畢業(yè)論文—sur1基因的組織定位-資料下載頁
2025-06-06 13:58本頁面
【正文】 表達載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌， 挑取陽性菌落 對其進行菌落 PCR凝膠電泳，擴增 SUR1啟動子的第二段， 原理同結(jié)果。 SUR1 基因的組織定位 M 1 2 圖 7： M為 Marker， 2021bp,從上至下依次為： 202 1000、 750、 500、 250、100 2為挑取的單菌落 結(jié)果表明大小約 600bp，與預(yù)期結(jié)果相符，證明重組表達載體成功轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中 。 Basta篩選結(jié)果 用濃度為 1： 1 000的 Basta除草劑 噴灑四葉期的幼苗 進行篩選 ，未轉(zhuǎn)化成功的幼苗由于不含抗 Basta除草劑基因而枯萎變黃被殺死；成活的即為轉(zhuǎn)化成功的幼苗。 SUR1 基因的組織定位 (A) (B) 圖 8 進行 Basta篩選之前 （ A）為轉(zhuǎn)基因幼苗，（ B）為野生型空白對照 （ A） （ B） 圖 9 進行 Basta篩選之后 （ A） 為轉(zhuǎn)基因幼苗，（ B）為野生型空白對照 SUR1 基因的組織定位 可以看出， （ B）組 野生型全部被 Basta殺死，枯萎變黃， （ A）組部分幼苗由于未被轉(zhuǎn)化成功，不含抗 Basta基因，遂也被殺死，枯萎變黃。剩余有 Basta抗性即存活下去者即為被轉(zhuǎn)化成功的幼苗。 4討論： 本研究利用了 USER fusion技術(shù)以擬南芥基因為基因模板克隆出 SUR1的啟動子基因， 并選用 pCambia 3300 為載體，成功的將 SUR1啟動子構(gòu)建到 CAMV35S啟動子的下游 ， 通過大腸桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌、農(nóng)桿菌侵染植物等步驟將下游連接 GUS基因的 SUR1啟動子轉(zhuǎn)入擬南芥中，對其進行組織定位的研究 。 轉(zhuǎn)錄的起始 ， 是基因表達的關(guān)鍵階段， 影響 基因表達的水平 ， 一般認(rèn)為目的基因上游約 2kb即包含目的基因啟動子片段，由于所需克隆的片段較長，本研究選用 USER fusion技術(shù)來完成這段目的基因的克隆。 USER fusion是一種 快捷而高效的方法，可以同時對復(fù)雜的 PCR產(chǎn)物進行融合和克隆。 由于本研究所涉及的 SUR1啟動子，所需克隆的基因長度達 2021bp，對這種長度的基因，傳統(tǒng)的 PCR方法難以克隆出準(zhǔn)確的目的基因，并且酶的效率也會變低。 但通過 USER fusion技術(shù)將片段分割成三部分同時分別克隆并在融合酶的作用下按原序列融合在一起。 從而得到了較長目的基因 —— SUR1啟動子的克隆產(chǎn)物。 USER fusion是一種簡單、快速、高效的技術(shù)，用以一步完成合成和克隆多重 PCR產(chǎn)物到載體之中。大大的節(jié)約了時間并提高了實驗的準(zhǔn)確性，為后續(xù)實驗的進行提供了優(yōu)越條件。 SUR1組織定位的意義 和其他已知的芥子油苷合成路徑中一些相關(guān)的基因的表達特異性進行對比，可以清楚的了解 SUR1基因在芥子油苷合成途徑中的功能意義，以及 SUR1基因時空表達的特異性。 由于 時間并未 進行到對其的 GUS染色處理， 進一步的實驗分析將在后續(xù)實驗中繼續(xù)進行討論。 SUR1 基因的組織定位 5參考文獻 [1] Fahey JW, Zalcmann AT, Talalay , 2021, 56( 1) : 5～ 51. [2] Halkier BA, Du Plant Sci, 1997, 11( 2) : 425～ 431. [3] Lykkesfeldt J, M!ller Physiol, 1993, 102( 2) : 609～ 613. [4] Chen SX, Andreasson Physiol Biochem, 2021, 39( 9) : 743～758. [5] Fahey JW, Zalcmann A T, Talalay P. The chemical diversity and distribution of glucosinolates and isothiocyanates among p lants. Phytochemistry, 2021, 66: 5 51. [6] Biosynthesis of glucosinolates – genediscovery and beyond ,2021, Plant Science [7] Kliebenstein D J. Secondary metabolites and p lant / environment interactions: a view through A rabidopsis thaliana tinged glasses. Plant, Cell and Environment, 2021, 27: 675 684. [8] USER fusion: a rapid and efficient method for simultaneous fusion and cloning of multiple PCR products,Nucleic Acids Research, 2021, Vol. 35, No. 7 e55 SUR1 基因的組織定位 致謝 ： 感謝全體實驗室同仁！ 李晶 導(dǎo)師淵博的專業(yè)知識，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，精益求精的工作作風(fēng)，誨人不倦的高尚師德，嚴(yán)以律己、寬以待人的崇高風(fēng)范，樸實無華、平易近人的人格魅力對我影響深遠。不僅使我樹立了遠大的學(xué)術(shù)目標(biāo)、掌握了基本的研究方法，還使我明白了許多待人接物與為人處世的道理。本論文從選題到完成，每一步都是在 李晶 導(dǎo)師 和師兄孔穩(wěn)穩(wěn) 的指導(dǎo)下完成的，傾注了 大量的心血。在此，謹(jǐn)向?qū)?及師兄 表示崇高的敬意和衷心的感謝 ! 本論文的順利完成，離不開各位老師、同學(xué)和朋友的關(guān)心和幫助。在此表示深深的感謝。
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