[醫(yī)學(xué)]第六章中藥含量測(cè)定方法-資料下載頁(yè)
2025-10-09 22:53本頁(yè)面
【正文】 子交換色譜法中 ， 流動(dòng)相常以無(wú)機(jī)鹽的緩沖液為流動(dòng)相 。 請(qǐng)問(wèn)緩沖液的pH值及離子強(qiáng)度對(duì)分離各有何影響 ？ 三 、 離子色譜 離子色譜 (IC)是 70年代發(fā)展的新方法 。 其分離原理與離子交換色譜原理一樣 ，只是流出的各種離子用電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè) 。 但由于流動(dòng)相都是強(qiáng)電解質(zhì) ， 其電導(dǎo)率比待測(cè)離子約高 2個(gè)數(shù)量級(jí) ， 這種強(qiáng)背景電導(dǎo)會(huì)完全掩蓋待測(cè)離子信號(hào) 。 為解決此問(wèn)題 ， 1975年 Small提出 ， 在離子交換柱之后 ， 再串結(jié)一根抑制柱 。該柱裝填與分離柱電荷完全相反的離子交換樹脂 。 通過(guò)分離柱后的樣品再經(jīng)過(guò)抑制柱 ， 使具有高背景電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變?yōu)榈捅尘半妼?dǎo)的流動(dòng)相 ， 從而可用電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)各種離子的含量 。 例如：分析陽(yáng)離子時(shí) ， 以無(wú)機(jī)酸為流動(dòng)相 ， 抑制柱為高容量的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂 ， 則發(fā)生下列反應(yīng)： R+— OH + HCl(流動(dòng)相 )—— R+— Cl + H2O R+— OH + MCl(待測(cè)物 ) —— R+— Cl + M+OH 可見 ， 不僅大量酸轉(zhuǎn)化為低電導(dǎo)的水 ， 而且待測(cè)離子轉(zhuǎn)化為具有更大淌度的堿 。 該法的不足之處在于：抑制柱要定期再生 、 譜峰在經(jīng)過(guò)抑制柱后會(huì)展寬 ， 降低分離度 。 因此有人提出了使用電導(dǎo)率很低的溶液 (如苯甲酸鹽稀溶液 )作流動(dòng)相 。 思考： IC分離中 ， 何為抑制柱 ？ 分析陰離子時(shí) ， 抑制柱中應(yīng)填充何種離子交換樹脂 ？ 四 、 離子對(duì)色譜法 （ IPC） 離子色譜對(duì)色譜主要用來(lái)分離強(qiáng)極性有機(jī)酸和有機(jī)堿 。 1. 原理：將與待測(cè)物離子 A電荷相反的離子 B（ 稱為對(duì)離子或反離子 ） 加入到流動(dòng)相中 ， 使待測(cè)離子與對(duì)離子形成離子對(duì) AB， 該 AB離子對(duì) 的性質(zhì)與 A離子或 B離子 的性質(zhì)不同 ， 即間接改變了待測(cè)離子的保留特性 。 例如：固定相為非極性鍵合相 ， 流動(dòng)相為水溶液 ， 于流動(dòng)相中加入與待測(cè)離子A有相反電荷的離子 B+： 由于離子對(duì) AB具有疏水性 ， 因而被非極性固定相提取 。 其它待測(cè)離子 A1，A2， A3…… ..因與 B離子間的成對(duì)能力不同 ， 而形成不同疏水性的離子對(duì) ， 使得各待測(cè)物在柱內(nèi)的保留值不同 ， 從而達(dá)到分離的目的 。 思考：有一強(qiáng)極性有機(jī)酸混合物 ， 若用離子對(duì)色譜法分離 ， 請(qǐng)問(wèn)在流動(dòng)相中應(yīng)加入陰離子還是陽(yáng)離子來(lái)開成離子對(duì) ？ ???? ?? 有機(jī)相水相水相 BABA五 、 尺寸排阻色譜法 尺寸排阻色譜又稱凝膠 (滲透 )色譜 ， 主要用于大分子的分子分離 。 它是基于待測(cè)物分子的尺寸和形狀不同來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的 。 1. 分離原理：固定相為化學(xué)惰性的多孔凝膠 ， 它類似于分子篩 ， 但孔徑更大 。 凝膠內(nèi)有一定大小的空穴 ， 分子體積大的待測(cè)物不能滲入孔穴中而被排阻 ， 較早地被淋洗出來(lái) ， 中等的部分滲透 ， 小分子則完全滲透 ， 最后流出色譜柱 。 即待測(cè)物分子按分子大小 (分子量大小 )先后從柱中流出 。 2. 固定相 3. 流動(dòng)相的要求：能溶解樣品且與凝膠相似 (潤(rùn)濕凝膠 )、 粘度小 (增加擴(kuò)散速度 )。 類型 材料 型號(hào) 特點(diǎn) 流動(dòng)相 葡萄糖凝膠 S ephad ax 水 軟性凝膠 聚苯乙烯 Bio he ad S 溶脹 , 小分子分離 有機(jī)溶劑 聚苯乙烯 S t yra gel 有機(jī)溶劑 半剛性凝膠 聚乙酸酯 Em gel (O R) 溶脹 較小流速較小 有機(jī)溶劑 玻璃珠 CP G 10 有機(jī)溶劑和水 剛性凝膠 多孔硅膠 P or as i l 剛性大、 高流速分離 有機(jī)溶劑和水 六 、 親合色譜 主要用于生物大分子與固定相之間的特異親合力進(jìn)行選擇性分離及純化的方法 。 分離原理：于載體表面先鍵合具有一般反應(yīng)性能的環(huán)氧或聯(lián)氨 （ 稱為間隔臂 ） ， 然后再連接上配基 ， 如酶 、 抗原或激素 。 當(dāng)含有復(fù)雜混合試樣的流動(dòng)相流經(jīng)這種經(jīng)固定化的配基時(shí) ， 其中具有親合力特性的生物大分子與配基相互作用而被保留 ， 無(wú)此作用的則被洗出；隨后 ， 改變流動(dòng)相 pH或組成 ， 再將被保留的大分子組分以純品的形式洗脫出來(lái) 。 特點(diǎn)：選擇性過(guò)濾 、 純化效果好 。 七 、 色譜分離方法的選擇 分子量 水溶 性 方 法 流動(dòng)相 可溶 排阻色譜 水 20 0 0 不溶 排阻色譜 水 分配色譜 ( 同系物 ) 各種 吸附色譜 ( 異構(gòu)物 ) 各種 不溶 排阻色譜 ( 分子大小 ) 各種 反相液液色譜 各種 可溶但不解離 排阻色譜 水 陽(yáng)離子交換色譜 ( 堿 ) 緩沖液 可溶且不解離 陰離子交換色譜 ( 酸 ) 緩沖液 20 0 0 可溶離子或非離子 反相離子色譜 緩沖液 專業(yè)期刊： 《 分析化學(xué) 》 《 色譜 》 《 分析科學(xué)學(xué)報(bào) 》 《 精細(xì)化工 》 《 分析測(cè)試學(xué)報(bào) 》 《 藥物分析雜志 》 《 分析實(shí)驗(yàn)室 》 《 染料工業(yè) 》 《 理化檢驗(yàn)－化學(xué)分冊(cè) 》 《 農(nóng)藥 》 專業(yè)網(wǎng)站： 中國(guó)色譜網(wǎng) — 中國(guó)分析儀器網(wǎng) —
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