重組體的篩選ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-04 21:02本頁(yè)面
【正文】 考慮。 最好用單克隆抗體（ monoclonal antibody） 四、 Western blotting 電泳膠里的蛋白質(zhì)帶可以用電轉(zhuǎn)的方法，轉(zhuǎn)到膜上（硝酸纖維素膜、 PVDF膜、中性尼龍膜等）。 ① Western（轉(zhuǎn)膜） 膠里的蛋白質(zhì)帶在電場(chǎng)的作用下 橫向 轉(zhuǎn)移到正極一側(cè)的膜上。 膜 膠 蛋白 Western裝置 ② Blotting 原理與 ELISA相同。 待測(cè)蛋白 硝酸纖 維素膜 一抗 二抗 辣根過(guò)氧 化物酶 底物 產(chǎn)物， 并發(fā)出光 PAGE膠 待測(cè)蛋白 底片曝光 辣根過(guò)氧化物酶： HRPO 1）先用一抗（待測(cè)蛋白的單克隆抗體）與 膜上的蛋白結(jié)合。 2）洗去未結(jié)合的一抗。 3）用二抗與一抗結(jié)合（ 二抗上帶有 HRPO）。 4）清洗掉未結(jié)合的二抗。 5）用 HRPO的底物浸泡膜。 6）暗室里曝光，沖洗膠片。 ③ Blotting過(guò)程 ④ 結(jié)果 多克隆抗體Blotting的結(jié)果 單抗 blotting結(jié)果 檢測(cè)與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的 DNA序列的部位及特性 優(yōu)點(diǎn)： 可形象地展示出特殊的蛋白質(zhì)因子同特定 DNA片段之間的結(jié)合區(qū)域 五、 DNaseⅠ 足跡實(shí)驗(yàn)（ footprinting assay） 32p 1 5 10 * 1 4 8 10 * 加入蛋白質(zhì) X 加入 DNaseI凝膠電泳放射自顯影 1 5 10 A B 足跡 (a) (c) (b) DNaseI 足跡實(shí)驗(yàn)
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