第十三章分子生物學(xué)技術(shù)-資料下載頁
2024-10-11 21:36本頁面
【導(dǎo)讀】70年代以來,分子生物學(xué)技術(shù)迅速發(fā)展起。分子生物學(xué)技術(shù)為揭示人。類遺傳病的本質(zhì)起著重要作用。一些分子生物學(xué)技術(shù)予以介紹。重組DNA技術(shù)是現(xiàn)代分子生物技術(shù)發(fā)展中最。重要的成就之一。治療人類疾病的目的。發(fā)現(xiàn)于原核生物體內(nèi)，現(xiàn)已分離出100多種，幾乎所有的原核生物都含有這種酶。根據(jù)其來源命名。指在該菌株中分離的第一個(gè)限制酶。每種限制酶能識(shí)別和切割的通常4～8個(gè)核苷酸。序列，稱為限制性位點(diǎn)或切點(diǎn)。根據(jù)上述限制酶的特點(diǎn)，在基因工程和基因診斷。因此可將不同種屬。如人和質(zhì)粒DNA等。2)用于人類基因組的DNA分析，具特定的酶切位。應(yīng)用于限制性片段多態(tài)性分析。1)分子量小，便于攜帶較大的DNA片段，能進(jìn)。入宿主細(xì)胞并在其中增殖；3)被切割后的載體，插入外源DNA后，不影響。Plasmid獨(dú)立于細(xì)菌染色體外的雙鏈環(huán)DNA分子。從而篩選陽性菌落。可克隆23kb的外源DNA。噬菌體，裂解宿主，釋放噬菌體。隆DNA部分的缺失或重排。DNA，并在體外包裝于PI殼內(nèi)。生PI人工染色體克隆系統(tǒng)-----PAC。
【正文】 的目基因擴(kuò)增，獲得足夠量的目的基因來進(jìn)行結(jié)構(gòu)與功能的研究。 ? 重組 DNA技術(shù)的另一目的是獲得基因重組后的產(chǎn)物 —— RNA，蛋白質(zhì)。 ? 就是將目的基因與表達(dá)載體重組，導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)出相應(yīng)的基因產(chǎn)物（蛋白）。如胰島素，干擾素；生產(chǎn)疫苗的抗原和特異的抗體等。此類克隆系統(tǒng)稱為表達(dá)克隆。（ expression cloning） . 35 目的基因表達(dá) 36 （一）．真核細(xì)胞的基因在原核細(xì)胞 （細(xì)菌）中表達(dá) ? 原核細(xì)胞中缺乏真核基因表達(dá)裝置（如， RNA剪接因子等），因此不能直接表達(dá)。通常采用大腸桿 菌為宿主。 真核多肽的表達(dá)要求： 1）適當(dāng)?shù)?cDNA（完整的編碼序列）； 2）適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體，提供特定多肽信息； 3）外部進(jìn)行表達(dá)調(diào)控，表達(dá)系統(tǒng)設(shè)計(jì)有啟動(dòng)子。 產(chǎn)物特征： 1）真核細(xì)胞的蛋白由于不能羥基化而不穩(wěn)定； 2）活性受限或無活性。 37 (二 )、真核細(xì)胞基因在真核細(xì)胞中表達(dá) ? 真核宿主細(xì)胞提供一個(gè)相似但又不相同的環(huán)境。常采用酵母或昆蟲細(xì)胞作為宿主。 ? 應(yīng)用于真核細(xì)胞蛋白質(zhì)的大量制備，研究特定基因的表達(dá)。 ? 產(chǎn)物翻譯后羥基化，羧基化等，有加強(qiáng)蛋白的穩(wěn)定和功能活性。 38 五 、基因文庫 ? 基因文庫（ gene library） ,應(yīng)用 DNA重組技術(shù)構(gòu)建的含有基因組的全部基因的 DNA克隆。 39 （ 一） 構(gòu)建基因組 DNA文庫 40 （ 二）染色體特異的基因文庫 （ chromosome specific library） 單個(gè)染色體 → 細(xì)胞克隆 （流式 C儀） ↓ 細(xì)胞 → 染色體 染色體文庫 染色體區(qū)帶 → 區(qū)帶特異 （顯微切割 ） ↓ DNA文庫 41 （三） cDNA文庫（ cDNA library） cDNA文庫構(gòu)建： 特定組織細(xì)胞一定發(fā)育階段 總 mRN
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