畢業(yè)論文—sur1基因的組織定位-資料下載頁(yè)
2025-06-06 13:58本頁(yè)面
【正文】 表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌， 挑取陽(yáng)性菌落 對(duì)其進(jìn)行菌落 PCR凝膠電泳，擴(kuò)增 SUR1啟動(dòng)子的第二段， 原理同結(jié)果。 SUR1 基因的組織定位 M 1 2 圖 7： M為 Marker， 2021bp,從上至下依次為： 202 1000、 750、 500、 250、100 2為挑取的單菌落 結(jié)果表明大小約 600bp，與預(yù)期結(jié)果相符，證明重組表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中 。 Basta篩選結(jié)果 用濃度為 1： 1 000的 Basta除草劑 噴灑四葉期的幼苗 進(jìn)行篩選 ，未轉(zhuǎn)化成功的幼苗由于不含抗 Basta除草劑基因而枯萎變黃被殺死；成活的即為轉(zhuǎn)化成功的幼苗。 SUR1 基因的組織定位 (A) (B) 圖 8 進(jìn)行 Basta篩選之前 （ A）為轉(zhuǎn)基因幼苗，（ B）為野生型空白對(duì)照 （ A） （ B） 圖 9 進(jìn)行 Basta篩選之后 （ A） 為轉(zhuǎn)基因幼苗，（ B）為野生型空白對(duì)照 SUR1 基因的組織定位 可以看出， （ B）組 野生型全部被 Basta殺死，枯萎變黃， （ A）組部分幼苗由于未被轉(zhuǎn)化成功，不含抗 Basta基因，遂也被殺死，枯萎變黃。剩余有 Basta抗性即存活下去者即為被轉(zhuǎn)化成功的幼苗。 4討論： 本研究利用了 USER fusion技術(shù)以擬南芥基因?yàn)榛蚰０蹇寺〕?SUR1的啟動(dòng)子基因， 并選用 pCambia 3300 為載體，成功的將 SUR1啟動(dòng)子構(gòu)建到 CAMV35S啟動(dòng)子的下游 ， 通過(guò)大腸桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌、農(nóng)桿菌侵染植物等步驟將下游連接 GUS基因的 SUR1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)入擬南芥中，對(duì)其進(jìn)行組織定位的研究 。 轉(zhuǎn)錄的起始 ， 是基因表達(dá)的關(guān)鍵階段， 影響 基因表達(dá)的水平 ， 一般認(rèn)為目的基因上游約 2kb即包含目的基因啟動(dòng)子片段，由于所需克隆的片段較長(zhǎng)，本研究選用 USER fusion技術(shù)來(lái)完成這段目的基因的克隆。 USER fusion是一種 快捷而高效的方法，可以同時(shí)對(duì)復(fù)雜的 PCR產(chǎn)物進(jìn)行融合和克隆。 由于本研究所涉及的 SUR1啟動(dòng)子，所需克隆的基因長(zhǎng)度達(dá) 2021bp，對(duì)這種長(zhǎng)度的基因，傳統(tǒng)的 PCR方法難以克隆出準(zhǔn)確的目的基因，并且酶的效率也會(huì)變低。 但通過(guò) USER fusion技術(shù)將片段分割成三部分同時(shí)分別克隆并在融合酶的作用下按原序列融合在一起。 從而得到了較長(zhǎng)目的基因 —— SUR1啟動(dòng)子的克隆產(chǎn)物。 USER fusion是一種簡(jiǎn)單、快速、高效的技術(shù)，用以一步完成合成和克隆多重 PCR產(chǎn)物到載體之中。大大的節(jié)約了時(shí)間并提高了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行提供了優(yōu)越條件。 SUR1組織定位的意義 和其他已知的芥子油苷合成路徑中一些相關(guān)的基因的表達(dá)特異性進(jìn)行對(duì)比，可以清楚的了解 SUR1基因在芥子油苷合成途徑中的功能意義，以及 SUR1基因時(shí)空表達(dá)的特異性。 由于 時(shí)間并未 進(jìn)行到對(duì)其的 GUS染色處理， 進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)分析將在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中繼續(xù)進(jìn)行討論。 SUR1 基因的組織定位 5參考文獻(xiàn) [1] Fahey JW, Zalcmann AT, Talalay , 2021, 56( 1) : 5～ 51. [2] Halkier BA, Du Plant Sci, 1997, 11( 2) : 425～ 431. [3] Lykkesfeldt J, M!ller Physiol, 1993, 102( 2) : 609～ 613. [4] Chen SX, Andreasson Physiol Biochem, 2021, 39( 9) : 743～758. [5] Fahey JW, Zalcmann A T, Talalay P. The chemical diversity and distribution of glucosinolates and isothiocyanates among p lants. Phytochemistry, 2021, 66: 5 51. [6] Biosynthesis of glucosinolates – genediscovery and beyond ,2021, Plant Science [7] Kliebenstein D J. Secondary metabolites and p lant / environment interactions: a view through A rabidopsis thaliana tinged glasses. Plant, Cell and Environment, 2021, 27: 675 684. [8] USER fusion: a rapid and efficient method for simultaneous fusion and cloning of multiple PCR products,Nucleic Acids Research, 2021, Vol. 35, No. 7 e55 SUR1 基因的組織定位 致謝 ： 感謝全體實(shí)驗(yàn)室同仁！ 李晶 導(dǎo)師淵博的專(zhuān)業(yè)知識(shí)，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，精益求精的工作作風(fēng)，誨人不倦的高尚師德，嚴(yán)以律己、寬以待人的崇高風(fēng)范，樸實(shí)無(wú)華、平易近人的人格魅力對(duì)我影響深遠(yuǎn)。不僅使我樹(shù)立了遠(yuǎn)大的學(xué)術(shù)目標(biāo)、掌握了基本的研究方法，還使我明白了許多待人接物與為人處世的道理。本論文從選題到完成，每一步都是在 李晶 導(dǎo)師 和師兄孔穩(wěn)穩(wěn) 的指導(dǎo)下完成的，傾注了 大量的心血。在此，謹(jǐn)向?qū)?及師兄 表示崇高的敬意和衷心的感謝 ! 本論文的順利完成，離不開(kāi)各位老師、同學(xué)和朋友的關(guān)心和幫助。在此表示深深的感謝。
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