動物組織培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)的基本條-資料下載頁
2025-05-12 09:11本頁面
【正文】 、 貼壁和擴展因子 等。 ? 無血清培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補充成分組成 。 ? 1975年 ， Sato首次成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株 ， 近20多年來已報道了幾十種細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中成功地生長和增殖 。 ? 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基的使用保證了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性 、 可重復(fù)性和穩(wěn)定性 ， 減少了細(xì)胞污染 ， 簡化了提純和鑒定各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序 。 向無清培養(yǎng)液中能促進細(xì)胞系生長的補加物都是獨特的 。適用于某種細(xì)胞株的培養(yǎng)液 ， 很可能不適合另一種細(xì)胞株的生長 。 即使 同源組織的不同細(xì)胞株 ， 所需 補加物 也不同 。 無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。 目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加血清。 ? 血清質(zhì)量好壞是實驗成敗的關(guān)鍵。 ? 常用血清有胎牛血潔、新生牛血清、小牛血情、兔血清、馬血清等，其中以胎牛血清質(zhì)量最好。 ? 優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染。 ? 血清的滅活（消除補體活性）： 56 ℃ ， 30 分鐘 ? 血清的消毒：過濾除菌 ? 抗菌素的使用： ? 在培養(yǎng)液配制后，培養(yǎng)液內(nèi)常加適量抗菌素，以抑制可能存在的細(xì)菌的生長。 ? 通常是青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位。 ? 慶大霉素：每毫升 100單位 —— 方便、廣譜、穩(wěn)定。 ? 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 80％一 95％ ? 血清 5％一 20％ ? 碳酸氫鈉 g/L ? 青、鏈霉素 各 100單位／毫升 完全培養(yǎng)基的組成 RPMI1640培養(yǎng)粉 1袋 碳酸氫鈉 g 青、鏈霉素 各 100單位／毫升 加三蒸水 至 1000ml, 過濾除菌； 調(diào)節(jié) pH值至 ； 加血清（終濃度 10％）。 培養(yǎng)基的配制 主要培養(yǎng)基 MEM：低限量 Eagle培養(yǎng)基 DMEM： Dulbecco’s Modified Eagle Medium，貼壁細(xì)胞 IMDM： Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium，密度低、 生長困難細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞 RPMI1640： Moor等研制成功，懸浮、腫瘤、原代、傳代 等細(xì)胞 19 109培養(yǎng)基： Man研制成功 Mccoy’s 5A：原代培養(yǎng)、難以培養(yǎng)的細(xì)胞 P3實驗室 (11樓 ) 10樓動物房 Ramp。D中試基地
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