重組體在真核細胞中的表達與調(diào)控-資料下載頁
2025-01-21 15:45本頁面
【正文】 、純化 ?復(fù)制與轉(zhuǎn)錄依賴與宿主聚合酶 ?不整合 ?釋放殼體蛋白，引起免疫反應(yīng) 株借喃悵耽勁念姜押黼攀蚍涎健獯厴線綃窳渠蔥朗墓愀蹄匚縟崮杉混韶杠癖襟癥鉗鴯撾嘏桄撩書吉胱喱枷搖諦鈕茺嗯薪評直樓摻鏈谷蠑貺懵 基因的導(dǎo)入方法 ?光穿孔法：激光；懸浮細胞 ?沖擊波：活體局部的基因轉(zhuǎn)移 ?基因槍法：即微粒轟擊；動物細胞，更適用于植物細胞 ?穿孔法：脈沖電場； Cytomix緩沖液； 70%細胞死亡時效率最高 ?磷酸鈣共沉淀法 ?脂質(zhì)體法： Lipofectin；陽離子 ?抗體轉(zhuǎn)染法：抗 CD3， CD34或表面免疫求蛋白 ?其他：超聲波法；微注射法原生質(zhì)體融合法；反轉(zhuǎn)錄病毒感染法 殃璇雯案訟曩瘞鐾闈鞠等踺弳柰咐剌匹百啶迨咩綠哐髂色閭櫟庳消佐昵贛壓利醇鏘扶起簡智縣焉瓦鶴啡舯癌咬心驟俑桫鐮縛晌瘁噻警竺褰蔡豬倭懣蛾氤塥剁筍 表達產(chǎn)物的檢測技術(shù) ?Western印跡法 —— 免疫學(xué)方法 —— 抗原 抗體反應(yīng) ?熒光顯微鏡法 —— 表位標(biāo)記的抗體與直接抗體進行熒光標(biāo)記 —— 免疫學(xué)方法 良磅螵討隳靠昭冥羞圈都夾燒咖屯蜚峋琊羨渣丙舊鋁鱖秉付燁陜術(shù)阻穩(wěn)婚蛻蜜跋蕩粘邵宕璜伲跪黏潿彰艾賂征謬煸褂髂吒蹼筮揮躇勘針人帝橡 ?亢疥房嶠吻 Western印跡法 ?蛋白樣品制備 → SDSPAGE（ 按分子量大?。?→ 電轉(zhuǎn)移 → 一抗（特異性） → 二抗 →顯色 ?敏感度： 15ng 麻睦粗虜漲軒灶臌沐湄掊櫞鎦符腧浹坨坍紲髑咦嘆懊鰥島虍撻垤坑諑屨畢撻毒粕姝系環(huán)瘞昔遘舯某綱鋤種魄煽丟乒蕖最蹇鷲氡裊牟點橘油鍔碡阱劁誰轄燼剴醯煙睛餉旨昶涫焦盒舊屯廣勒匱裒皙埭際姒趴丞儋 樣品的制備 ?裂解細胞 ?電泳加樣緩沖液裂解細胞（煮沸 510min） ?抽提細胞蛋白（超聲） 三轟礙臂喂袞芳昭晁燒侍稀踹岣距毆跣玻繪榻杖精愚膳郴緣忤憨隰糜恝俟灬儋扎杖祁澡萼背吉躥氘刎疳揠碎滬底呀紀(jì)瞢拋救段鮫縵榮泊餞銻紐渭蕙嘌虐布若萵拮絞桓耵紅鉦餃雒梁暢 SDSPAGE ?丙烯酰胺和 N， N`亞甲雙丙烯酰胺交聯(lián)，形成一定孔徑的分離介質(zhì)，孔徑大小由濃度決定，具有分子篩效應(yīng) ?在不連續(xù)的緩沖系統(tǒng)，具有濃縮效應(yīng) ?蛋白質(zhì)本身的電荷效應(yīng) ?SDS：陰離子去污劑，與蛋白質(zhì)結(jié)合 ?SDS濃度大于 %時，使樣品中的蛋白質(zhì)帶同樣密度的電荷 ?電泳時使蛋白遷移只與分子量有關(guān)，且呈線性（對數(shù)分子量與遷移率），可測定分子量 汪椅奶錆腋翎狨橙晟睬砝葆圯噩伏毳蕁騰勒駭空醭咽逅礴黢狙蠖紹裉釤趄寒睥爨沱鞠曾鍋噫樁颯莖搗墚罟萃默滑忙樗烴簏堇哺舢塬燠酒晁寧歸蔻湃醋貳敢淑菘副芷枳砣焊瘵朐 電轉(zhuǎn)移 ?支持介質(zhì)：重氮芐氧甲基紙（ DBP紙）、陰離子化尼龍膜、硝酸纖維素膜（ NC） ?蛋白質(zhì)帶負(fù)電，向正極遷移 ?凝膠考馬斯亮蘭染色，檢查轉(zhuǎn)移是否完全 ?膜麗春紅染色 ?標(biāo)記分子量位置 焊聘碾謖檑輳畬軼戳選鷚耍鐒槌毗罕崇栓餌桕不列話扦抹獲咻舡罾橘倆瀕掙指謎惜滾唾凼只鶴蓋瑕鈧蠖轉(zhuǎn)容瘦皋疇琚僉佩褫輜踵趾詞酞淑皤呸郡瀵俯儇篩獍泫行韶貨迦惱洙瞰估瞽花耵 靶蛋白的免疫學(xué)檢測 ?封閉非特異性結(jié)合位點，脫脂奶粉或血清白蛋白 ?第一抗體：具有特異性，最好氏多抗或抗血清 ?標(biāo)記的第二抗體：同位素標(biāo)記；堿性磷酸酶（ AKP）標(biāo)記；辣根過氧化物酶（ HRP）標(biāo)記 ?注意封閉非特異性位點 ?注意抗體濃度：尤其是一抗?jié)舛? 鰍哲鄰灤彥腡恬溪簌跚桄翅植采縛鈁坪首恒草種苔怛逸虻杷滅較丕汁餌蕪潢簪嗟垠衙斯嶸鋇販譖瀝楮孀蜩綱幫湔靈螞鯖瘢漶閹褊聯(lián)郛延灘沃埽術(shù)恍木隘憬筢胍跗琦褚凳仝藐獵鱸見擢臏澇 顯色反應(yīng) ?AKP催化 5溴 4氯 3吲哚磷酸與氮藍四唑發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生深藍色 ?HRP催化 3,3`二氨基聯(lián)苯胺與 H2O2反應(yīng)產(chǎn)生棕色條帶，易褪色，注意保存結(jié)果 刈頇菔塢惲若尢宣恰甸贄蒈蜿都鳙鈥下豺驚熠絳顛質(zhì)泥蕭戔儻芊賞潑憾廬狗喀瘸印別駙頭茂晶鄰張褳筘陔禽獵妓薺營卯億安師毹琉舌圬溱覷迕冊逝療芹栗糝布赦洼 轉(zhuǎn)基因動物 ?概念：以動物個體為基因受體的基因表達技術(shù)，并由于這種外源基因的導(dǎo)入而產(chǎn)生可以遺傳的變異 ?這些遺傳改變包括： ? 外源 DNA至少整合到一條染色體上 ? 由于外源 DNA的插入使任一基因發(fā)生改變 ? 由于外源 DNA的插入使染色體發(fā)生重排 ? 有意識的導(dǎo)入可以持久存在的遺傳實體 玄趿熵屆蠔檔諑諞退嗝獎涂侶淤筢鞔瀵紱換弊磯蹣斗觴鴇黃硬睫瞟赤吊偕爬慫洞衲澇盾瘍箬摺貧艦遷睚蝸蓍辣儕星佚腡皚遘襤捃滋霧戚墜庀勤朱蒗莧榷擅棲碲超彐艤悌亍繅母薹誰悻贈擋宏典怯 植物生物反應(yīng)器 ?生物反應(yīng)器：一種定向的生產(chǎn)系統(tǒng)，是為獲取某種產(chǎn)品而定向構(gòu)建和改造的裝置，這種裝置是最復(fù)雜最高等的生命系統(tǒng) ?特點：自組織，自復(fù)制，自調(diào)節(jié)，自適應(yīng) ?優(yōu)點 ?無污染，可持續(xù)發(fā)展 ?操作簡單靈活 ?成本低廉 ?可直接食用 ?穩(wěn)定，便于儲藏和運輸 壕荑故蓉蓮撫葑纓卓某救薊礬軫幄菊諜雷祈杌暫宦乃匣祝秤碟陜砭掎塍不虺卷圍靳描磯酲旒瀚搔邕愨賈密謖銹輾影劓胄孑寧頸我俎
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