第十三章分子生物學技術-資料下載頁
2025-10-02 21:36本頁面
【導讀】70年代以來,分子生物學技術迅速發(fā)展起。分子生物學技術為揭示人。類遺傳病的本質起著重要作用。一些分子生物學技術予以介紹。重組DNA技術是現(xiàn)代分子生物技術發(fā)展中最。重要的成就之一。治療人類疾病的目的。發(fā)現(xiàn)于原核生物體內，現(xiàn)已分離出100多種，幾乎所有的原核生物都含有這種酶。根據其來源命名。指在該菌株中分離的第一個限制酶。每種限制酶能識別和切割的通常4～8個核苷酸。序列，稱為限制性位點或切點。根據上述限制酶的特點，在基因工程和基因診斷。因此可將不同種屬。如人和質粒DNA等。2)用于人類基因組的DNA分析，具特定的酶切位。應用于限制性片段多態(tài)性分析。1)分子量小，便于攜帶較大的DNA片段，能進。入宿主細胞并在其中增殖；3)被切割后的載體，插入外源DNA后，不影響。Plasmid獨立于細菌染色體外的雙鏈環(huán)DNA分子。從而篩選陽性菌落?？煽寺?3kb的外源DNA。噬菌體，裂解宿主，釋放噬菌體。隆DNA部分的缺失或重排。DNA，并在體外包裝于PI殼內。生PI人工染色體克隆系統(tǒng)-----PAC。
【正文】 的目基因擴增，獲得足夠量的目的基因來進行結構與功能的研究。 ? 重組 DNA技術的另一目的是獲得基因重組后的產物 —— RNA，蛋白質。 ? 就是將目的基因與表達載體重組，導入宿主細胞進而表達出相應的基因產物（蛋白）。如胰島素，干擾素；生產疫苗的抗原和特異的抗體等。此類克隆系統(tǒng)稱為表達克隆。（ expression cloning） . 35 目的基因表達 36 （一）．真核細胞的基因在原核細胞 （細菌）中表達 ? 原核細胞中缺乏真核基因表達裝置（如， RNA剪接因子等），因此不能直接表達。通常采用大腸桿 菌為宿主。 真核多肽的表達要求： 1）適當?shù)?cDNA（完整的編碼序列）； 2）適當?shù)谋磉_載體，提供特定多肽信息； 3）外部進行表達調控，表達系統(tǒng)設計有啟動子。 產物特征： 1）真核細胞的蛋白由于不能羥基化而不穩(wěn)定； 2）活性受限或無活性。 37 (二 )、真核細胞基因在真核細胞中表達 ? 真核宿主細胞提供一個相似但又不相同的環(huán)境。常采用酵母或昆蟲細胞作為宿主。 ? 應用于真核細胞蛋白質的大量制備，研究特定基因的表達。 ? 產物翻譯后羥基化，羧基化等，有加強蛋白的穩(wěn)定和功能活性。 38 五 、基因文庫 ? 基因文庫（ gene library） ,應用 DNA重組技術構建的含有基因組的全部基因的 DNA克隆。 39 （ 一） 構建基因組 DNA文庫 40 （ 二）染色體特異的基因文庫 （ chromosome specific library） 單個染色體 → 細胞克隆 （流式 C儀） ↓ 細胞 → 染色體 染色體文庫 染色體區(qū)帶 → 區(qū)帶特異 （顯微切割 ） ↓ DNA文庫 41 （三） cDNA文庫（ cDNA library） cDNA文庫構建： 特定組織細胞一定發(fā)育階段 總 mRN
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