【導(dǎo)讀】中藥，屬于辛溫解表藥。主產(chǎn)于湖北、江蘇、湖南、浙江、安徽等地。油、生物堿類、糖類、黃酮類等成分，有降氣消痰、平喘、潤腸之功能。脂、止咳平喘、抗過敏、抗衰老等藥理作用。因此其有效成分的提取分離對于紫蘇子應(yīng)。用于臨床具有重要意義。本文應(yīng)用回流提取法對紫蘇子有效成分進(jìn)行提取，提取物主要。是脂肪油、黃酮類化合物、多酚類化合物等。然后分別應(yīng)用硅膠柱色譜分離方法、葡聚。糖凝膠柱色譜分離方法對其有效成分進(jìn)行分離。分離物做薄層分析并查閱文獻(xiàn)可知得到?？Х人?、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素等成分。

　　

【正文】 NaOHNaCl 溶液 浸泡凝膠柱，然后用蒸餾水洗至中性。實驗完畢后，可對凝膠柱進(jìn)行回收，方法是將用過的凝膠柱抽濾，抽干后用乙醇洗，烘干即可。 （三） 實驗操作過程 Sephadex LH20 葡聚糖凝膠柱 色譜 ： （ 1） 樣品的制備：取少于 2g 過硅膠柱得到的樣品，用 2ml 甲醇溶解，備用。 （ 2） 裝柱及上樣：將 100g 葡聚糖凝膠用甲醇侵泡一宿，使其充分溶脹；在（規(guī)格）色譜柱底部塞入一團(tuán)棉花，傾入四分之一體積甲醇溶液后，將凝膠一次性倒入柱中，不停的敲打柱子外側(cè) ，在凝膠頂部放一小塊濾紙，并不斷加入甲醇，使其壓實。 （ 3） 洗脫：采用甲醇為洗脫劑，直到洗脫完畢。每 10mL 收集一份洗脫液并進(jìn)行編號。 （ 4） 檢驗：展開系統(tǒng)為正己烷：甲苯：乙酸乙酯：甲酸 = 2： 5::。噴 10%硫酸乙醇顯色劑后于烘箱內(nèi)烘干 10 分鐘，將相同的成分合并到一起。最終得到 5組單獨的成分，其薄層色譜圖如下： 紫蘇子有效成分的提取分離 17 圖 41 紫蘇子分離物的薄層色譜圖 第五章 紫蘇子的有效成分 實驗在提取過程中紫蘇子經(jīng)粉碎后先用石油醚提取有效成分脂肪油、隨后殘渣用乙醇提取的有效成分黃酮類化合物。分離時得到 五種產(chǎn)物，經(jīng)過薄層分析后得到五個點，查閱文獻(xiàn)后得知： a為咖啡酸， b 為迷迭香酸， c為木犀草素， d為芹菜素， e為未知化合物。下面將對各種成分進(jìn)行簡單介紹。 一、 提取過程得到的成分 （一） 脂肪油 紫蘇子中的脂肪油含量較高，實驗用石油醚提取后得到的含量較多。經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知該脂肪油的碘值 , 皂化值均較大 ,脂肪油中的脂肪酸主要為多烯不飽和脂肪酸且不飽和程度較高 [19] 。其中的亞油酸經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知他與紫蘇子具有降氣平喘、鎮(zhèn)咳等藥理作用有關(guān)；亞麻酸與增強(qiáng)記憶力、延緩衰老、抗過敏、抗血栓、抑制癌細(xì)胞的藥理作用有關(guān)。因 此紫蘇子中脂肪油的提取対紫蘇子應(yīng)用于治療疾病具有重要作用。 紫蘇子有效成分的提取分離 18 （二） 黃酮類化合物 實驗應(yīng)用乙醇對紫蘇子中的黃酮類化合物進(jìn)行提取。根據(jù)所學(xué)知識和查閱文獻(xiàn)對黃酮類化合物做了進(jìn)一步的了解，下面對其進(jìn)行介紹。 黃酮類化合物是指基本母核為 2苯基色原酮的化合物，分子結(jié)構(gòu)中含有兩個具有酚羥基的苯環(huán)（ A 環(huán)和 B 環(huán)），還具有 C 環(huán)。黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中常連接有酚羥基、甲氧基、甲基、異戊烯基等官能團(tuán)。此外，它還常與糖結(jié)合成苷。根據(jù)中央三碳鏈的氧化程度、 B環(huán)連接位置（ 2或 3位）以及三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀等特點，可將主要的天然黃酮類 化合物分類：黃酮類、異黃酮類、黃酮醇類、魚鱗酮類、二氫黃酮類、紫檀素類二氫黃酮醇類、橙酮類、花色素類、異橙酮類、黃烷 3醇類、高異黃酮類、黃烷 3， 4二醇類、雙苯吡酮類、查爾酮類和二氫查爾酮類（ biflavonoids）等十六種。 黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體，黃酮苷類多為無定型粉末。天然黃酮類化合物大多數(shù)以黃酮苷的形式存在，形成苷后在極性溶劑中溶解度變大，在非極性溶劑中溶解度較小。因此實驗中用乙醇對其進(jìn)行提取，在用石油醚提取時對其沒有影響。黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中含有較多酚羥基，因此多顯酸性，此性質(zhì)可用于分 離操作。由于含有較多酚羥基及 r吡喃酮環(huán)的存在，黃酮類化合物會發(fā)生顯色反應(yīng)。首先是鹽酸 鎂粉反應(yīng)，多用于鑒別黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇類化合物，顏色顯橙色 紫紅色，少數(shù)顯紫 藍(lán)色；其次是四氫硼鉀反應(yīng)，用于鑒別二氫黃酮類，顏色顯紫色 紫紅色；再次是金屬類試劑的絡(luò)合反應(yīng)，如鋁鹽反應(yīng)用于鑒別 3， 5 二酚羥基類黃酮類化合物且多顯黃色，鉛鹽用于鑒別鄰二酚羥基或 3OH、 4 酮基或 5OH、 4酮基結(jié)構(gòu)的化合物且多顯黃色 紅色，鎬鹽 枸櫞酸鈉用于鑒別 3OH或 5OH的存在且顯黃色，還有鎂鹽、氯化鍶、三氯化鐵等反應(yīng) ；然后是硼酸顯色反應(yīng)，在無機(jī)酸或有機(jī)酸存在條件下，黃酮類化合物可與硼酸反應(yīng)生成亮黃色；最后還有堿性試劑顯色反應(yīng)。 紫蘇子中提取出的黃酮類化合物具有降低血脂與膽固醇、降血壓、抗血栓、抗肝臟病毒、抗炎、抗菌及抗病毒、瀉下、解痙、雌性激素樣作用等。因此黃酮類化合物的提取對于紫蘇子應(yīng)用于臨床也具有至關(guān)重要的作用。 紫蘇子有效成分的提取分離 19 二、 分離過程得到的成分 （一） 咖啡酸 由咖啡酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)可知 咖啡酸 中含有 苯環(huán) ， 碳碳雙鍵 ，酚 羥基 和 羧基 。所以 咖啡酸 能發(fā)生 取代反應(yīng) （ 苯環(huán) ），能發(fā)生 加成反應(yīng) （ 碳碳雙鍵 ），易被氧化（酚 羥基 ），能和堿以及一些鹽反應(yīng)，還能發(fā)生 酯化反應(yīng) （ 羧基 ）。 咖啡酸存在于許多中藥中，常制成咖啡酸片。經(jīng)查閱文獻(xiàn)咖啡酸的藥理作用有抗菌抗病毒作用，具有廣泛的抑菌作用，能治療脊髓炎、流感病毒等，還具有抗蛇毒作用，經(jīng)口服或腹腔注射時，可提高中樞興奮性，并有縮短血凝及出血時間的作用。但還具有毒性，使用時應(yīng)注意。 （二） 迷迭香酸 迷迭香酸為淺黃色粉末 、 溶于水 ，由于分子結(jié)構(gòu)中含有酚羥基所以 遇三氯化鐵 鐵氰化鉀溶液顯藍(lán)綠色。經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知迷迭香酸的藥理作用有抑菌作用，對細(xì)菌、真菌、霉菌都有一定的抑制作用。此外迷迭香酸還具有抗炎作用，對腎炎、肝炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎、牙周炎、皮炎等炎癥都有抑制作用。經(jīng)研究調(diào)查顯示，迷迭香酸在抗病毒、抗癌抗腫瘤、抗過敏、抗氧化、抗血栓抗血小板凝集、抗抑郁、防輻射防紫外線、免疫抑制等藥理學(xué)領(lǐng)域均有很好的作用 [20]。 廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等方面 。 迷迭香酸在植物中分布廣泛，主要分布于 唇形科 、 紫草科 、 傘形科 、葫蘆科和椴樹科等多種植物中。迷迭香酸在不同屬的植物中含量有較大差別，即使在同種植物中，不同部位的含量也不相同 。 （三） 木犀草素 木犀草素（ luteolin）是一種天 然黃酮類化合物，存在于多種植物中。具有多種藥理活性，經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知木犀草素具有抗炎、抗腫瘤、抗過敏、抗炎癥性脫髓鞘疾病、抗纖維化、抗生育與激素作用。木犀草素體內(nèi)可以抑制 血管內(nèi)皮生長因子 （ VEGF）誘導(dǎo)的兔角膜血管的生成；可以顯著抑制血小板源性生長因子 BB（ PDGFBB）誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞的增殖和 DNA 合成，可以阻滯細(xì)胞周期于 G1 期 [21]。可以濃度依賴地降低苯腎上腺素 預(yù)收縮血管的張力，拮抗高鉀引起的血管收縮，具有動脈舒張作用，且其舒紫蘇子有效成分的提取分離 20 血管作用為非內(nèi)皮依賴性，其作用機(jī)制與直接抑制電壓依從性鈣通道、受體操縱性鈣通道、細(xì)胞內(nèi)鈣釋放，以及激活鉀通道有關(guān)，而與 α、 β 受體無關(guān)。臨床木犀草素用于止咳、祛痰、消炎，并有較好的療效。木犀草素在自然界中分布廣泛，因最初是從 木犀草科 （ Resedaceae） 木犀草屬 草本植物 木犀草 （ ResedaodorataL.）的葉、莖、枝中分離出而得名，可從多種天然藥材、蔬菜果實中分離得到。 （四） 芹菜素 芹菜素為黃色針狀結(jié)晶在水中 幾乎不溶，在稀堿溶液中溶解。經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知其屬于黃酮類且藥理作用具有抗癌作用，可用于治療 HIV、消炎作用，能消滅許多種原因引起的炎癥、抗氧化劑作用；鎮(zhèn)靜、安神；降壓等作用。芹菜素主要存在于 瑞香科 、 馬鞭草科 、 卷柏科 植物中，如 芫花 ， 卷柏 中含量較大。此外廣泛存在于多種水果、蔬菜、豆類和茶葉 ,玄參科植物 水蔓青 ,蓼科虎杖 ,百合科毛葉藜蘆 ,松科植物中。 紫蘇子有效成分的提取分離 21 結(jié)論 本篇論文研究的是紫蘇子有效成分的提取分離，試驗采用的提取方法是回流提取法，回流提取法在中藥有效成分的提取運(yùn)用過程中雖較為廣泛，但較為傳統(tǒng)，目前的提取工藝?yán)缑柑崛》?、超?波萃取法等技術(shù)較為先進(jìn)，因此實驗為了得到更好的效果應(yīng)選擇較先進(jìn)的技術(shù)。實驗提取分離過程的成分對于藥物的應(yīng)用有著很重要的作用，因此此論文對于紫蘇子的應(yīng)用較為重要。分離實驗過程選擇的方法較為實用，使紫蘇子有效成分提取得當(dāng)，對于其研究有較重要的作用。此分離方法不僅適用于紫蘇子，而且適用于大多數(shù)中藥產(chǎn)品?？偟膩碚f，本篇論文的提取方法較為落后，分離方法有較大前景。論文對紫蘇子的有效成分進(jìn)行了初步分析，發(fā)現(xiàn)了紫蘇子的許多藥用價值，但是紫蘇子的研究還較初級，有待于相關(guān)專業(yè)人士對此中藥產(chǎn)品進(jìn)行進(jìn)一步的分析，這樣不僅對于此藥 物的臨床應(yīng)用有較大意義，而且對于所有中藥的研究都有重要的意義。 紫蘇子有效成分的提取分離 22 參考文獻(xiàn) [1] 蔡紅梅 , 宋寧 .紫蘇子油理化特性及脂肪酸組成的研究 [J].青海科技 ,2020,23(4):4849. [2] 王永奇 , 趙宇峰 , 李曼杰等 .紫蘇的研究 Ⅳ :紫蘇子的化學(xué)成分研究 [J].長白山中 醫(yī) 藥研究與開發(fā) ,1993,2(4):2829. [3] 譚亞芳 , 賴炳森 , 顏曉林等 .紫蘇子油中脂肪酸組成的分析 [J].中國藥學(xué)雜志 ,1998,33(7):400402. [4] 王映強(qiáng) , 賴炳森 , 路萍等 .GC/MS 分析紫蘇子與亞麻子脂肪酸成分 [J]. 中國生化雜志 ,1999,20(2):6264. [5] 彭小玉 , 鄧煥彩 .紫蘇子化學(xué)成分初探 [J].江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報 ,1997,37(4):205106. [6] 張衛(wèi)明 , 劉月秀 , 王紅 .紫蘇子的化學(xué)成分研究 [J].中國野生植物資源 ,1998,17(1):4244. [7] 王天元 . 紫蘇子皮提取物中抗氧化性成分及作用研究 [J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè) ,2020,22(1):6367. [8] 楊 曉靜 , 王立眾 , 李和 . 紫蘇子 油不皂 化物 的分離 與分析 [J]. 中國油 料作物 學(xué)報 ,2020,28(2):207209. [9] 殷朝洲 , 李保存 , 朱來汀等 .紫蘇的開發(fā)與利用 [J].杭物雜志 ,1990,20(4):1822. [10] 陳棟染 , 劉莉 , 黃剛 . 紫蘇油及大豆肽合劑對大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用 [J].臨床心血管雜志 ,2020,19(1):3032. [11] 譚曉華 , 葉麗明 , 葛發(fā)歡 . 紫蘇子油的超臨界 CO2 萃取及藥效學(xué)研究 [J]. 中藥材 ,1999,22(10):520523. [12] 郭英 , 蔡香成 , 李華娟 .紫蘇子油和松子油對大鼠機(jī)能脂類和脂質(zhì)過氧化的影響 [J].營養(yǎng)學(xué)報 ,1996,18(3):268. [13] 周丹 , 韓大慶 , 王永 奇 .紫蘇子油對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響 [J].中草藥 ,1994,25(5):251252. [14] 徐章華 , 邵玉芬 .α亞麻酸對大鼠行為、視網(wǎng)膜及肝腦脂肪酸構(gòu)成的影響 [J].中國公共衛(wèi)生 ,2020,18(3): 301303. [15] 王永奇 , 王威 .紫蘇油抗過敏炎癥的研究 [J].中草藥 ,2020,32(1):8385. [16] 王映強(qiáng) , 賴炳森 , 顏曉林等 .GC/MS 分析紫蘇子與亞麻子脂肪酸成分 [J].中國生化藥物雜志 ,1999,20(2):6264. [17] 劉洪旭 , 陳海濱 , 吳春敏 .紫蘇子的研究進(jìn)展 [J].海峽藥學(xué) ,2020,16(4):57. [18] 武俊杰 , 吾滿江艾力 , 劉力等 .γ輻射對α 亞麻酸氧化反應(yīng)的影響 [J].中國科學(xué)院研究生院學(xué)報 ,2020,22(6):695699. [19] Zhou HL, Chen JL, Zhang XS, et al. Study of oxidating mechnism of unsaturated fatty acid[J].West Leather,2020,4:2327(in Chinese with English abstract). [20] 范亞葦 , 鄧澤元 , 余永紅等 .不同脂肪酸甲酯化方法對共軛亞油酸分析的影響 [J].中國油紫蘇子有效成分的提取分離 23 脂 ,2020,32(1):5255. [21]崔向青 , 趙淑平 , 楊向竹等 .使用 GCMS 技術(shù)分析紫蘇揮發(fā)油成分 [J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報 ,2020,25(4):4647. 紫蘇子有效成分的提取分離 24 致謝 本篇論文能夠順利完成離不開許多人的幫助。首先我要感謝的是我的畢業(yè)論文導(dǎo)師劉麗娟老師，論文的選題及設(shè)計實驗的思路都是由老師幫忙完成的，并且在實驗進(jìn)行過程中老師悉心教導(dǎo)，幫我解決了許多問題，為幫我完成實驗， 傾注了導(dǎo)師大量的心血。 在此，謹(jǐn)向?qū)煴硎境绺叩木匆夂椭孕牡母兄x！其次，我要感謝的是我的學(xué)姐宋婷婷。除了老師的幫助，學(xué)姐給我的幫助也非常多。在實驗過程中，學(xué)姐對每一步的實驗操作都對我進(jìn)行了 指導(dǎo)并對每一步的原理及操作要點都進(jìn)行了詳細(xì)講解。通過學(xué)姐的幫助，我不僅對此實驗的操作步驟有了詳細(xì)的了解，而且對于相似的實驗我都有了思路。在此對學(xué)姐也表示由衷的感謝！最后我要感謝所有在我做畢業(yè)論文的這段時間對我進(jìn)行幫助的人這些人有學(xué)姐張旭杰、同學(xué)張微微、張文娟、王雙雙、劉星、高妍、曹麗穎、杜春雪、崔心蕾。