重組體在原核細(xì)胞中的表達(dá)與調(diào)控-在線瀏覽
2025-03-07 20:44本頁(yè)面
【正文】 S rRNA 3‘…… ……… HOAUUCCUCCAUAG.............................539。 復(fù)制酶 539。 噬菌體 λCro 5‘… ..AUGUACUAAGGAGGUUGUAUG.......................339。...AGCCUAAUGGAGCGAAUUAUG.........................339。 脂蛋白 539。 核糖體蛋白質(zhì) S12 539。 RNA聚合酶 β539。 trpE 539。 終止子 ?終止子（ terminator， T）是給予 RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的 DNA序列 ?兩類終止子（按其作用是否需要 ρ因子的協(xié)助 ） ?不依賴 ρ因子（蛋白性終止因子）的終止子：在序列上有一些共通的特點(diǎn)，即有一段富含 GC的反向重復(fù)序列，其后跟隨一段富含 AT的序列，因而轉(zhuǎn)錄生成的 mRNA的序列中能形成發(fā)夾式結(jié)構(gòu)，后繼一連串 U，正是RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄生成的這段 mRNA的結(jié)構(gòu)阻止 RNA聚合酶繼續(xù)沿 DNA移動(dòng)、并使聚合酶從 DNA鏈上脫落下來，終止轉(zhuǎn)錄。 ?抗終止因子：有的蛋白因子能作用于終止序列，減弱或取消終止子的作用 rrnB強(qiáng)終止子 原核表達(dá)載體 ?克隆載體：用于外源基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制擴(kuò)增（松弛型復(fù)制子） ?表達(dá)載體：適用與在宿主細(xì)胞中表達(dá)外源基因 ? 融合表達(dá) ? 非融合表達(dá) 組建表達(dá)載體條件 ?強(qiáng)啟動(dòng)子 ?兩側(cè)的調(diào)控序列 ?選擇標(biāo)記 ?正確的讀碼框架 ?合適的核糖體結(jié)合位點(diǎn)（ SD序列） ?SD序列與起始密碼子 ATG之間合適的距離 ?質(zhì)粒的穩(wěn)定性 ?被翻譯出的蛋白的性質(zhì)和穩(wěn)定性 ?合適的宿主細(xì)胞 融合型表達(dá)與天然表達(dá) ?融合型表達(dá) ? 通常 N末端短的原核多肽（ 6His； GST；FLAG； MBP等），易親和純化 ? 具有真核抗原性 ? 抵御內(nèi)源性蛋白酶降解 ? 可作為信號(hào)肽，進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位 ?天然型表達(dá)
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