重組體在原核細胞中的表達與調控-資料下載頁
2025-01-18 20:44本頁面
【正文】 ? N末端為 Met ? 接近與生物體內的天然蛋白 ? 可應用與本身生物 ? 易被宿主蛋白酶降解 代表載體 —— pKK223 ?來源于 pBR322 ?非融合型表達 ?Tac啟動子 ?pUC8多克隆位點 ?rrnB rRNA轉錄終止子 ?宿主： LacI宿主（ JM105） ?IPTG誘導 表達載體 代表載體 —— pINⅢ ?分泌型表達 ?脂蛋白基因啟動子（ IPP） ?LacUV5啟動子和操縱基因 ?Lac阻遏子基因 ?大腸桿菌分泌蛋白基因 —— 外膜蛋白基因（ OmpA）片段 ?三種密碼子讀碼框架的多克隆位點 ?產物分泌至細 胞 間隙或培養(yǎng)基 代表載體 —— pGEX ?融合型表達 —— 融合谷胱肽巰基轉移酶 ?Tac啟動子 ?Lac操縱基因 ?SD序列 ?LacI阻遏蛋白基因 ?親和層析純化融合蛋白 ?凝血酶或 Xa因子切割融合蛋白成完全天然蛋白 外源基因的要求 ?反轉錄制備 cDNA ?人工合成基因 ?PCR擴增目的基因 提高外源基因表達水平的措施 提高翻譯水平 ?調整 SD序列與起始密碼子 AUG之間距離 ?點突變改造堿基，尤其是起始密碼子緊隨的幾組密碼子，原因是改善翻譯起始和mRNA結構 ?增強 RNA的穩(wěn)定性，如插入“重復性基因外回文順序” ?使用原核偏愛密碼子 減輕細胞代謝負荷 ?誘導表達，使細菌生長與外源基因表達分開 ?表達載體的誘導復制，如 pCI101載體 25 ℃ →37 ℃ ， 10個拷貝 → 1000拷貝 ?表達分泌蛋白 提高表達蛋白的穩(wěn)定性 ?表達融合蛋白 ?采用突變菌株，保護外源蛋白不被降解（表達載體上克隆入 pin基因，其編碼蛋白酶抑制劑） ?表達分泌蛋白（條件：信號肽；分泌有關的氨基酸序列；轉運機制） ?分泌取決于成熟蛋白的氨基酸序列和構象 ?天然蛋白的形態(tài)（分泌或細胞內）
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1