì)量控制研究 參 考 文 獻(xiàn) 中國(guó)藥典 2022版 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則 藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則 思考題 1 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證有哪些內(nèi)容，各項(xiàng)內(nèi)容的含義及其表示方式 2 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)各項(xiàng)分析項(xiàng)目各需要哪些方法驗(yàn)證內(nèi)容 3 有哪些生物樣品種類，各類樣品的采集和貯藏方法 4 生物樣品去除蛋白質(zhì)的目的和方法 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1