【正文】 ～ 2 0 4 4 ～ ～ 2 0 5 4 ～ ～ 2 1 3 4 ～ ～ 2 1 4 4 ～ ～ 2 2 2 4 ～ ～ 2 2 3 4 ～ ～ 0 0 5 3 ～ ～ 0 1 4 3 ～ ～ 0 1 5 3 ～ ～ 0 2 3 3 ～ ～ 0 2 4 3 ～ ～ 0 2 5 3 ～ ～ “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國(guó)最大的學(xué)習(xí)資源平臺(tái)！ 免費(fèi)培訓(xùn) : 免費(fèi)下載 : 續(xù) 表 A2 組 1 組 2 或 組 3 組 4 t10????????＝劑量＝劑量＝劑量＝劑量 t10＝4劑 量＝3劑 量.163＝2劑 量.001＝1劑 量???????? 組 1 組 3 組 2 組 4 LD50 可信限 LD50 可信限 0 3 3 3 ～ ～ 0 3 4 3 ～ ～ 1 0 5 3 ～ ～ 1 1 4 3 ～ ～ 1 1 5 3 ～ ～ 1 2 3 3 ～ ～ 1 2 4 3 ～ ～ 1 3 3 3 ～ ～ 附 錄 B （規(guī)范性附錄） 反應(yīng)率－概率單位表 反應(yīng)率 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國(guó)最大的學(xué)習(xí)資源平臺(tái)！ 免費(fèi)培訓(xùn) : 免費(fèi)下載 : 附 錄 C （規(guī)范性附錄） 相當(dāng)于反應(yīng)率 0％及 100％的概率單位 每組動(dòng)物數(shù) 反應(yīng)率 每組動(dòng)物數(shù) 反應(yīng)率 0% 100% 0% 100% 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20 11 附 錄 D （規(guī)范性附錄） 急性毒性（ LD50）劑量分級(jí) 表 D1 急性毒性（ LD50）劑量分級(jí)表 大鼠口服 LD50， mg/kg 相當(dāng)于人的致死量 級(jí) 別 mg/kg g/人 極毒 1 稍嘗 劇毒 150 5004 000 中等毒 51500 4 00030 000 5 低毒 5015 000 30 000250 000 50 實(shí)際無(wú)毒 5 00115 000 250 000500 000 500 無(wú)毒 15 000 500 000 2 500 “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國(guó)最大的學(xué)習(xí)資源平臺(tái)！ 免費(fèi)培訓(xùn) : 免費(fèi)下載 : 附 錄 E （規(guī)范性附錄） 嚙齒動(dòng)物中毒表現(xiàn)觀察項(xiàng)目 表 E1 器 官 系 統(tǒng) 觀察及檢查項(xiàng)目 中 毒 后 一 般 表 現(xiàn) 中樞神經(jīng)系統(tǒng)及軀體運(yùn)動(dòng) 行為 改變姿勢(shì)，叫聲異常，不安或呆滯 動(dòng)作 震顫，運(yùn)動(dòng)失調(diào)，麻痹，驚厥，強(qiáng)制性動(dòng)作 各種刺激的反應(yīng) 易興奮，知覺(jué)過(guò)敏或缺乏知覺(jué) 大腦及脊髓反 射 減弱或消失 肌肉張力 強(qiáng)直，馳緩 自主神經(jīng)系統(tǒng) 瞳孔大小 縮小或放大 分泌 流涎，流淚 呼吸系統(tǒng) 鼻孔 流鼻涕 呼吸性質(zhì)和速率 徐緩，困難，潮式呼吸 心血管系統(tǒng) 心區(qū)觸診 心動(dòng)過(guò)緩，心律不齊，心跳過(guò)強(qiáng)或過(guò)弱 胃腸系統(tǒng) 腹形 氣脹或收縮，腹瀉或便秘 糞便硬度和顏色 糞便不成形，黑色或灰色 生殖泌尿系統(tǒng) 陰戶，乳腺 膨脹 陰莖 脫垂 會(huì)陰部 污穢 皮膚和毛皮 顏色，張力 發(fā)紅，皺折，松弛，皮疹 完整性 豎毛 粘膜 粘膜 流粘液，充血，出血性紫紺，蒼白 口腔 潰瘍 眼 眼瞼 上瞼下垂 眼球 眼球突出或震顫 透明度 混濁 其它 直腸或皮膚溫度 降低或升高 一般情況 姿勢(shì)不正常，消瘦 “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國(guó)最大的學(xué)習(xí)資源平臺(tái)！ 免費(fèi)培訓(xùn) : 免費(fèi)下載 : 附 錄 F （規(guī)范性附錄） 急性毒性試驗(yàn)記錄表 表 F1 、來(lái)源、性別 、形狀及處理 劑 量 mg/kg 動(dòng)物 編號(hào) 動(dòng)物 體重 (g) 灌胃容量 mL 出現(xiàn)中毒癥狀的時(shí)間 中毒癥狀 死亡時(shí)間 解剖所見(jiàn) 1 2 記錄者： “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國(guó)最大的學(xué)習(xí)資源平臺(tái)！ 免費(fèi)培訓(xùn) : 免費(fèi)下載 : 二、 鼠 傷寒沙門(mén)氏菌 /哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn) Salmonella Typhimurium/Mammals Microsomal Enzyme Test 1 范圍 本 方法 規(guī)定了 Ames 試驗(yàn)的基本技術(shù)要求。 本 方法 適用于評(píng)價(jià)保健食品的致突變作用。 本 方法 不適用于具有殺菌和 /或抑菌作用的受試物，不適用于具有妨礙哺乳動(dòng)物細(xì)胞復(fù)制系統(tǒng)的受試物。 2 原理 鼠傷寒沙門(mén)氏菌的突變型（即組氨酸缺陷型）菌株在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，在有組氨酸的培養(yǎng)基上可以正常生長(zhǎng)。但如在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)中有致突變物存時(shí)，則沙門(mén)氏菌突變型可回復(fù)突變?yōu)橐吧停ū憩F(xiàn)），因而在無(wú)組氨酸培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)，故可根據(jù)菌落形成數(shù)量，檢查受試物是否為致突變。某些需要代謝活化后才能使沙門(mén)氏菌突變型產(chǎn)生 回復(fù)突變，代謝活化系統(tǒng)可以用多氯聯(lián)苯（ PCB）誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿（ S9）制備的 S9 混合液。 3 儀器 實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。 低溫高速離心機(jī)，低溫冰箱（ 80℃）或液氮罐，潔凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫水浴，蒸氣壓力鍋，勻漿器等。 4 試劑 培養(yǎng)基成分或試劑除說(shuō)明外至少應(yīng)是化學(xué)純，無(wú)誘變性。避免重復(fù)高溫處理，選擇適當(dāng)保存溫度和期限，如肉湯保存于 4℃不超過(guò)六個(gè)月，其它詳見(jiàn)下述各培養(yǎng)基及溶液說(shuō)明。 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 牛肉膏 g 胰胨 (或混合蛋白胨 ) g 氯化鈉 g 磷酸氫二鉀（ K2HPO4 3H2O） g 蒸餾水 500 mL 加熱溶解，調(diào) pH 至 ，分裝后 MPa 20 min 滅菌，普通冰箱保存?zhèn)溆?，保存期不超過(guò)半年。 營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基：用作 a．基因型鑒定的結(jié) 晶紫敏感試驗(yàn)，抗氨芐青霉素和四環(huán)素試驗(yàn)，紫外線敏感性試驗(yàn)。 b．細(xì)菌活力鑒定。 瓊脂粉 g 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 100 mL “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國(guó)最大的學(xué)習(xí)資源平臺(tái)！ 免費(fèi)培訓(xùn) : 免費(fèi)下載 : 加熱融化后調(diào) pH 為 ， MPa 20 min 滅菌。 底層培養(yǎng)基所需試劑及配制方法如下： 磷酸鹽貯備液 磷酸氫鈉銨（ NaNH4HPO4 4H2O） g 檸檬酸（ C6H8O7 H2O） g 磷酸氫 二鉀（ K2HPO4） g 硫酸鎂 1) （ MgSO4 7H2O） g 加蒸餾水至 100mL， MPa 20min 滅菌。 注： 1)待其他試劑完全溶解后再將硫酸鎂緩慢放入其中繼續(xù)溶解，否則易析出沉淀。 40％葡萄糖溶液 葡萄糖 g 加蒸餾水至 100mL， MPa 20min 滅菌。 ％瓊脂培養(yǎng)基 瓊脂粉 g 加蒸餾水至 400 mL 融化后 20min 滅菌。 底層培養(yǎng)基 (無(wú)菌操作 ) 趁熱（ 80℃），在滅菌瓊脂培養(yǎng)基中（ 400 mL）依次加入： 磷酸鹽貯備液 8 mL 40％葡萄糖溶液 20 mL 充分混勻，待涼至 80℃左右時(shí)倒平皿，每皿（ φ 90 mm） 25 mL， 37℃ 培養(yǎng)過(guò)夜以除去水分及檢查有無(wú)污染。 頂層培養(yǎng)基的成分及制備 頂層瓊脂 瓊脂粉 g 氯化鈉 g 加蒸餾水至 500 mL mmol／ L 組氨酸 —生物素溶液 (誘變?cè)囼?yàn)用 ) D生物素（分子量 244） mg L組氨酸（分子量 155） mg 加蒸餾水至 250 mL。 頂層培養(yǎng)基制備：加熱融化頂層瓊脂，每 100mL 頂層瓊脂中加 10mL mmol／ L組氨酸－生物素溶液?；靹颍盅b在 100mL 三角瓶中， MPa 20 min 滅菌。用時(shí)融化分裝小試管，每管 2mL，在 45℃水浴中保溫。 特殊試劑和培養(yǎng)基的配制 ％ 氨芐青霉素溶液（鑒定菌株用，無(wú)菌配制） 稱取氨芐青霉素 40mg，用 ，保存于冰箱。 ％ 結(jié)晶紫溶液（鑒定菌株用）